V Международный молодежный медицинский конгресс

Молекулярная биология и медицина: генетика, иммунология, протеомика, нейробиология, бионанотехнологии

139

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

M.A. Amonbekov

THE GENOGEOGRAPHIC RESEARCH OF THE POPULATION OF THE REPUBLIC OF TAJIKISTAN - RESEARCH OF GROUP OF BLOOD & Rh FACTOR OF THE PAMIRS POPULATION

(научный руководитель - Candidate of biological sciences, assistant A.T. Ashurov)

Avicenna Tajik State medical university Dushanbe, Republik of Tajikistan

Введение. The relevance of the anthropogenetic problems is evidenced by the numerous studies carried out in many parts of the world. Genogeographic research and findings on the genetic structure of human populations on blood groups and rhesus factors may provide a basis for the formation of a comprehensive understanding of the human gene pool, including the population of Tajikistan.

Usually, we are reminded on this during searching for a donor, while recent studies indicate that the value of the groups of blood is not limited to such cases. Blood group can play an important role in disease prevention and health maintenance.

Цель. The purpose of this study is to examine the blood group system AB0 and Rh factor of the population of the Republic of Tajikistan, living in different ecological areas, and to conduct a comparative analysis based on these features.

Материалы и методы. The standard blood serum of more than 800 people living in different areas of the Pamir were used to study the blood group system AB0 and Rh. Materials for the study were collected with the support of the Blood Transfusion Diagnostic Center at the regional hospital in the Khorog town, Gorno-Badakhshan Autonomous Oblast .

Blood groups and Rh factors of the population were determined by the standard technique tsoliklon.

Результаты. . The study of the frequency of erythrocyte blood group ABO, Rh population of the population of Pamir starts to provide extremely important results, creating the idea of the uniqueness of the gene pool of the population of Gorno-Badakhshan. Based on the signs of the group of blood it can be determined that the blood group I is in men in the percentage of 29%, and for women - 35 %, i.e. 6% less than in men. Blood group II in men is 42 % , and for women - 40 %, blood group III in men is only 19 % , and for women - 18%. Blood group IV in men is 10 %, and 7% in women. The second and third groups of the blood of men and women correlate slightly in percentage.

On the basis of the Rh factor the data are as following: Rh + among men is 89 % , among women - 73 %; Rhamong men is 11% and among women - 27%, that is, Rhnegative factor in women 16% higher than in men.

Выводы. Thus, the results of our study have shown that the diversity of the gene pool of the population of the Pamir on blood groups and rhesus factors is the result of not only the geographical isolation of these groups, but also of traditions of some families that have survived over the years.

However, for the final confirmation of these assumptions it is necessary to conduct research covering large groups of people living in different areas of Tajikistan.

А.А. Амангулова Иммунологический гомеостаз при профессиональном воздействии бериллия

(научный руководитель - д.м.н., доц. М.А. Газалиева)

Карагандинский государственный медицинский университет Караганда, Казахстан

Введение. Изучение состояния здоровья не может проводиться в отрыве от оценки влияния на организм факторов производства, которые приводят к изменению защитно-приспособительных механизмов, среди которых важное место занимает иммунная система.

Цель. Изучение неблагоприятного влияния условий труда бериллиевого производства на состояние иммунного статуса работающих.

Материалы и методы. Оценку состояния иммунного статуса проводили 50 обследуемым. Определение основных популяций лимфоцитов, наличие апоптоза нейтрофилов и лимфоцитов осуществляли стрептавидин-биотиновым методом, сенсибилизации к химическим соединениям реакцией специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ) с гидроокисью бериллия (Be (OH)2) и фторбериллатом аммонием (FВеNH4).

Результаты. В группе практически здоровых рабочих показатели РСАЛ на FВеNH4 составили 0,12±0,04%, на Be (OH)2 0,10±0,03%. Отмечалось определенное напряжение иммунной системы в виде увеличения общего количества лимфоцитов до 39,16±12,28%, снижения уровня CD3–лимфоцитов до

140

V Международный молодежный медицинский конгресс

43,52±7,84% за счет CD4 клеток (до 42,72±9,18%) и повышения относительного количества CD56. Количество СD8 уменьшалось до 12,8±10,68%, что, возможно, отражало риск развития аутоиммунных процессов.

Выводы. Выявленные изменения иммунной системы у рабочих бериллиевого производства диктуют необходимость ее изучения и выработки комплекса мероприятий, направленных на предупреждение возникновения заболеваний.

А.Б. Калимбетова ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ СТВОЛОВЫХ

КЛЕТОК В ЛЕЧЕНИИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (ИНДУЦИРОВАННЫЕ ПЛЮРИПОТЕНТНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ )

(научный руководитель - к.м.н., и.о. доц. Толеуова А.С.)

Карагандинский государственный медицинский университет Караганда, Казахстан

Введение. Введение: индуцированные плюрипотентные стволовые клетки по своим базисным характеристикам относятся к категории плюрипотентных и могут применяться в медицинской практике.

Цель. Цель: разработка методов тестирования полноты дифференцировки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток.

Материалы и методы. Материалы и методы: сравнительные методы исследования эмбриональных стволовых клеток с генетически модифицированными стволовыми клетками.

Результаты. Результаты и выводы: при длительном культивировании линии индуцированных плюрипотентных стволовых клеток остаются стабильными. Процесс возвращения в плюрипотентное состояние завершается, а спонтанная дифференцировка не начинается. Созданы персонифицированные линии для конкретных пациентов.

Выводы. Результаты и выводы: при длительном культивировании линии индуцированных плюрипотентных стволовых клеток остаются стабильными. Процесс возвращения в плюрипотентное состояние завершается, а спонтанная дифференцировка не начинается. Созданы персонифицированные линии для конкретных пациентов.

А.К. Смирнов СОЗДАНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ПОИСКА АКТИВАТОРОВ АМФК

(научный руководитель - д.б.н., проф. Н.А. Барлев)

Санкт-Петербургский государственный технологический институт (Технический университет) Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. АМФ-активируемая протеинкиназа (АФМК) играет важную роль в регуляции метаболических процессов в клетке. При активации АМФК запускает метаболизм жирных кислот и глюкозы, что может быть использовано при лечении диабета, излишнего веса и других заболеваний. Таким образом, актуальным направлением современной медицинской химии является поиск активаторов АМФК. Для решения этой задачи необходимо создание клеточной тест-системы, позволяющей выявить вещества, специфично активирующие АМФК. Работа предполагаемой нами тест-системы основана на явлении FRET (флуоресцентного резонансного переноса энергии) при активации АМФК.

Цель. Создать тест-систему, позволяющую проводить высокоинформативный скрининг потенциальных активаторов АМФК на клетках.

Материалы и методы. Для создания тест-системы был сконструирован вектор, содержащий нуклеотидные последовательности двух флуоресцентных белков, пептида smA, фосфорилируемого АМФКкиназой и домена FHA, узнающего фосфотреонин в пептиде smA. Конструкция была создана с использованием методов молекулярного клонирования (ПЦР, рестрикция, лигирование).

Результаты. Получены векторы, содержащие конструкции с различными парами флуоресцентных белков, а также с наличием и без сигнала ядерной локализации.

Выводы. Полученная конструкция будет использована для высокоинформативного скрининга активаторов АМФК на аппарате Оперетта или других приборах, позволяющих детектировать FRET.

141

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

А.С. Емельянов

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ CRP (C3872T) и IL-10 (G1082A) У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С

(научный руководитель - д.м.н., проф. Ю.А. Витковский)

Читинская государственная медицинская академия Чита, Российская федерация

Введение. В реализации иммунного ответа существенную роль играет генетический полиморфизм медиаторов воспаления. Облигатными участниками воспалительного процесса являются IL-10 и CRP.

Цель. Изучение частоты аномальных аллельных вариантов IL-10 (G1082A) и CRP(C3872T) у больных с циррозом печени в исходе ХВГС.

Материалы и методы. Клинико-лабораторные наблюдения проведены у 22 пациентов с циррозом печени в исходе ХВГС (12 мужчин и 10 женщин), средний возраст 33±4 года. Критерии исключения – наличие тяжёлой соматической патологии, токсического и аутоиммунного гепатита. У всех пациентов диагностирован цирроз печени, класс А по Чайлд–Пью в исходе ХВГС I- II ст. активности, в стадию компенсации. В качестве контрольной группы обследовано 100 условно-здоровых жителей Забайкалья. Группы сопоставимы по полу и возрасту. По национальной принадлежности все объекты исследования - русские, родившиеся и проживающие на территории Забайкальского края. Определение полиморфизма генов IL-10(G1082A) и СRP(С3872Т) осуществлялось методом ПЦР. Анализу подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной крови с помощью реагента «ДНК-экспресс-кровь», затем проводилась реакция амплификации с двумя парами аллельспецифических праймеров. Электрофорез проводили в агарозном геле. Исследованный контингент проверяли на соответствие закону Харди-Вайнберга. Статистическая обработка полученных данных выполнена методами вариационной статистики для связанных и несвязанных между собой наблюдений с использованием пакета электронных программ Microsoft Office Excel 2007, STATISTICA 6,0 (StatSoft Inc., США), с определением достоверности различий при достигнутом уровне значимости p<0,05. При ненормальном распределении признака применяли критерий МаннаУитни (U-тест). Для сравнения частот применялся критерий c2 (Пирсона). Разницу считали достоверной при р<0,05.

Результаты. Установлено, что среди здоровых лиц частота встречаемости аллели G гена IL-10 (G1082A) составляла 0,94, а аллели А – 0,06. Распределение генотипов у здоровых резидентов оказалось следующим: генотип GG встречался в 92% , GA – в 6%, AA – в 2 % случаев. Распределение генотипов отклонялось от ожидаемого по критерию Манна-Уитни (U-тест, р< 0,05). У пациентов с циррозом печени в исходе хронического вирусного гепатита C аллель A встречалась с частотой 0,25, аллель G – 0,75 (c2 = 15,27; р<0,05). У них - генотип GG выявлен в 74%, AA – 26% случаев, при этом гетерозиготы не обнаружены. Полиморфизм гена С-реактивного белка (C3872T) среди здоровых характеризовался преобладанием частоты аллели С – 0,93, тогда как аллель Т встречалась с частотой 0,07 (c2 = 5,32; р<0,05). Генотип СС выявлен в 92%, СТ – 2%, ТТ – 6% случаев. У больных с циррозом печени мы не выявили аллели Т. Все пациенты оказались гомозиготами СС (р<0,05).

Выводы. 1.У больных с циррозом печени в исходе ХВГС аллель А полиморфизма гена IL10 (G1082A) и генотип АА встречается чаще, чем у здоровых лиц. 2.У пациентов с циррозом печени в исходе хронического вирусного гепатита C наблюдается носительство только С-аллели генотип СС полиморфизма гена CRP (C3872T).

А.С. Омаров Роль общего иммуноглобулина Е в выявлении пищевой аллергии

(научный руководитель - д.м.н., доц. М.А. Газалиева)

Карагандинский государственный медицинский университет Караганда, Казахстан

Введение. В последние годы отмечается значительный рост пищевой аллергии, диагностика которой представляет определенные трудности в ввиду широкого спектра провоцирующих факторов. По некоторым данным аллергические реакции на пищу протекают без увеличения концентрации общего иммуноглобулина E (IgE) в крови, а значит, данный метод не может быть использован в диагностике пищевой аллергии.

Цель. Выявить корреляционную связь между повышенным содержанием общего IgE и наличием подтвержденной пищевой аллергии .

Материалы и методы. Определение содержания общего IgE в сыворотке крови было проведено 70

142

V Международный молодежный медицинский конгресс

пациентам в возрасте от 20 до 60 лет. При проведении тщательного сбора аллергологического анамнеза устанавливалось наличие пищевой аллергии, согласно чему было выделено 2 группы (25 человек с наличием и 45 с отсутствием пищевой аллергии).

Результаты. В первой группе отмечалось повышенное содержание общего IgE у 83% пациентов, во второй - только у 29% исследуемых.

Выводы. Принимая во внимание трехкратную разницу (83% против 29%) в количестве случаев повышения содержания общего IgE в двух исследуемых группах, можно говорить об актуальности данного метода, по крайней мере, для первого этапа диагностического поиска при пищевой аллергии.

А.Ч. Чегембаев

СЫВОРОТОЧНАЯ КОНЦЕНТРАЦИЯ CD40L У ДЕТЕЙ С ТРАВМОЙ СЕЛЕЗЕНКИ И У ПАЦИЕНТОВ, ПЕРЕНЕСШИХ СПЛЕНЭКТОМИЮ

(научный руководитель - д.м.н., проф. З.Ф. Хараева)

Кабардино-Балкарский Государственный университет Нальчик, Российская Федерация

Введение. На современном этапе селезенка рассматривается, как важный иммуный орган. Одним из биоактивных веществ синтезируемых в ткани органа является CD40L. Он активно участвует в развитии воспаления и стимуляции пролиферации В-лимфоцитов.

Цель. Целью исследования стало сравнение уровня CD40L в сыворотке у детей с травмой селезенки с сохраненным органом и у детей со спленэктомией.

Материалы и методы. Для исследования были взяты образцы сыворотки у двух групп с травмой селезенки, получивших лечение в ДХО РДКБ в промежутке с 1996 по 2007 гг.

Первая группа: дети получавшие консервативное лечение. В группу входил 21 человек, возраст от 7 до 19 лет, преобладали мальчики n=13(62%).

Вторая группа: пациенты со спленэктомией. В группу входили 18 человек, возраст от 18 до 26 лет преобладали мужчины, n=11(61%). У всех пациентов проведено ИФА исследование определение уровня CD40L (Human sCD40 ELISA BMS265,Bender MedSystems).

Статистическая обработка полученных данных проводилась стандартными методами.

Результаты. В первой группе средний показатель составил 128 пг\мл, что в среднем на 35% выше возрастной нормы (р>0.8).

Во второй группе средний показатель составил 18.08 пг\мл, что в среднем на 83 % ниже возрастной нормы (р<0,01).

Выводы. Выводы: В случае с группой пациентов со спленэктомией обнаружено резкое падение уровня СD40L в отдаленный период. Снижение уровня CD40L ведет к замедлению пролиферации лимфоцитов, дискоординации иммуного ответа, что приводит к увеличению риска развития инфекционных осложнений.

В.С. Шубина, Ю.В. Шаталин ВЛИЯНИЕ МОДИФИЦИРОВАННОГО ПОЛИФЕНОЛОМ КОЛЛАГЕНА НА

РЕГЕНАЦИЮ КОЖИ КРЫСЫ ПОСЛЕ ХИМИЧЕСКОГО ОЖОГА

(научный руководитель - к.б.н., с.н.с., Ю.В. Шаталин)

Пущинский государственный естественно-научный институт Пущино, Российская Федерация

Введение. Ранее нами было показана эффективность использования липосомальных препаратов на основе таксифолина для лечения химических ожогов кожи у крыс.

Цель. Оценка регенерационных процессов в коже после химического ожога при аппликациях покровных материалов на основе модифицированного таксифолина.

Материалы и методы. Контроль течения раневого процесса производили на основании объективных критериев: планиметрического метода оценки изменения площади раневого дефекта и морфологического анализа продольных гистологических срезов раневого и около раневого пространства у экспериментальных и контрольных животных.

Результаты. Было установлено, что препараты, содержащие таксифолин и кросс-сшитый олигомеризованный полифенол, стимулируют пролиферативные процессы в раневом участке, при этом

143

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

наблюдается увеличение регенерации ткани кожи при использовании препаратов на основе олигомеризованного полифенола в сравнении со свободной коллагеновой матрицей.

Выводы. Материалы, созданные на основе коллагеновой пленки с модифицированным полифенолом, могут быть использованы в качестве основы для разработки покровных материалов для лечения ожоговых травм.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках государственного задания на 2012-2014 г. № 4.2399.2011.

Д.В. Гаврилов, И.А. Белевитина, А.С. Демичева ИЗУЧЕНИЕ СПОНТАННОГО УРОВНЯ МУТАЦИЙ В ПОЛОВЫХ КЛЕТКАХ У МЫШЕЙ ЛИНИИ IGF (+/+)

(научный руководитель - к.б.н. С.В. Розенфельд)

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. Инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1), влияя на процессы роста организма и дифференцировки клеток, является перспективным объектом для изучения проблем канцерогенеза и старения.

Цель. Выяснение влияния IGF-1 на возникновение спонтанных мутаций в половых клетках у мышей недавно созданной линии IGF(+/+) с высоким уровнем экспрессии гена IGF-1.

Материалы и методы. Согласно общепринятой методике проведен тест на определение частоты аномалий головок спермиев (АГС) у мышей линий IGF(+/+) в возрасте 12 месяцев, линии FBV в возрасте 12 месяцев и линии 129/SV в возрасте 3 месяцев, а также мышей SHR в возрасте 12 месяцев.

Результаты. Частота АГС для линии IGF(+/+) (34±8%) достоверно отличается от частоты АГС для мышей SHR (8,9±0,07%,) и достоверно не отличается от данных для линии 129/SV (39±9%) и исходной для линии IGF(+/+) – линии FBV (28,7±0,9%). Выявленная повышенная частота спонтанных мутаций у мышей 129/SV объясняется генетической нестабильностью этой линии. Полученные результаты можно объяснить следующим: 1) IGF–1 участвует в регуляции стрессоустойчивости, увеличивая частоту мутаций; 2) IGF–1 стимулирует пролиферацию клеток; 3) IGF–1, влияя на простату, нарушает сперматогенез.

Выводы. Повышенный уровень IGF-1 коррелирует с высокой частотой АГС у линии IGF(+/+). Для дальнейшего изучения влияния избытка IGF-1 на уровень спонтанных мутаций у млекопитающих необходимо провести исследование частоты повреждений ДНК в соматических клетках мышей.

Д.О. Боков ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДОВ АНАЛИЗА АЛЛЕРГЕННОГО ЭКСТРАКТА ПЫЛЬЦЫ

БЕРЁЗЫ И ВЫЯВЛЕНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК ПОДЛИННОСТИ НАТИВНЫХ СЫРЬЕВЫХ ИСТОЧНИКОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ ЕГО ИЗГОТОВЛЕНИИ

(научный руководитель - к.ф.н. В.В. Смирнов)

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Москва, Российская Федерация

Введение. Сегодня, во всём мире отмечен постоянный рост уровня аллергических заболеваний: согласно исследовательским данным, эта группа патологий отмечена более чем у 15-20 % населения нашей планеты. Самым оптимальным методом лечения таких пациентов является аллерген-специфическая иммунотерапия (АСИТ), в основе которой лежит использование различных аллергенных экстрактов.

Цель. Разработка методики методики стандартизации полного экстракта берёзы. Изучение анатомоморфологических признаков пыльцы берёзы повислой (Betula pendula Roth.).

Материалы и методы. Пыльца берёзы собиралась весной 2013 года в Москве и Московской области. Изучение признаков пыльцевых зерен осуществляли методом световой микроскопии в соответствии с фармакопейными требованиями. Анализ водно-солевого экстракта проводился методом ВЭЖХ-МС.

Результаты. Разработана методика определения белка Betv1 (основной ион m/z=876,1) в экстракте

144

V Международный молодежный медицинский конгресс

пыльцы берёзы. Определены основные диагностические признаки пыльцы (3-х поровые, =14-35 мкм,

радиально-симметричные).

Выводы. Данные, полученные в результате исследований могут быть использованы в процессе создания соответствующей фармакопейной статьи.

Е.А. Мадаминов, Е.А. Новикова СВЯЗЬ РЕЦЕПТОРОВ НА КЛЕТКАХ КАРЦИНОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ С

УРОВНЕМ ЭКСПРЕССИИ TOP2-АЛЬФА.

(научный руководитель - д.м.н., проф. С.В. Сазонов)

Уральский государственный медицинский университет Екатеринбург, Российская Федерация

Введение. Гиперэкспрессия (ГЭ) топоизомеразы II α (TOP2α) в клетках рака молочной железы (РМЖ) является основанием к изменению назначаемой химиотерапии. В настоящее время нет единого подхода к оценке ГЭ TOP2α.

Цель. Сравнить экспрессию эстрогеновых (ER) и прогестероновых рецепторов (PR), HER2/neu и Ki-67 в клетках РМЖ при нормальном уровне экспрессии (НЭ) и ГЭ TOP2α.

Материалы и методы. Биоптаты РМЖ от 358 пациенток исследованы иммуногистохимическим методом на экспрессию TOP2α, HER2/neu, Ki-67, ER и PR на базе ГБУЗСО ИМКТ. Экспрессия TOP2α оценивалась по шкале проф. L. Usha (ГЭ более 35% -уровень 3+ и 4+). Анализ данных проводился с помощью программных пакетов The Salford Predictive Modeler 7.0 и MedCalc 12.7.5.0. Распределение маркеров по важности (РМВ) для дифференцировки происходило по алгоритму CART.

Результаты. Значимой корреляции между экспрессией TOP2α и экспрессией ER, PR, HER2/neu не выявлено. РМЖ во всей выборке: Ki-67 (Важность переменной –VIMP=0,39), ER (VIMP=0,17), PR (VIMP=0,16), HER2/neu (VIMP=0,15) (цена ошибки - relative cost (RC)=0.135), корреляция (кор.) Ki-67=0,536, значимость (зн.)=0,0001. В 36 случаях ГЭ TOP2α РМВ изменяется: Ki-67 (VIMP=0,35), HER2/neu (VIMP=0,2), PR (VIMP=0,13), ER (VIMP=0,10), (RC=0.121), кор. с Ki-67=0,343, зн.=0,343. В 322 случаях при НЭ TOP2α РМВ: Ki-67 (VIMP=0,25), ER и PR (VIMP=0,15), HER2/neu (VIMP=0,11), (RC=0.144), кор. с Ki-67=0,403, зн.=0,0001.

Выводы. 1) В группе РМЖ с ГЭ TOP2α чаще определяется экспрессия HER2/neu, а при нормальном уровне экспрессии - PR и ER.

2) Ki-67 лучше других маркеров отражает уровень экспрессии TOP2α, поэтому данный подход используют для определения гиперэкспрессии TOP2α.

Е.Г. Драндрова, Г.Ю. Стручко, М.Н. Михайлова, О.Ю. Кострова, Е.Н. Александрова, Т.П. Лукова ИЗМЕНЕНИЯ ТУЧНОКЛЕТОЧНОЙ ПОПУЛЯЦИИ ТИМУСА ПОТОМСТВА КРЫС С

ИММУНОДЕФИЦИТОМ НА ФОНЕ КАНЦЕРОГЕНЕЗА

(научный руководитель - д.м.н., проф. Меркулова Л.М.)

Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова Чебоксары, Российская Федерация

Введение. Распространенность онкологических заболеваний растет с каждым годом. Высокая частота образования злокачественных опухолей отмечается на фоне иммунодефицитов.

Цель. изучить влияние иммунодефицитной беременности на тучноклеточную популяцию тимуса потомства при воздействии канцерогена.

Материалы и методы. Работа выполнена на 60 крысах-самцах в возрасте 6 месяцев. Исследуемые группы: 1-я – потомство здоровых самок; 2-я – потомство здоровых самок, которому вводили 1,2- диметилгидразин в дозе 10 мг/кг 1 раз в неделю в течение 4-х недель; 3-я – потомство спленэктомированных самок, которому вводили канцероген по той же схеме. В работе использованы иммуногистохимический, морфометрический и статистический методы исследования.

145

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

Результаты. В септах тимуса потомства здоровых самок преобладают слабодегранулирующие тучные клетки. На фоне введения канцерогена мастоциты также имеют низкую степень дегрануляции, но общее число клеток больше в 1,5 раза. У потомства крыс с иммунодефицитом значительно возрастает число дегранулирующих тучных клеток (индекс дегрануляции 1,82).

Выводы. Реакция тучных клеток на иммунодефицит проявляется в виде их дегрануляции. Эти клетки принимают участие в замещении паренхимы тимуса соединительной тканью, способствуют мобилизации дендритных клеток. Воздействие канцерогена ведет к более выраженным негативным изменениям клеточных популяций тимуса.

И.О. Генбач ОСОБЕННОСТИ АКТИВАЦИИ И РАСПРЕДЕЛЕНИЯ 5-ФТОРУРАЦИЛА В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ

(научный руководитель - к.х.н., доц. Е.В. Хомутов)

Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького Донецк, Украина

Введение. Одним из перспективных способов введения 5-фторурацила (5-ФУ) является его введение в

лимфатический сосуд. При таком способе введения наблюдается гораздо меньшая токсичность, причины данного положительного эффекта остаются не выясненными.

Цель. Целью работы было изучение клеточного транспорта и активации 5-ФУ in vitro, а также in vivo при химиотерапии больных аденокарциномой желудка.

Материалы и методы. Использовалась кровь здоровых добровольцев (N=5) и больных раком желудка (N=11), которые получали химиотерапию 5-ФУ. Лимфоциты выделяли на градиенте фиколл-урографина; концентрации всех метаболитов определяли методом ВЭЖХ.

Результаты. При добавлении 5-ФУ к суспензии лимфоцитов в плазме (здоровые добровольцы), концентрация препарата в клетках была в 4 раза выше, чем в плазме уже на 1-й минуте инкубации. При сравнении процессов активации 5-ФУ в суспензии функционально активных лимфоцитов и в лизате клеток было обнаружено, что наличие клеточной мембраны замедляет образование 5-фторуридина.

Наколение 5-ФУ лимфацитами было изучено на пациентах, которые получали химиотерапию двумя способами. При эндолимфальном введении, концентрация 5-ФУ в клетках превышала таковую в плазме в 100 раз уже через 1 час после введения. Максимальный пик концентрации (С=990 мМ) был зарегистрирован через 1 час. При внутриартериальной терапии максимальная концентрация (С=576 мМ) наблюдалась через 2 часа, после чего наступал спад.

Выводы. Обнаружено активное накопление 5-ФУ в лимфоцитах в условиях как in vitro, так и in vivo. Однако активация 5-ФУ очень зависит от источника рибозо-1-фосфата, в нашем случае - тимидина. Активация 5-ФУ лимитируется не его содержанием в клетке и способом введения, а содержанием в клетке тимидина.

Л.И. Мартыненко Влияние генетически модифицированных продуктов на физиологические показатели

экспериментальных животных Влияние генетически модифицированных продуктов на физиологические показатели экспериментальных животных

(научный руководитель - д.м.н., доц. М.А. Газалиева)

Карагандинский государственный медицинский университет Караганда, Казахстан

Введение. В связи с интенсивным ростом населения планеты все острее стоит вопрос о необходимости получения новых форм и способов получения продуктов питания. На этом фоне ярко выделяется современная альтернатива натуральному питанию – генетически модифицированные продукты (ГМП).

Цель. Изучение влияния ГМП на физиологические показатели экспериментальных животных. Материалы и методы. Воздействие ГМП оценивалось в течение 2 месяцев на 40 крысах. Разработана

схема сравнительной оценки физиологических показателей у животных, употреблявших ГМП, который был создан путем смешивания ингредиентов (1 группа – контроль, 2 группа – ГМП). Применяли интегральные методы исследования: изменение динамики массы тела, динамометрии мышц, суммационно-порогового показателя (СПП).

146

V Международный молодежный медицинский конгресс

Результаты. В первой группе было отмечено статистически недостоверное увеличение вертикальных и горизонтальных перемещений, снижение грумминговых реакций и дефекаций, масса тела возросла на 43,1%, прирост мышечной силы составил 118 г. Во второй группе существенных изменений по уровню двигательных и эмоциональных показателей не наблюдалось, масса тела возросла на 51,9%, прирост мышечной силы составил 470 г, абсолютные цифры СПП снижались.

Выводы. Применение ГМП улучшает динамику интегральных показателей (вес, мышечная сила), повышает чувствительность к электрокожному раздражению.

М.С. Селиверстова, О.П. Лебедева, Т.К. Тарасова

ЭКСПРЕССИЯ TOLL-ПОДОБНЫХ РЕЦЕПТОРОВ ПРИ РЕЦИДИВИРУЮЩЕЙ ФОРМЕ ГЕНИТАЛЬНОГО ГЕРПЕСА

(научный руководитель - к.м.н., доц. О.П. Лебедева)

Белгородский государственный национальный исследовательский университет Белгород, Российская Федерация

Введение. По данным ВОЗ заболеваемость вирусом герпеса (15,8%) находится на втором месте после острых респираторных инфекций (2013 год). Наибольшую проблему представляет рецидивирующая форма генитального герпеса (ГГ), отражающая несостоятельность локального противовирусного ответа. Ключевым звеном местной противовирусной защиты являются Toll-подобные рецепторы (TLR).

Цель. Оценка экспрессии 2, 3, 7, 8, 9 TLR и интерлейкин-1-связывающей киназы 4 (IRAK 4) при различных клинических формах ГГ.

Материалы и методы. Собрано 90 образцов соскобов эпителиальных клеток слизистой оболочки урогенитального тракта женщин с диагнозом ГГ. Количественную ПЦР проводили с

использованием набора qPCRmix-HS SYBR ("EUROGEN», Российская Федерация). Результаты проанализированы в программе Статистика 6.0 (критерий Манна-Уитни).

Результаты. При сравнении пациентов с редко рецидивирующей формой ГГ и пациентов с первым эпизодом непервичной инфекции было обнаружено: снижение экспрессии TLR3 (16,62 (8,31;30,91) и 36,45 (17,03; 49, 38) соответственно), снижение экспрессии TLR7 (7,62 (5,98; 10,3) и 11,67 (7,36; 20,04)), а также снижение экспрессии

IRAK 4 (0,004542 (0,000117; 0,046) и 0,09 (0,0014; 12,16)), p <0,05.

Выводы. В нашем исследовании наряду со снижением экспрессии TLR3 и TLR7, выявлено значительное снижение экспрессии IRAK 4, что, вероятно, сказывается на продукции цитокинов и является причиной несостоятельности местного противовирусного ответа у пациентов с рецидивирующим ГГ.

Н.А. Шалгинских, К.И. Кирсанов, М.Г. Якубовская ВЛИЯНИЕ КАНЦЕРОГЕННЫХ И ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ КСЕНОБИОТИКОВ НА ЭПИГЕНЕТИЧЕСКУЮ РЕГУЛЯЦИЮ ТРАНСКРИПЦИИ

(научный руководитель - д.м.н. М.Г. Якубовская)

Научно-исследовательский институт Канцерогенеза ФГБУ «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» РАМН Москва, Российская Федерация

Введение. Химические соединения, в том числе некоторые противоопухолевые препараты, помимо генотоксического действия на клетки, могут принимать непосредственное участие в изменении эпигенетической регуляции экспрессии генов. Однако целенаправленного исследования эпигенетических эффектов различных классов ксенобиотиков ранее не проводилось.

Цель. Провести скрининг известных химических канцерогенов и химиотерапевтических препаратов на способность реактивировать экспрессию генов на модельной системе эукариотических клеток in vitro.

Материалы и методы. Модель для оценки эпигенетической репрессии представляла собой субпопуляцию HeLa клеток, несущую транскрипционно-молчащий ретровирусный вектор с репортерным геном зеленого флуоресцентного белка. Анализ проводили методом проточной цитофлуориметрии.

Результаты. Скрининг 43 ксенобиотиков выявил реактивирующее действие на эпигенетическую регуляцию экспрессии генов 21 соединения. Для 14 соединений, обладающих сильным реактивирующим

147

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

действием, охарактеризовано их влияние на гистоновые модификации и метилирование ДНК. Выводы. Клеточная линия HeLa-TI с интегрированным ретровирусным вектором, содержащим

репортерный зеленый флуоресцентный белок GFP под промотором СMV, является адекватной модельной системой для тестирования химических соединений на способность реактивировать эпигенетически репрессированные гены. Впервые продемонстрировано влияние узкобороздочных лигандов (Hoechst 33342, Hoechst 33258, DAPI, Diminazene, Pentamidine, Netropsin) и противоопухолевых препаратов (Bortezomib, MLN4924, Mimosine, Bleomycin) на эпигенетическую регуляцию транскрипции. Таким образом, получены новые данные об эпигенетических механизмах химического канцерогенеза.

Н.В.Молашенко

ВОВЛЕЧЕННОСТЬ ПРОМОТОРНОГО ПОЛИМОРФИЗМА -463G>A ГЕНА MPO В РАЗВИТИЕ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ В КУРСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ

(научный руководитель - д.м.н., академик РАЕН., проф. А.В. Полоников)

Курский государственный медицинский университет Курск, Российская Федерация

Введение. В последние годы все больше исследований этиопатогенеза бронхиальной астмы (БА) охватывают роль антиоксидантной системы и свободно-радикального окисления в молекулярные механизмы развития болезни.

Цель. Целью настоящей работы было изучение связи полиморфизма -463G>A гена миелопероксидазы (MPO) с риском развития бронхиальной астмы у человека.

Материалы и методы. Материалом исследования послужила выборка неродственных индивидов русской национальности (n=429) уроженцев Курской области. Выделение геномной ДНК осуществляли из размороженной крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. Генотипирование проводилось методами ПЦР-ПДРФ.

Результаты. Установлено, что наличие вариантного аллеля -463A гена MPO было ассоциировано с пониженным риском аБА (OR=0,62; 95%CI 0,41-0,93). Примечательно, что носительство вариантного аллеля -463A гена MPO не было ассоциировано с риском развития нБА.

Выводы. Известно, что нуклеотидная замена -463G>A, расположенная в гормон-связывающем регионе промотора гена MPO, приводит к потере сайта связывания для транскрипционного фактора Sp1, что сопровождается почти 25-кратным снижением транскрипционной активности и экспрессии MPO. В этой связи аллельный вариант -463G, преобладающий у больных БА, определяет пониженную активность фермента, что может иметь патогенетическое значение для развития болезни в связи с недостаточностью антимикробной защиты организма.

О.А. Шатских, Л.Р. Ялалетдинова ВЛИЯНИЕ МЕЛАТОНИНА НА БИОАМИНСОДЕРЖАЩИЕ СТРУКТУРЫ СЕЛЕЗЕНКИ

(научный руководитель - д.б.н., проф. В.Е.Сергеева)

Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова Чебоксары, Российская Федерация

Введение. Известно, что экзогенный мелатонин способен усиливать процессы фагоцитоза в селезенке, увеличивать её вес. Влияние мелатонина в разных условиях освещенности на распределение биоаминов в структурах селезенки изучены недостаточно.

Цель. Цель - изучение реакции биоаминосодержащих структур селезенки при введении мелатонина животным, содержащимся в условиях различного освещения.

Материалы и методы. Проводились исследования на 40 белых мышах-самцах, которым вводился мелатонин в дозе 0,03 мг в сутки в условиях обычного освещения и искусственного затемнения. Криостатные срезы селезенки обрабатывались методами Кросса, Эвена, Роста и Фалька-Хилларпа.

Результаты. Выявлено увеличение содержания гистамина, серотонина и катехоламинов в гранулярных люминесцирующих клетках селезенки на введение мелатонина мышам, находящимся в условиях обычного освещения. Введение гормона в условиях искусственного затемнения приводит к обратным результатам – содержание исследуемых биоаминов снижается.

148

V Международный молодежный медицинский конгресс

Выводы. Введение мелатонина вызывает изменение уровней биогенных аминов в исследуемых структурах селезенки, которые зависят от условий освещения, в которых находятся животные: при обычном освещении усиливаются процессы биоаминопродукции, а в темноте – биоаминопоглощения.

С.А. Лаптиев РЕЗУЛЬТАТЫ ВНЕДРЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО СКРИНИНГА В ПЕРВОМ

ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ В Г. САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ НА БАЗЕ ЦЕНТРА ПРЕНАТАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РОДИЛЬНОГО ДОМА N17

(научный руководитель - к.м.н. М.М. Селиванов, к.б.н., доц. М.А. Корженевская)

Первый Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет им. акад. И.П. Павлова Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. С целью профилактики наследственных заболеваний в г.Санкт-Петербурге беременным женщинам любого возраста рекомендуется прохождение пренатального скрининга . До 2012 года проведение инвазивной пренатальной диагностики (ИПД) рекомендовалось беременным женщинам после 40 лет. В настоящее время введена программа комбинированного скрининга (КС).

Цель. Исследовать эффективность КС для выявления хромосомной патологии плода. Материалы и методы. За период с 05.12 по 12.12 на базе отделения пренатальной диагностики

Родильного дома N17 было обследовано 203 беременных старше 39 лет по программе КС, включающего УЗскрининг и биохимический скрининг (определение уровня PAPP-A и ХГЧ в сыворотке крови) с расчетом риска рождения больного ребенка.

Результаты. При расчетном риске менее 1:100 пациенткам предлагалось проведение ИПД. Всего выполнено 36 инвазивных процедур, по результатам которых выявлено 6 плодов с хромосомными аномалиями, что составило 16%.

Выводы. Внедрение программы КС позволяет снизить количество инвазивных процедур на 84%, что уменьшает риск прерывания беременности, как осложнения ИПД.

Я.Г. Божко, Е.А. Новикова СРАВНЕНИЕ ПОДХОДОВ К СИСТЕМЕ ОЦЕНКИ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ

ТОПОИЗОМЕРАЗЫ IIα В КЛЕТКАХ КАРЦИНОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

(научный руководитель - д.м.н., проф. С.В. Сазонов)

Уральский государственный медицинский университет Екатеринбург, Российская Федерация

Введение. Гиперэкспрессия (ГЭ) топоизомеразы IIα (TOP2α) в клетках карциномы молочной железы (РМЖ) является предиктивным фактором для назначения антрациклиновой терапии, однако до сих пор нет единого подхода к системе оценки ее экспрессии.

Цель. Сравнить разные подходы к оценке экспрессии TOP2α для формирования групп пациентов с

РМЖ.

Материалы и методы. Биоптаты опухолей от 24 пациентов исследованы иммуногистохимическим методом на экспрессию TOP2α и Ki-67 на базе ГБУЗСО ИМКТ. К оценке экспрессии TOP2α применены два принципиально разных подхода: сравнение экспрессии TOP2α и Ki-67 (ГЭ признается при превышении экспрессии TOP2α над Ki 67) и использование шкалы prof. L. Usha (ГЭ при уровне 3+ и 4+).

Результаты. При использовании первого подхода ГЭ TOP2α наблюдалась в 2 случаях из 24 (8,3%), второго - в 6 случаях (25%). С одной стороны, первый подход позволяет установить взаимосвязь между экспрессиями TOP2α и Ki-67, что важно для лучшего понимания биологического поведения опухоли. Но не всегда экспрессия TOP2α превышает экспрессию Кi-67 и там, где её уровень может достигать 80%, приходится делать вывод о нормальной экспрессии TOP2α. В таком случае, целесообразно использовать шкалу prof. L. Usha, позволяющую объективно дифференцировать экспрессию TOP2α.

149

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

Выводы. 1. Клетки карциномы молочной железы существенно различаются по уровню экспрессии

TOP2α.

2. Результат выявления гиперэкспрессии TOP2α при РМЖ зависит от применяемой системы её оценки.

150