1. метод лабораторной диагностики вирусных инфекций.

При лабораторной диагностике вирусных инфекций используется следующие

методы:

1. вирусоскопический,

2. вирусологический,

3. серологический,

4. молекулярно-биологический

Вирусоскопический метод основан на обнаружении вирусных частиц в патологическом материале от больного или вирусных включений в пораженных вирусом клетках (например, тельца Бабеша-Негри при бешенстве). С этой целью используются следующие варианты этого метода: Электронная микроскопия  Светооптическая микроскопия (для обнаружения изменений клеток под влиянием вируса, внутриклеточных включений)  Иммунная электронная микроскопия  Люминисцентная микроскопия  Иммунофлюоресцентный метод.

Вирусологический метод основан на выделении вируса из патологического материала и его идентификации (определения типа вируса). Необходимым условием успешного выделения возбудителя вирусной инфекции является своевременный и качественный забор материала для исследования с учетом особенностей предполагаемой инфекции, места максимальной (избирательной) локализации возбудителя и путей его выделения в окружающую среду. При большинстве вирусных инфекций период максимального накопления вирусов соответствует стадии вирусемии, т.е. острому периоду заболевания, а при некоторых – концу инкубационного и продромального периодов (корь, гепатит А). Обязательным условием является бактериологическая стерильность исследуемого материала. Вирусологический метод состоит из 3 этапов:  Выделение и накопление вируса,  Обнаружение (индикация) вируса,  Идентификация или типирование вируса

Серологический метод диагностики вирусных инфекций применяется для выявления в сыворотке крови больного антител к возбудителю заболевания (серодиагностика). Для выявления специфических антител используются различные серологические реакции: реакция связывания комплемента (РСК), ИФА, РИА, иммуноблотинг (вестерн-блот) и др.

2. метод индикации и идентификации вирусов

Методы индикации вируса зависят от способа его выделения и накопления.

При биологическом способе о наличии вируса судят:

 по клинической картине заболевания,

 по патоморфологическим изменениям органов,

 по наличию вирусов в суспензии органов,

 по наличию антител в сыворотке крови.

При заражении куриного эмбриона индикацию вируса проводят:

 по характеру специфических поражений оболочек,

 по гибели эмбриона,

 в реакции гемагглютинации (РГА). Принцип РГА: в лунки

плексигласовой пластинки разливают материал, предположительно

содержащий вирус (н-р, аллантоисная жидкость), добавляют взвесь

эритроцитов. При наличии вируса эритроциты склеиваются и оседают

на дно лунки, образуя осадок с неровными краями («зонтик») – реакция

положительная. При отсутствии вируса – осадок компактный, с

ровными краями («пуговка») – реакция отрицательная.

О размножении вирусов в культурах клеток судят по признакам:

 По цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть

обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими

изменениями клеток вплоть до их гибели, возникающими в результате

повреждающего действия вируса (полная дегенерация клеток, частичная

дегенерация – гроздеобразование, очаговая деструкция, пролиферация клеток,

слияние клеток с образованием симпластов). По образованию в клетках включений. Включения имеют

различную природу, структуру, форму и размеры (от 0,25 мкм до 25 мкм), и

представляют собой скопления вирусных частиц, вирусных белков или

клеточного материала. Они могут располагаться в цитоплазме (бешенство –

тельца Бабеша -Негри), в цитоплазме и ядре пораженных клеток (корь,

натуральная оспа, ветряная оспа, аденовирусы).

 По цветной реакции, основанной на разнице в цвете питательной

среды с индикатором феноловым красным. В процессе размножения и роста

клеток, не пораженных вирусом, в питательной среде накапливаются кислые

продукты обмена веществ, снижающие pH среды, и она желтеет. В ткани,

зараженной вирусом, наступает дегенерация клеток, приводящая к

нарушению их нормального метаболизма, в результате сдвига рН не

происходит, и она сохраняет красный цвет.

 По бляшкообразованию. Бляшки (негативные колонии) - очаги

разрушенных вирусом клеток монослоя культуры под агаровым покрытием.

Обычно это обесцвеченные участки на розово-красном фоне.

В реакции гемадсорбции, которая основана на способности клеток, зараженных вирусом, адсорбировать на своей поверхности эритроциты.

3. применение серологических реакций.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на том, что в

присутствии специфической иммунной сыворотки вирус утрачивает способность

агглютинировать эритроциты. Результат реакции учитывают по характеру осадка в

лунке со специфической иммунной сывороткой. Склеивание эритроцитов не

произойдет и осадок будет в виде «пуговицы».

Компоненты реакции:

1. Материал, содержащий вирус

2. Специфические иммунные сыворотки

3. Нормальная сыворотка, полученная от неиммунного животного

4. 5% взвесь эритроцитов

Торможения гемадсорбции основана на том, что в присутствии

специфической иммунной сыворотки оседание эритроцитов на клетках культуры

ткани, содержащих вирус, не происходит.

Реакция нейтрализации (РН) основана на том, что в присутствии

специфической иммунной сыворотки вирус теряет способность вызывать

цитопатическое действие (ЦПД).

Компоненты реакции:

1. Материал, содержащий вирус

2. Специфические иммунные сыворотки

3. Нормальная сыворотка, полученная от неиммунного животного

4. Культура клеток, чувствительная к данному вирусу.

Для идентификации вирусов применяют также РСК, моноклональные

антитела и другие серологические реакции.

4. вирус гриппа: строение, антигенная структура,серотипы, подсеротипы. Изменчивость вируса, механизм и значение.

Грипп – острая массовая вирусная инфекция с аэрогенным механизмом передачи, характеризующаяся сочетанием поражения слизистых оболочек верхних дыхательных путей с тяжелой общей интоксикацией. Периодически принимает эпидемический и пандемический характер распространения

Семейство Orthomyxoviridae  Род Influenza virus А, В и Influenza С

Influenza A virus поражает человека и некоторых животных. Вирус ответствен за появление пандемий и тяжелых эпидемий 

Influenza B virus не вызывает пандемии, является причиной локальных вспышек и эпидемий. Циркулирует только в человеческой популяции. 

Influenza C virus не вызывает эпидемий, инфицирует только человека.

Форма: сферическая, реже нитевидная

Размер: 80-120 нм

Вирус сложный

Геном: минус-нитевая фрагментированная молекула

РНК.

 Вирусы гриппа типов А и В имеют 8 фрагментов РНК.

Вирус типа С – 7 фрагментов.

Каждый фрагмент генома покрыт капсидом

Капсид имеет спиральный тип симметрии

Каждый фрагмент генома кодирует информацию об 1 или

2 белках. В центре вирусной частицы располагается рибонуклеопротеидное ядро, состоящее из  фрагментов вирусной РНК,  белка NP – нуклеопротеид – выполняет регуляторные и структурные функции  полимеразного комплекса: PB1 - транскриптаза, PB2 - эндонуклеаза PA - репликаза  белков NEP (NS2) и NS 1 - Они существуют только внутри инфицированных клеток, участвуют в транспорте вирусных частиц из ядра и в защите от интерферона.

Три структурных белка вируса гриппа типа А (H, N и M2) связаны с суперкапсидной оболочкой  гемагглютинин (Н) выполняет рецепторную функцию, способен вызывать склеивание и гемолиз эритроцитов; определяет пандемичность вируса  нейраминидаза (N) – -катализирует отщепление сиаловой кислоты от субстрата, как следствие, способствует проникновению вириона в клетку, выходу из клетки после репродукции, -препятствует агрегации новых вирионов, -снижает вязкость секретов;  М2 – ионный канал М1 - Матриксный белок заполняет пространство между суперкапсидной оболочкой и рибонуклеопротеидом. Этот белок определяет форму вирусной частицы

Антигенная структура NP-АГ – нуклеопротеид, М – АГ – матриксный белок М1. Внутренние, типоспецифические АГ, отвечают за принадлежность вируса к типу А, В или С. Выявляются в РСК. Не являются протективными. ГЕМАГГЛЮТИНИН (Н) и НЕЙРАМИНИДАЗА(N) Поверхностные, подтипоспецифические, протективные. Различают 16 подтипов H-антигена (H1– H16) 9 подтипов N-антигена (N1- N9) Определяются с помощью РТГА

Антигенная изменчивость Дрейф (от англ. drif – медленное течение) – точечные мутации в генах, кодирующих H и N. Шифт (от англ. shift – сдвиг) – полная замена генов, кодирующих H и N, приводящая к получению новых подтипов вируса. Генетическая реассортация (перетасовка) – комбинирование сегментов вирусной РНК.

5. Источник, путь передачи, патогенез, клинические проявления, лабораторная диагностика гриппа.

Грипп регистрируется повсеместно

 Рост заболеваемости в холодное время года

 Резервуар гриппа – инфицированный человек (больные и носители)

 Механизм передачи – аэрогенный(аэрозольный)

 Путь – воздушно-капельный, контактно-бытовой

Патогенез

Внедрение вируса

Репродукция в клетках верхних дыхательных путей

(инкубационный период)

 Поражение дыхательного тракта

Повреждение лимфоцитов, развитие иммунодефицита,

бактериальные осложнения со стороны дыхательный путей и др.

систем

Формирование иммунитета

Выздоровление

Клиническая картина:

Озноб  Слабость  Суставные и мышечные боли  Головная боль  Обильное потоотделение  Насморк  Боли в горле  Хрипота, осиплость  Кашель

Микробиологическая

диагностика

 Материалы — смывы и мазки из носоглотки, мазки-отпечатки из носовой

полости и кровь.

 Вирусоскопический, вирусологический и серологический методы

 Экспресс-диагностика: определение Аг вируса в мазках-отпечатках из

носа и смывов носоглотки в РИФ и ИФА

 Выделение возбудителя: заражением 10-11-суточных куриных

эмбрионов

 Типовая принадлежность: РСК, РТГА, реакции ингибирования

активности фермента

 Выявление циркулирующих АТ: РТГА, РСК, РН, ИФА в парных

сыворотках с интервалом 8-14 сут.

6. Препараты для специфической профилактики и лечения гриппа.

Иммунотерапия: противогриппозный гамма-глобулин, индукторы эндогенного интерферона, в первые дни заболевания интерферон человеческий лейкоцитарный.  Профилактика: 1. Живая аттенуированная гриппозная вакцина; вводится интраназально. 2. Убитая цельновирионная вакцина – убитые вирусы, обработанные формалином. 3. Субвирионная вакцина из расщипленных вирионов. 4. Субъединичная вакцина – содержит гемагглютинин и нейраминидазу. 5. Синтетическая вакцина – содержит синтезированный хим. путем гемагглютини.

Ингибиторы нейраминидазы – единственно эффективные

препараты для лечения и профилактики пандемического гриппа

А/H1N1.

Озельтамавир (Тамифлю): для профилактики 75 мг 1 раз в сутки 5

дней, для лечения 75 мг 2 раза в сутки 5 дней

Занамивир (Реленза) в блистере для ингаляций: для профилактики

10 мг 1 раз в сутки, для лечения 10 мг 2 раза в сутки 5 дней.

Лечение ингибиторами нейраминидазы должно начинаться в первые

36 ч от начала заболевания для максимальной эффективности терапии.

Ремантадин не эффективен против высокопатогенного гриппа, но

сохраняет свое значение для профилактики и лечения сезонного

гриппа.

Ремантадин: для профилактики по 100 мг 2 раза в день не менее 2

недель, для лечения по 100 мг 2 раза в день 5 дней.

Лечение ремантадином следует начать в первые 48 ч от начала

заболевания.

7. Корь: характеристика вируса, пути заражения, клинические проявления, лабораторная диагностика, специфическая профилактика.

острое инфекционное высококонтагиозное заболевание(индекс контагиозности 98%) поражающее главным образом детей, характеризующееся лихорадкой (до 40,5 °C), катаральными явлениями и характерной пятнистопапулезной сыпью кожных покровов, общей интоксикацией. Вирус кори выделен в 1954 г. Д.Эндерсом и Т.Пиблесом

Семейство Paramyxoviridae  Род Morbillivirus

Вирион сферической формы, диаметр 150-250 нм

 Имеют внешнюю оболочку

 Спиральный тип симметрии капсида

 Геном вируса – однонитевая нефрагментированная минусРНК

 Размер генома 16-20 тысяч нуклеотидов

 Основные белки – белки нуклеокапсида NP, P и L (белки

полимеразного комплекса, содержащего транскриптазу), М –

матриксный и два гликозилированных белка, входящих в состав

суперкапсида – Н (гемагглютинин) и F (белок слияния,

гемолизин)

 Нейраминидаза отсутствует

 Вирус кори обладает гемагглютинирующей, гемолитической

и симпластообразующей активностью.

Культивируюется на первично – трипсинизированных культурах клеток почек обезьян и эмбрионов человека, перевиваемых культурах клеток Hela, Vero.  Характерный цитопатический эффект (образование гигантских многоядерных клеток — симпластов), появление цитоплазматических и внутриядерных включений, феномен гемадсорбции и бляшкообразование под агаровым покрытием.

Источник – больной человек. (Больной заразен для окружающих с конца продромального периода и до 4-5 дня после появления сыпи) Механизм передачи – аэрогенный Путь передачи - воздушно-капельный. (Вирус выделяется в большом количестве во внешнюю среду с капельками слизи при кашле, чиханье и со струей воздуха может переноситься на значительные расстояния - в другие помещения, этажи.) Индекс контагиозности при кори составляет 95-96% Лица, перенесшие типичную корь, приобретают стойкий пожизненный иммунитет.

Входными воротами для вируса кори являются верхние дыхательные пути и конъюнктива глаз.  Вирус размножается в эпителиальных клетках. В патологический процесс вовлекается ретикуло-эндотелиальная система всех органов, центральная нервная система.  После репродукции вирус поступает в кровь (вирусемия) и поражает эндотелий кровеносных капилляров, обуславливая появление сыпи

В течение кори выделяют 4 периода:  инкубационный (от8 до 17 суток, максимальный до 21 дня);  катаральный (продромальный);  высыпания;  пигментации.

Катаральный период:

длительность 3—4 дня • нарастающие симптомы интоксикации • повышение температуры тела • катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей; • конъюнктивит, сопровождающийся светобоязнью; • гиперемия и разрыхленность слизистых щек; • энантема на мягком небе; • пятна Бельского-Филатова-Коплика за 1—2 суток до высыпаний;

Лабораторная диагностика:

Метод экспресс диагностики: обнаружение специфического вирусного антигена в пораженных клетках с помощью РИФ;  Для выделения вируса заражают исследуемым материалом (слизь из носоглотки, кровь в период до первых суток появления сыпи) культуры клеток;  Индикация: по ЦПД ( симпластобразование) и положительной реакции гемагглютинации;  Идентифицикация: РИФ, РТГА и РН в культурах клеток;  Для серодиагностики используют РСК, РТГА и РН

Специфическая профилактика:

Живая аттенуированная коревая вакцина, полученная А. А. Смородинцевым и М. П. Чумаковым;  Вакцинация: однократно в возрасте 12- 15 месяцев;  Ревакцинация: однократно в 6 лет;  У 95% вакцинированных формируется длительный иммунитет;  В очаге инфекции проводят пассивную профилактику нормальным человеческим иммуноглобулином ( не позднее 7-го дня инкубационного периода). Продолжительность иммунитета 1 месяц