Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Методичка Хим.процессы в живых организмах.doc
Скачиваний:
5
Добавлен:
06.05.2019
Размер:
1 Мб
Скачать
☆

Лабораторна робота №4

Тема: Дія фосфоліпаз підшлункової залози на гліцерофосфоліпіди яєчного жовтка

Мета роботи: засвоїти методику визначення дії фосфоліпаз підшлункової залози на гліцерофосфоліпіди яєчного жовтка

Принцип методу. Про дію фосфоліпаз підшлункової залози на гліцерофосфоліпіди яєчного жовтка можна судити за появою вільної фосфорної кислоти, здатної утворювати жовтий осад при нагріванні з молібдатом амонію.

Хід роботи:

У дві пробірки наливають по 5 крапель суспензії яєчного жовтка. У 1-у пробірку додають 2 краплі панкреатину, а в 2-у (контрольну) − 2 краплі води. Обидві пробірки поміщають в термостат при 38 0С на 30 хв. Після інкубації в обидві пробірки наливають по 5 крапель молібденового реактиву, нагрівають їх на полум'ї пальника і охолоджують водою під краном.

Висновок до лабораторної роботи.

Лабораторна робота №5

Тема: Визначення концентрації загального холестерину у біологічних рідинах (за методом Ілька)

Мета роботи: засвоїти методоку визначення концентрації холестерину в сироватці крові.

Клініко-діагностичне значення: За визначенням концентрації холестерину в сироватці крові судять про ліпідний обмін. При порушенні ліпідного обміну холестерин може накопичуватися в крові.

Збільшення вмісту холестерину спостерігається при атеросклерозі, цукровому діабеті, вроджених порушеннях обміну, захворюваннях печінки.

Принцип методу: Холестерин в присутності карбонового ангідриду та суміші оцтової та сірчаної кислот утворює речовину зеленого кольору. Інтенсивність забарвлення дослідного розчину прямопропорційна концентрації холестерину.

Реактиви:

1. Реагент на холестерин (карбоновий ангідрид – 75-85%, оцтова кислота – 15-25%).

2. Калібрувальний розчин холестерину (4,665±0,2328) ммоль/л.

3. Сульфатна кислота концентрована.

4. Дистильована вода.

5. Фізіологічний розчин (0,9%-ний розчин NaCl).

Обладнання:

  1. Штатив для пробірок.

  2. Пробірки місткістю 10 мл (контрольна, калібрувальна, дослідна проби) (ГОСТ 1770-74).

  3. Мірна колба місткістю 200 мл (1 шт.) (ГОСТ 1770-74).

  4. Дозатор – 100 мкл, 1000 мкл, 200 – 2000 мкл; наконечники.

  5. Піпетки місткістю 1, 2, 5 та 0,05 мл.

  6. Водяний термостат або автоматична водяна баня, здатна підтримувати температуру (37о С).

  7. Фотоелектроколориметр (λ=630–690 нм); кювети з товщиною прошарку 1 см або 0,5 см.

  8. Стеклограф або маркер.

  9. Годинник.

Матеріал для аналізу: сироватка крові.

Приготування робочих розчинів.

1. Робочий розчин. Вміст флакона з реактивом на холестерин перенести до термостійкої колби місткістю 200 мл та поступово додати, при охолодженні холодною водою і перемішуванні, 9 мл ссульфатної кислоти з флакона. Отриманий реактив повинен бути безбарвним або блідо-жовтим. Зберігається на протязі одного тижня у холодильнику в склянці із темного скла з добре притертою скляною пробкою. Якщо реактив набуде жовтого кольору, то він не придатний до використання.

2. Калібрувальний розчин холестерину – придатний до використання.

Після розкриття ампули реактив зберігають у холодильнику в посуді з добре притертою скляною або пластмасовою пробкою. При збереженні в герметичній ємності розчин стійкий. Концентрація холестерину в розчині (4,665±0,2328) ммоль/л ((1,8±0,09) мг/мл).