Принципы лабораторной диагностики

Возбудитель может быть выделен от больных и трупов, из переносчиков и (при эндемических риккетсиозах) от диких животных (обычно грызунов), заражающихся в эндемичных очагах. При всех риккетсиозах источник выделения — кровь, взятая из вены больного в ранние сроки лихорадки; можно использовать цельную, дефибринированную кровь или сгустки (что лучше всего).

Один из основных методов — микроскопия возбудителя в окрашенных мазках; методы окрашивания имеют первостепенное значение. В практике применяют окраску по Романовскому-Гимзе, по Кастанеде и по Маккиавело (можно использовать модификацию П.Ф. Здродовского).

Биологическая проба (проба Музера-Нейла) Исследуемый материал вводят лабора­торным животным; наиболее приемлемы морские свинки, которым материал вводят внутрибрюшинно. При эпидемическом риккетсиозе предпочтительно использовать сам­цов, т.к. у них развивается специфический периорхйт с накоплением риккетсии в мезотелии влагалищных оболочек яичка (клетки Музера). Для выделения возбудителей везикулярного, осповидного риккетсиозов и лихорадки цуцугамуши можно заражать белых мышей (вводят 0,5 мл крови). Для диагностики Q-лихорадки рекомендуют заражать морских свинок непосредственно в тестикулы (0,3-0,5 мл крови). Однако для выделения риккетсии Провачека эти методы малоэффективны. Выделение возбудителя сыпного тифа мож­но провести, используя платяных вшей, в желудках которых риккетсии активно размно­жаются. После кормления вшей инфекцию воспроизводят на чувствительном животном (в очень большом количестве накапливаются в головном мозге). Любые манипуляции с возбудителем представляют большую опасность.

Серологические исследования составляют основу современной лабораторной диагностики; получение надежных результатов возможно лишь к концу 1 нед заболевания, и лечение больного следует начинать эмпирически, не дожидаясь результатов лаборатор­ных исследований.

Реакция Вейля-Феликса — диагностическая реакция, основанная на способности сыворотки пациентов, страдающих различными риккетсиозами, агглютинировать ОХ-штаммы (особенно ОХ₁₉ и OX₂) Proteus vulgaris. Следует помнить, что AT к возбудителю сыпного тифа перекрестно реагируют только с бактериями штамма ОХ₁₉. Реакция обусловлена структурным сход­ством поверхностных Аг.

РСК — основной метод диагностики в РФ и других странах, включая США; обладает достаточной чувствительностью и специфичностью; мало пригодна для диагностики свежих случаев, т.к. для выявления достоверного увеличения титров AT необходим большой временной интервал. Исследование проводят в парных сыворотках (титры 1:20-1:80).

Более чувствительна и специфична реакция непрямой иммунофлюоресценции; метод позволяет идентифицировать IgM и IgG, что удобно для ранней диагностики и определения стадии болезни. При постановке реакции существует риск получения ложноотрицательных результатов, особенно на ранней стадии заболевания.

Для выявления R. rickettsii используется реакция прямой иммунофлюоресценции, позво­ляющая идентифицировать Аг возбудителя в биоптатах кожных поражении (можно использо­вать и другие иммунохимические методы); специфичность реакции — 100% (чувствительность достигает 70%); позволяет диагностировать заболевание уже на 3-4 сут; единственный адекватный серологический тест, пригодный для диагностики.

Для диагностики активных форм эрлихиозов разработана ПЦР; учитывая спорадический характер заболевании, широко не применяется.

Род Coxiella

Представлен короткими палочками 0,2-0,40,4-1 мкм; по тинкториальным свойствам, зависимости от клеток хозяина, естественной связи с переносчиками-членистоногими и позвоночными сходны с прочими риккетсиями; образуют фильтрующиеся формы. Размножаются преимущественно в вакуолях и фаголизосомах клеток, хорошо растут в желточном мешке куриного эмбриона. Способны к фазовой изменчивости с образованием форм, аналогичных S- и R-формам бактерий; в природе встречаются в I фазе, после длительных пасса­жей трансформируются во II фазу; диссоциация носит обратимый характер (после пассажей на животных). Риккетсии II фазы склонны к спонтанной агглютинации и агглютинации в нормальной сыворотке, фагоцитируются при отсутствии AT. Образуют спорообразные формы, обеспечи­вающие устойчивость к высоким температурам и высушиванию: типовой вид — С. burnetii, вызывает своеобразное заболевание, известное как Q-лихорадка (лихорадка девятой мили, квадрилатеральная лихорадка). Как отдельное заболевание впервые была выявлена в 1935 г. Дерриком в Южном Куинсленде (Австралия); возбудитель был идентифицирован в 1937 г. и по предложению Деррика назван С. bumetii. Независимо от австралийских исследователей в США Кокс выделил фильтрующийся агент из клещей-переносчиков лихорадки Скалистых Тор и доказал его риккетсиозную природу (1938). В Европе история заболевания связана с эпидемиями так называемого «балканского гриппа», отмечаемыми в 1941-1943 гг. среди немецких войск, дислоцированных на Балканах, в Греции и Крыму. Заболевание регистрируют повсеместно, особенно в районах с развитым животноводством. Переносчики — многие виды иксодовых, аргасовых и гамазовых клещей (среди животных и птиц). Резервуар — клещи (возможна трансовариальная передача), грызуны, птицы и домашние животные (крупный рога­тый скот). Основной путь заражения — ингаляция возбудителя.

Род Rochalimaea

Морфологически сходны с представителями рода Rickettsia и проявляют аналогичные тинкториальные свойства. Растут преимущественно в вакуолях клеток позвоночных; в организме членистоногого-хозяина живут во внеклеточной среде (очень устойчивы к физическим и химическим агентам во внеклеточном окружении). Их также можно культивировать на бесклеточных средах, например на КА или ША. Систематика рода остается незавершенной, некоторые авторы предлагают отнести их к семейству Bartonellaceae. Реакция Вейля-Феликса отрицательна. Типовой вид — R. quintana.

Волынская лихорадка (пятидневная или тибиальная лихорадка, болезнь Вернера-Хисса). Доброкачественное инфекционное заболевание; известно еще с античного времени, т.к. поражения с похожей симптоматикой упоминаются в трудах Гиппократа и Галена Под названием «молдаво-валахской лихорадки» было описано в период русско-турецкой войны 1877-1878 гг. В современную инфекционную патологию заболевание вошло во время первой мировой вой­ны, впервые появившись в английском экспедиционном корпусе во Фландрии (1915); забо­леваемость исчислялась сотнями тысяч человек, и тогда болезнь получила свое наиболее популярное название — траншейная, или окопная лихорадка. Еще до начала войны в Польше были зарегистрированы эндемичные очаги, где заболевание получило название «волынская лихорадка» (Лаверан, 1927). Возбудитель — R. quintana, выделен Тепфером (1916), Эркрайтом и Бэкотом (1919). Заболевание распространено в очагах педикулеза (но часто не распознается врачами), и при наличии педикулеза в местах скопления большого количества людей может формировать эпидемические вспышки. Переносчик — платяная вошь. Резервуар — больной человек (возможно длительное носительство)

Болезнь «кошачьих царапин» (гранулема Малларе). Возбудитель — Rochalimaea henselae — полиморфная грамотрицательная бактерия 1-30,2-0,5 мкм. Оксидаза-, каталаза- и уреаза-отрицательна, инертна к углеводам. Заболевание протекает доброкачественно и напоминает поражения, вызываемые Alipia felis. Распространено повсеместно; обычно возникает после кошачьего укуса или царапин; наиболее часто наблюдают у детей. Характерны медленно заживающие повреждения, регионарный лимфаденит, лихорадка; в большинстве случаев заболевание спонтанно разрешается в течение нескольких месяцев.

В некоторых случаях наблюдают осложнения: поражения ЦНС (энцефаломенингиты, парезы), дыхательных путей (пневмонии), печени и селезенки (увеличение печени и селезенки, печеночная пурпура); наиболее часто они ассоциированы с дефектами иммунологического реагирования.

Род Еhrlichia

В последние годы отмечают рост заболеваний вызываемых риккетсиями рода Еhrlichia (семейство Ehrlichieae), известных как эрлихиозы. Подавляющее большинство эрлихий патогенно для различных животных: собак (особенно немецких овчарок), лошадей и др. Первой эрлихией, выделенной от человека, была Е. sennetsu (1986), позднее в Форт Чэффи (Арканзас, США) у пациента с эрлихиозом был выделен ранее неизвестный микроорганизма получивший название Е. chaffeensis. Со дня выявления первого случая зарегистрированы больше 200 больных. Резервуар — олени и, по мнению некоторых авторов, собаки; переносчики – клещи и прочие кровососущие членистоногие. Для поражений характерна выраженная сезонность — до 80% поражений отмечают с мая по июль. Наибольшее количество случаев зарегистрировано в центральных и юго-западных штатах США — Арканзасе, Оклахоме, Миссури, Вирджинии и Теннесси.

Эрлихии размножаются в тканевых макрофагах и моноцитах периферической крови с последующей их гибелью (механизм цитотоксического действия остается неизвестным) и гематогенным диссеминированием возбудителя по всему организму (включая костный мозг и орга­ны ЦНС). Формирующийся симптомокомплекс напоминает симптомы пятнистой лихорадки, Скалистых Гор (на фоне лейко- и тромбоцитопении), но сыпь и васкулиты отмечают редко; характерный признак болезни — повышенное содержание аминотрансфераз в сыворотке крови.

Диагностика заболевания: обычно проводят микроскопию мазков периферической крови; при эрлихиозе в 1-2% нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов обнаруживают внутриклеточные гроздеобразные включения-морулы, напоминающие ягоды малины. Морулы — вакуоли размером 2-5 мкм, содержащие эрлихии. Приемлемо проведение серологических исследований с использованием доступных Аг Е. canis, перекрестно реагирующих с AT к Е. sennetsu.