1 День в лаборатории:

• сверка поступившего материала с сопроводительными документами;

• проведение органолептических исследований;

• Из присланных для исследования проб в зависимости от характера пат. изменений и предполагаемого диагноза готовят 2-10 мазков – отпечатков, которые высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают по Грамму, 2 % р-ром сафранина или Рибигера. При просмотре исключают возбудителя сибирской язвы, ЭМКара, и др. инфекций, но более трудоёмкая часть исследований относится - установление вида бактерий вызывающих пищевые токсикоинфекции. К ним относится бактерии сальмонелёзного, кишечного, протеусного и других родов; особенно опасен паратифозный род (Salmonella). Сальмонелл выявляют в четыре последовательных этапа: первичный посев, обогащение, посев со среды обогащения и подтверждение.

• 1 этап – первичный посев на МПА и МПБ.

• Из взвеси исследуемого материала делают посев на плотные элективные среды, выдерживают 18-24 часа в термостате (37⁰С) и определяют наличие колоний типичных или подозрительных для сальмонелл. Сальмонеллы растут на средах в виде:

1. Эндо – круглые, бесцветные, слегка розоватые прозрачные, мелкие колонии;

2. Левина – прозрачных, бледных розоватых или розово-фиолетовых колоний.

   • 2 этап – обогащение

Для накопления сальмонелл проводят посев на жидкие селективные среды: Мюллера, Киллиана, Кауфмана, селенитовый Ф. бульон, хлористомагниевую среду М. Их выдерживают в термостате при температуре 37⁰С.

* Первичный учёт посева рекомендуется сделать через 12 часов и если на элективных средах не будет роста, делают пересев на новые элективные среды от сред обогащения и вновь на 24 часа в термостат.

Схема работы 2 дня

• Учёт первичного посева: определяют величину, форму, количество – в крестах. Если на элективных или накопительных средах характерного для бактерий сальмонеллы роста, то лаборатория даёт предварительный ответ об отсутствии сальмонелл. Если выросли – то среды обогащения уже не нужны. Дальнейшие исследования проводят с элективных сред: бактериоскопию, определение подвижности (метод «висячей» капли)

3 этап - обогащения

Проводят пересев с жидких сред на плотные селективные диагностические среды, которые после термостатной выдержки исследуют на присутствие колоний типичных или подозрительных на сальмонелл.

4 этап – подтверждение наличия бактерий рода сальмонелл определением морфологических, биохимических и серологических свойств.

При наличии роста на питательных средах берут 3-5 подозрительных колоний с каждой чашки. Из части колоний делают мазок, окрашивают по Грамму, микроскопируют. Одновременно исследуют на подвижность в висячей капле. Оставшуюся часть используют для приготовления взвеси, которую используют для биохимической и серологической типизации.

Сальмонеллы относятся к одному из 12 родов семейства бактерий Enterobacteriacae, систематизировано около 2000 серотипов сальмонелл. Морфологически это палочки с закруглёнными концами, иногда овальной формы, дл. 2-4 и ширина -0,5 ммк, подвижны (кроме птичьего), по грамму окрашиваются отрицательно, спор и капсул не образуют. Аэробы или факультативные анаэробы. Растут при 37⁰С, но при низких температурах не теряют жизнеспособности. Вместе с большой общностью морфологических и культуральных характеристик, а также токсинообразования, эти бактерии отличаются друг от друга по биохимическим и антигенным (серологическим) свойствам. Эти различия и положены в основу методов типизации.

Существую два основных метода типизации: серологический и биохимический.

Серологическая типизация – используют реакцию аглютинизации с сальмонелёзными сыворотками. Сальмонеллы имеют два вида антигенов: термостабильный О-антиген (соматический, связанный с телом бактерий) и термолабильный Н – антиген (жгутиковый, связан с двигательным аппаратом бактерий). По различию в строении О- и Н- антигенов у отдельных видов сальмонелл их разделили на несколько серологических групп – А, В, С, Д, Е, и т.д. Каждый вид бактерий, входящих в определённую серологическую группу, будет агглютинироваться с сывороткой, приготовленной с помощью иммунизации животного культурой любой бактерии, входящей в данную группу. Такие сыворотки называют групповыми, а реакцию – групповой. Положительная реакция агглютинации при постановке её с пятью групповыми сыворотками (АВСДЕ), указывает на принадлежность бактерий к роду сальмонелла.

Существуют также - специфические монорецепторные сыворотки. Реакция агглютинизации с монорецепторными сыворотками позволяет типизировать представителей этих бактерий – до вида.

Биохимическая типизация основана на различии у сальмонелл определённых ферментов. Одни бактерии способны разлагать те или иные углеводы или спирты, а другие такой способностью не обладают. При биохимической типизации применяют элективные среды и цветной (пёстрый) ряд сред. Каждая из таких сред имеет в составе ингредиенты: сахар или спирт, а также индикатор, по изменению цвета которого можно судить о разложении ингредиента. С помощью элективных сред и малого «пёстрого» ряда можно дифференцировать от бактерий рода Е. соли, а также определить вид сальмонеллёзных бактерий.

Среда Эндо содержит сахар – лактоза, а индикатор – фуксин, обесцвеченный сернистокислым натрием. Бактерии кишечной палочки разлагают лактозу, а сальмонеллёзные не разлагают, при разложении лактозы образуется молочная кислота, которая восстанавливает красный цвет фуксина. Колонии кишечной группы на среде Эндо красно - фиолетового цвета с металлическим блеском, сальмонеллы растут в виде полупрозрачных колоний светло-розового цвета с голубоватым оттенком. Далее применяют малый и большой «пёстрый» ряд сред.

Среда Грисса с различными сахарами и многоатомными спиртами, бульон с глицерином (по Штерну), молоко, мясо-пептоновый бульон. Принадлежность культуры к определённому виду бактерий по изменению сред пёстрого ряда устанавливают по схеме.

На 2 день можно дать предварительное заключение о наличии сальмонеллёза на основании:

1. характерных колоний на элективных средах;

2. выявлении грам (-) палочек в мазках-отпечатках;

3. при выявлении подвижности;

4. при (+) пробной реакции аглютинизации.

Схема 3 зня

• Идёт учёт «пёстрого» ряда – проведение типизации;

• дают окончательное заключение с названием Сальмонеллы.

Обнаружение подвижных, грам (-) палочек, не фермитирующих лактозу и сахарозу, но ферментирующих глюкозу и манит с образованием кислоты и газа, дающих (+) реакцию агглютинации с О- и Н- сальмонелёзными сыворотками, указывает на присутствие в мясе бактерий рода сальмонелла.

Методы обнаружения анаэробов.

Бактериологические исследования на присутствие возбудителей анаэробных инфекций (Cl. botulinum, Cl. perfringens) проводят при подозрении на заболевания: ботулизм, энтеротоксимия овец, дизентерия ягнят, некробактериоз, столбняк, ЭМКар, злокачественный отёк, брадзот овец.

Сущность выявления анаэробов заключается в определении их морфологии, способности расти на питательных средах в отсутствии кислорода воздуха и установлении патогенности заражением лабораторных животных.