Занятие № 20

РАБОТА № 1. ТЕСТ ТОЛЕРАНТНОСТИ К ГЛЮКОЗЕ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: тест толерантности к глюкозе (нагрузка глюкозой или сахарная нагрузка) проводят с целью углубленного исследования углеводного обмена в организме человека при подозрении на недостаточную эндокринную функцию поджелудочной железы (скрытая форма сахарного диабета) или нарушение гликогенообразовательной способности печени.

ХОД ИССЛЕДОВАНИЯ: натощак (утром, через 8 – 10 часов после приема пищи) забирают кровь из пальца (1-я проба). Пациент после этого (в течение 5 мин) выпивает раствор глюкозы в 200 мл воды, из расчета 1 г/кг массы тела (сахароза 1,5 г/кг). Через 30 минут от времени забора первой пробы забирают 2-ю пробу и через каждые 30 минут забирают пробы в течение 2,5 часов. На практике достаточно осуществлять следующий забор проб: натощак, затем через 30 минут, 1 час и 2 часа после нагрузки. В каждой из проб определяют концентрацию глюкозы и строят график, откладывая на оси ординат содержание глюкозы, а на оси абсцисс - время забора проб. Полученный график называется сахарная кривая.

У здоровых людей максимальное значение содержания глюкозы в крови наблюдается между 30-й и 60-й минутами. В норме оно не превышает 180 мг% (9,9 ммоль/л) и к 2-м часам снижается до исходного уровня. При нарушении утилизации углеводов сахарные кривые отличаются от нормальной.

ХОД РАБОТЫ:

на лабораторных занятиях необходимо провести определение содержания глюкозы в трех пробах крови, полученных от пациентов. Первая проба – кровь, взятая натощак; вторая – через 1 час после углеводной нагрузки; третья – через 2 часа после нагрузки. Методика количественного определения глюкозы изложена в работе «Количественное определение глюкозы в крови. Энзиматический (глюкозооксидазный метод».

По результатам определения следует построить график и определить тип сахарной кривой.

РЕЗУЛЬТАТ:

ВЫВОД:

Дата: ________________

Занятие № 21 работа № 1. Количественное определение пировиноградной кислоты в моче

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: пировиноградная кислота (ПК) образуется в тканях организма в значительных количествах и является важным метаболитом углеводного обмена. Пути превращения ПК представлены на схеме:

ПРИНЦИП И ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА: ПК в щелочной среде реагирует с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ) с образованием 2,4-динитрофенилгидразона ПК, имеющего коричнево-красный цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации ПК.

ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки: контроль и опыт

ПРОБА отмерить	ОПЫТ	КОНТРОЛЬ
Моча Н2О КОН (25 % спиртовой раствор) Раствор 2,4-ДНФГ (0,1 %)	1,0 мл - 1,0 мл	- 1,0 мл 1,0 мл
	Перемешать содержимое обеих пробирок одновременно, 1 минуту.
	0,5 мл	0,5 мл
	Перемешать, инкубация 15 минут при 18оС ФЭК, синий светофильтр, кювета 5 мм Определяют экстинкцию против контрольной пробы.

РЕЗУЛЬТАТ: ΔЕ = .

Расчет проводят по калибровочному графику. Полученный результат (…… мкг) умножают на переводной коэффициент.

С = …. Х 11,366 = мкмоль/сут.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

У здоровых людей при сбалансированном пищевом рационе за сутки с мочой выделяется 114-284 мкмоль (10-25 мг) ПК. Содержание ПК в крови в норме составляет 56,8 - 113,6 мкмоль/л.

Содержание пировиноградной кислоты увеличивается в крови и моче при авитаминозе и гиповитаминозе В₁, при сахарном диабете, сердечной недостаточности, гиперфункции гипофизарно-адреналовой системы.

ВЫВОД:

Дата _________________

ЗАНЯТИЕ № 22

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА

ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ УГЛЕВОДОВ»

Дата: _________________

ЗАНЯТИЕ № 24

РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩИХ ЛИПИДОВ

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: определение количества общих липидов в сыворотке крови дает информацию о состоянии метаболизма липидов в организме. Общие липиды крови включают: триглицериды, фосфолипиды, холестерин, свободные жирные кислоты, липопротеины.

ПРИНЦИП МЕТОДА: липиды экстрагируются из сыворотки крови смесью спирта и эфира (смесью Блюра). При взаимодействии экстракта липидов с раствором серной кислоты образуется стойкая мелкодисперсная эмульсия, оптическую плотность которой измеряют нефелометрически, по степени мутности смеси.

ХОД РАБОТЫ: взять одну центрифужную пробирку

ПРОБА Отмерить	ОПЫТ
Смесь Блюра (этанол: эфир, 2:1) Сыворотка крови (без гемолиза) Н2SO4 1%	2 мл 0,1 мл
	Водяная баня, 60 –70о С, осторожно подогреть пробу до закипания содержимого пробирки. Охладить. Центрифугировать 10 минут при 1500 об/мин. Центрифугат перелить в сухую пробирку.
	3 мл Интенсивно размешать, инкубация 10 минут при 18º С. ФЭК, λ = 630 нм, кювета 10 мм. Определить экстинкцию пробы против Н2О.

РЕЗУЛЬТАТ: Е =

Содержание общих липидов находят по калибровочному графику.

С = г/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Нормальное содержание общих липидов в сывортке крови 4 – 8 г/л.

Повышение общих липидов в крови (гиперлипемия) как физиологическое явление наступает через 1-4 часа после принятия пищи, а также наблюдается при ожирении, сахарном диабете, атеросклерозе, гиперлипопротеинемиях, ишемической болезни сердца, гипотиреозе, липоидном нефрозе, циррозе печени, панкреатите. Понижение общих липидов в крови (гиполипемия) наблюдается при голодании.

ВЫВОД:

Дата: __________