3. Определение ацетона (кетоновых тел) в моче (экспресс-метод).

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: кетоновые тела (ацетоацетат, -оксибутират, ацетон) появляются в моче при нарушении углеводного и жирового обмена (сахарный диабет, голодание). Определение кетоновых тел в моче важно для диагностики болезней, для контроля за ходом лечения.

ПРИНЦИП МЕТОДА: цветная реакция взаимодействия кетоновых тел с реагентом, пропитывающим экспресс-полоску.

ХОД РАБОТЫ: опустить тест-полоску на 10 секунд в пробирку с исследуемой мочой.

РЕЗУЛЬТАТ:

ВЫВОД:

4. Качественная реакция на кровяные пигменты.

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: при патологии почек и мочевыводящих путей в моче может появляться кровь (гематурия) или кровяные пигменты (гемоглобинурия).

ПРИНЦИП МЕТОДА: при разложении Н₂О₂ кровяными пигментами (пероксидазное действие) до атомарного кислорода происходит окисление бензидина и изменение окраски раствора в сине-зеленый цвет.

Ход работы: взять пробирку: опыт

ОТМЕРИТЬ	ОПЫТ
МОЧА Раствор бензидина 5% в уксусной кислоте Перекись водорода (Н2О2) 3%	20 капель (прокипятить) 5 –7 капель 5 капель

РЕЗУЛЬТАТ:

В Ы В О Д:

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Кровяные пигменты появляются в моче при гломерулонефритах, тяжелых инфекционных заболеваниях, отравлениях гемолитическими ядами, при ожогах, раке мочевого пузыря, цистите, мочевых камнях.

Дата ______________

Занятие № 35 работа № 1. Определение гемоглобина гемоглобинцианидным методом.

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ:

содержание гемоглобина и эритроцитов крови изменяется под влиянием различных физиологических, патологических факторов и при назначении лекарств. В этой связи определение гемоглобина в крови имеет важное значение для диагностики различных заболеваний.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

гемоглобин окисляется железосинеродистым калием в гемиглобин. Далее гемиглобин взаимодействует с ацетонциангидрином. Образующийся при этом окрашенный гемиглобинцианид определяют фотометрически.

ХОД РАБОТЫ: взять 1 пробирку.

Проба Отмерить	Опыт
Кровь Рабочий реактив	0,02 мл 5,0 мл

Перемешать и через 10 мин. измерить оптическую плотность раствора против контроля (рабочий реактив) при λ 540 нм, кювета 1,0 см.

РЕЗУЛЬТАТ: Е₀ =

Концентрацию гемоглобина в г/л рассчитывают по формуле:

С₀ = Е₀ х 392 = г/л

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Концентрация гемоглобина в крови взрослого человека составляет: 130-160 г/л у мужчин и 115-145 г/л у женщин.

Повышение концентрации гемоглобина возникает при: потере жидкости (происходит сгущение крови), тканевой гипоксии (заболевания легких, сердечно-сосудистая недостаточность, условия высокогорья), при язвенной болезни, у новорожденных в первые часы жизни.

Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при: анемии, наследственных и гемолитических гемоглобинопатиях, дефиците витаминов В₁₂, Е, фолиевой кислоты.

В Ы В О Д:

РАБОТА № 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ ФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: кальций является составным компонентом костной ткани, участвует в функционировании свёртывающей системы крови, в мышечном сокращении, в проведении нервного импульса, как вторичный посредник в реализации гормонального сигнала внутри клетки-мишени.

ПРИНЦИП МЕТОДА: кальций в щелочной среде с глиоксальбис (2-гидроксианилом) образует окрашенное соединение. Интенсивность окраски раствора прямопропорциональна концентрации кальция в сыворотке крови и определяется фотометрически.

ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки.

ВНЕСТИ	ОПЫТ	СТАНДАРТ	КОНТРОЛЬ
БУФЕР, мл	1,0	1,0	1,0
ХРОМОГЕН, мл	1,0	1,0	1,0
СЫВОРОТКА, мл	0,05	-	-
СТАНДАРТ Са, мл	-	0,05	-
ВОДА ДИСТИЛ.,мл	-	-	0,05

Перемешать, инкубация 5-10 мин. Измерить оптическую плотность в интервале 5-12 мин при λ = 540 нм, кювета 0,5 см.

РЕЗУЛЬТАТ: Е₀ =

Е_ст =

Е₀

Р АСЧЁТЫ: С₀ = · 2,5 = ммоль/л

Е_ст

Стандарт кальция = 25 ммоль/л

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Содержание кальция в сыворотке крови составляет в норме 2,00-2,75 ммоль/л.

Физиологическая гиперкальцемия бывает у новорожденных, у недоношенных, а также у некоторых лиц после принятия пищи.

Патологическая гиперкальцемия наблюдается при: гиперпаратиреозе (мобилизация ионов кальция из костей), акромегалии, злокачественных опухолях с поражением костей, миеломной болезни, саркоидозе, тиреотоксикозе, раке легкого, почки, поджелудочной железы, печени.

Гипокальцемия отмечается при: дефиците витамина Д, гипопаратиреозе, хронической почечной недостаточности, нефротическом синдроме, циррозе печени, остром панкреатите, остеомаляция, алкоголизме.

ВЫВОД: