- •Оглавление
- •Предисловие
- •Методические указания
- •1. Питательные среды, применяемые в бактериологической практике
- •1.1. Требования, предъявляемые к питательным средам
- •1.2. Классификация питательных сред
- •1.3. Условия культивирования микроорганизмов
- •Распределение бактерий в зависимости от требований к условиям культивирования
- •2. Основы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний
- •2.1. Техника сбора патологического материала от больного для бактериологического исследования
- •Взятие крови.
- •Взятие спинномозговой жидкости
- •Взятие желчи
- •Взятие мочи
- •Взятие отделяемого дыхательных путей
- •Взятие отделяемого открытых инфицированных ран
- •Взятие отделяемого глаз
- •Взятие отделяемого женских половых органов
- •Взятие материалов при аутопсии
- •Взятие рвотных масс
- •Взятие промывных вод желудка
- •Взятие испражнений
- •Сопроводительный документ (направление)
- •2.2. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней
- •2.2.1. Бактериоскопический (микроскопический) метод
- •2.2.2. Бактериологический метод
- •2.2.3. Биологический метод
- •2.2.4. Серологический метод исследования
- •2.2.5. Аллергологический метод
- •3. Серологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний
- •3.1. Реакция агглютинации
- •3.1.1. Ориентировочная реакция на стекле
- •3.1.2. Развернутая (пробирочная) реакция агглютинации
- •3.1.3. Реакция непрямой гемагглютинации
- •3.1.4. Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест)
- •3.2. Реакция преципитации
- •3.2.1. Реакция преципитации с разведённым антигеном
- •3.2.2. Реакция кольцепреципитации
- •3.2.3. Иммунодиффузия по Оухтерлони
- •3.2.4. Иммуноэлектрофорез
- •3.2.5. Реакция флоккуляции
- •3.2.6. Реакция нейтрализации
- •3.3. Реакции лизиса
- •3.3.1. Реакция бактериолиза
- •3.3.2. Реакция гемолиза
- •3.4. Реакция связывания комплемента
- •3.5. Реакции с меченными компонентами
- •3.5.1. Иммунофлюоресцентные методы
- •Реакция прямой иммунофлюоресценции
- •Непрямой иммунофлюоресцентный метод
- •3.5.2. Иммуноферментный анализ
- •Прямой метод ифа
- •Непрямой метод ифа
- •3.5.3. Радиоиммунный анализ
- •3.6. Иммуноблотинг
- •4. Химиотерапевтические препараты. Антибиотики
- •4.1. Требования, предъявляемые к химиотерапевтическим препаратам. Химиотерапевтический индекс
- •4.2. Основные группы химиотерапевтических препаратов
- •4.3. Антибиотики
- •4.3.1. Основные этапы получения антибиотиков
- •4.3.2. Классификация антибиотиков
- •Классификация антибиотиков
- •4.3.3. Антибиотикорезистентность Причины формирования антибиотикорезистентности
- •4.3.4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- •4.3.5. Осложнения и побочные действия антибиотиков
- •4.3.6. Основные причины неэффективности антибиотикотерапии
- •5. Учение об инфекции и иммунитете
- •5.1. Факторы патогенности бактерий
- •Сравнительная характеристика экзо- и эндотоксинов
- •5.2. Инфекционные свойства вирусов
- •5.3. Особенности вирусных инфекций
- •5.4 Невосприимчивость организма к инфекционным агентам
- •5.5. Иммунокомпетентные клетки
- •5.6. Формы иммунного ответа
- •5.6.1. Иммунный ответ по гуморальному типу
- •Динамика образования антител
- •5.6.2 Иммунный ответ по клеточному типу
- •5.6.3. Иммунологическая толерантность
- •6. Биологические препараты для профилактики, лечения и диагностики инфекционных заболеваний
- •6.1. Краткая квалификационная характеристика биологически активных препаратов
- •6.1.1. Лечебно-профилактические препараты
- •6.1.2. Диагностические препараты
- •6.2.1. Вакцины
- •6.3.1. Иммунные сыворотки Сыворотка противодифтерийная
- •Антитоксичная противостолбнячная сыворотка лошадиная
- •Сыворотки противоботулинические типов а,в,с,е,f
- •Антитоксическая противогангренозная поливалентная сыворотка
- •6.3.2. Иммуноглобулины
- •Гамма – глобулин противолептоспирозный
- •Стафилококковый бактериофаг жидкий
- •7.7.1. Антигенные препараты
- •Антиген аденовирусный для рск
- •Стрептолизин–о, сухой
- •6.7.3. Бактериофаги
- •Бактериофаги стафилококковые типовые диагностические сухие ( международный набор, Англия )
- •6.7.4. Бактериальные аллергены
- •6.7.5. Дополнительные диагностические препараты
- •7.2. Инфекция и иммунитет
- •1.4. Частная вирусология
- •7.5. Принцип и образец построения экзаменационного билета
- •7.3. Частная микробиология
- •Образец билета
- •7.6. Планы ответа студентов по некоторым разделам
- •7.6.1. Схема ответа по частной микробиологии
- •7.6.2. Схема ответа по биологически-активным препаратам
- •Заключение
3.1.3. Реакция непрямой гемагглютинации
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) предложена в 1946 г. А. И. Кравченко и М. И. Соколовым, которые в первые установили, что эритроциты человека и других животных обладают способностью адсорбировать на своей поверхности бактериальные полисахариды. Такие адсорбированные антигены вступают в реакцию с сыворотками, содержащими соответствующие данному антигену антитела. Несколько позже Бойден показал, что предварительная обработка эритроцитов некоторыми веществами (например, танином) способствует адсорбции на них белковых молекул. Эритроциты с адсорбированными на них белковыми веществами агглютинируются иммунными сыворотками, содержащими антитела к этим белкам. В последующем Т. Рыцай предложил модификацию метода, предусматривающую сенсибилизацию эритроцитов, обработанных танином, иммунной сывороткой. Такие эритроциты с фиксированными на их поверхности антителами применяются для обнаружения соответствующих антигенов. Следовательно, РНГА может применяться в двух вариантах:
а) для сероидентификации, то есть для определения неизвестного возбудителя болезни или его антигенов при исследовании патологического материала; в этих случаях используют эритроциты, обработанные (сенсибилизированные) специфическими антителами;
б) для серологической диагностики инфекционных заболеваний путем обнаружения в исследуемых сыворотках специфических антител; в данном варианте применяются эритроциты, сенсибилизированные специфическими антигенами бактерий, риккетсий или вирусов.
Оценка результатов РНГА проводится по внешнему виду осадка эритроцитов в пробирках или лунках пластикатовых планшет без их встряхивания. При положительной РНГА образуется характерный кружевной осадок с непрямыми волнистыми краями ( «перевернутый зонтик»). При отрицательной реакции эритроциты оседают в форме компактного небольшого диска с ровными краями на дне пробирок или лунок (осадок в виде «пуговки»).
РНГА отличается высокой чувствительностью и спецефичностью, и по этим качествам значительно превосходит многие другие серологические реакции. К достоинствам реакции относится и возможность получить результаты в сравнительно короткие сроки – через 2-3 часа.
3.1.4. Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест)
Неполные антитела, в отличие от нормальных, моновалентны, поскольку они имеют один активный центр, способный взаимодействовать только с одним эпитопом антигена в то время, как другие эпитопы остаются не связанными.
В результате этого не происходит образование крупных комплексов, выпадающих в осадок в растворе электролита. Последние проявляются только в реакциях с бивалентными антителами. Для исправления этого положения в реакцию вводится антиглобулиновая сыворотка (АГС), содержащая бивалентные антитела к глобулину. Она свяжет между собой моновалентные антитела, содержащиеся в исследуемом материале. Таким образом, произойдет визуально видимая реакция гемагглютинации или агглютинация, свидетельствующая о наличии в исследуемой сыворотке неполных (моновалентных) антител. Например, в случае беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом у неё в сыворотке крови появятся неполные антитела. Для их выявления в пробирки с исследуемой сывороткой крови вносят в качестве антигена резус-положительные эритроциты, а затем АГС. Появление гемагглютинации свидетельствует о положительной реакции.