- •Оглавление
- •Основная литература
- •Дополнительная литература
- •Тематический план лекций для до
- •Тематический план лекций для озо
- •План лабораторных занятий для озо
- •Возможные темы рефератов
- •Занятие 1. Организация работ в лаборатории
- •Правила выживания в лаборатории
- •1.2. Дополнительная литература
- •1.4. Вопросы для самоконтроля
- •1.5. Задание на дом
- •Занятие 2. Вода, ее свойства и методы измерений рН
- •2.1. Физико-химические свойства и роль воды в биосфере
- •2.2. Дополнительная литература
- •2.3. Экспериментальная часть
- •2.3.1. Приготовление ацетатных буферных растворов
- •2.3.3. Электрометрические измерения
- •2.4. Вопросы для самоконтроля
- •2.5. Задание на дом
- •Занятие 3. Типы, дозировка и способы анализа растворов
- •3.2. Дополнительная литература
- •3.3. Экспериментальная часть
- •3.3.3. Сравнительный качественный анализ аминокислот
- •3.4. Вопросы для самоконтроля
- •3.5. Задание на дом
- •Занятие 4. Методы спектроскопии в анализе биомолекул и клеток
- •4.2. Дополнительная литература
- •4.3. Экспериментальная часть
- •4.3.2. Определение концентрации гемоглобина (Hb) в крови
- •4.3.3. Определение количества эритроцитов в крови с помощью турбидиметрии
- •4.4. Вопросы для самоконтроля
- •4.5. Задание на дом
- •Занятие 6. Основные приемы препаративной биохимии
- •6.2. Дополнительная литература
- •6.3. Экспериментальная часть
- •6.3.2. Разделение гемоглобина и теней эритроцитов
- •6.3.3. Высаливание белковых фракций плазмы крови и их
- •6.4.Вопросы для самоконтроля
- •6.5. Задания на дом
- •Занятие 7. Методы количественного анализа белков
- •7.2. Дополнительная литература
- •7.3. Экспериментальная часть
- •7.3.1. Количественное исследование белковых фракций крови биуретовым методом
- •7.4. Вопросы для самоконтроля
- •7.5. Задание на дом
- •Занятие 8. Деление молекулярных смесей методами хроматографии
- •8.2. Дополнительная литература
- •8.3. Экспериментальная часть
- •8.3.1. Хроматография аминокислот и пептидов на бумаге
- •8.3.2. Гель-хроматография смеси на колонке Сефадекса g – 50
- •8.4. Вопросы для самоконтроля
- •8.5. Задание на дом
- •Занятие 9. Итоговое № 1. Статическая
- •9.2. Задание на дом
- •Занятие 10. Разделение биополимеров методами электрофореза
- •10.2. Дополнительная литература
- •10.4. Вопросы для самоконтроля
- •10.5. Задание на дом
- •Занятие 11. Количественный анализ и свойства ферментов
- •11.2. Дополнительная литература
- •11.3. Экспериментальная часть
- •11.3.1. Получение разведенного препарата амилазы слюны
- •11.3.2. Количественное определение активности амилазы слюны способом Вольгемута
- •11.3.3. Выявление специфичности амилазы
- •11.3.4. Зависимость активности амилазы от температуры
- •11.3.4. Зависимость активности амилазы от величины рН инкубационной смеси. 1. В соответствии с таблицей протокола опыта,
- •11.4. Вопросы для самоконтроля
- •11.5. Задание на дом
- •Занятие 12. Брожение как модель изучения процессов метаболизма
- •12.2. Дополнительная литература
- •12.3. Экспериментальная часть
- •12.3.2. Количественное определение ортофосфата
- •12.4. Вопросы для самоконтроля
- •12.5. Задание на дом
- •Занятие 13. Углеводы. Методы определения и диагностическая роль глюкозы
- •13.2. Дополнительная литература
- •13.3. Экспериментальная часть
- •13.3.1. Глюкозооксидазный метод определения глюкозы в био-жидкостях с помощью тест-наборов фирмы Lachema (Чехия)
- •12.3.2. Определение глюкозы в крови с помощью экспресс-анализатора Эксан-г (Литва)
- •12.3.3. Определение глюкозы в крови с помощью автономного экспресс-измерителя пкг-02-«Сателлит» (Россия)
- •13.4. Вопросы для самоконтроля
- •13.5. Задание на дом
- •Занятие 14. Основы химии и метаболизма липидов и биомембран
- •14.2. Дополнительная литература
- •14.3 Экспериментальная часть
- •14.3.2. Метод определения общего холестерола в биожидкостях, с помощью тест-набора реагентов «Новохол» (зао «Вектор-Бест»)
- •14.4. Вопросы для самоконтроля
- •14.5. Задание на дом
- •Занятие 16. Основы метаболизма азотистых соединений
- •Варианты азотистого баланса
- •Потребность животных в аминокислотах (По р. Марри и др., 1993, с изменениями)
- •16.2. Дополнительная литература
- •16.3 Экспериментальная часть
- •16.3.1. Определение количества мочевины в биожидкостях с помощью тест-набора фирмы Lachema (Чехия)
- •16.3.2. Определение концентрации креатинина в биожидкостях с помощью тест-набора фирмы Lahema (Чехия)
- •16.4. Вопросы для самоконтроля
- •17.2. Темы реферативных сообщений
- •17.3. Обсуждение рефератов
- •17.4. Задания на дом
- •16.5. Задания на дом
- •Занятие 17. Семинар по интеграции метаболизма
- •Занятие 18. Контрольные вопросы к итоговому № 2. Способы управления метаболизмом
- •Приложение
Приложение
Занятие 1. Лаборатория. Демонстрации:
1. Модели тетраэдра валентностей атома углерода.
2. Посуды общего назначения, специальной и мерной.
3. Руководств Г. Ф. Денисенко, 1985; Л. Н. Захарова, 1991 и справочников: И. В. Тикуновой и др, 1985; Досон Р. и др., 1991; К. Геккелер и Х. Экштайн, 1994.
Занятие 2. Вода и рН. Демонстрации:
1. Препаратов индикаторов рН и упаковок индикаторных бумаг
2. Руководства П. П. Астанина и др., 1933. с. 61 – фото лабораторной электрометрической установки для определения рН.
3. Руководства Я. Мусила и др., 1982; П. Хочачка и С. Сомеро, 1978; 1988; К. Шмидт-Нильсена, 1987; Эккерт и др. 1991.
Занятие 3. Растворы. Демонстрации:
1. Пластиковых микропробирок и многолуночных планшетов для поточного анализа.
2. Соли уранилацетата и препаратов аминокислот и белков.
3. Руководств А. В. Каракашова и Е. П. Вичева, 1968; Г. Хиллмана, 1975; Т. Манниатиса и др., 1984; Л.Ф. Максимовского и Н. И. Микичур, 1989.
Занятие 4. Фотометрия. Демонстрации:
1. Одноразовых пластиковых кювет для поточной фотометрии.
2. Модели обычного и поляризованного луча света, препарата кристаллического гемоглобина и модели эритроцита млекопитающих.
3. Фото кристаллов аминокислот и витаминов в поляризованном свете.
4. Атласа Т. В. Венкстерн и А. А. Баева, 1967; руководств по спектроскопии, 1978; 1987; Е. А. Черницкого, 1972; Э. А. Бурштейн, 1976 и Дж. Лакович, 1986.
Занятие 5. Семинар. Демонстрации:
1. Руководств Ф. Ю. Отто, 1867 и Б. Абдергальдена, 1934; монографий по анализу аминокислот и белков.
3. Агара и молекулярных моделей нуклеотидов, целлюлозы, полипептида, трехмерной молекулы Mb, субчастиц рибосомы.
Занятие 6. Препаративная биохимия. Демонстрации:
1. Справочника под ред. Г. И. Арановича и др., 1979 и руководств Д. Фрайфелдера, 1980; Л. А. Остермана, 1981; Н. Tиц и др., 1997; А. Я. Цыганенко и др., 2002; В. С. Камышникова, 2004.
2. Гомогенизаторов, ультрафильтров.
3. Препаратов витаминов, кофакторов и нуклеотидов.
Занятие 7. Белки. Демонстрации:
1. Рефрактометра.
2. Руководств Дж. Бэйли, 1965; Р. Скоупса, 1985; Г. В. Троицкого, 1991; В. Н. Орехович, 1965 и практикума под ред. С. Е. Северина и Г.А. Соловьевой, 1989. Дж. Дэвидсона, 1976; Д. Кларка и Л. Рассела. 2004.
Занятие 8. Хроматография. Демонстрации:
1. Компьютерных моделей ДНК и клетки.
2. Хроматографических бумаг, силуфола и колонок
3. Руководств Л. А. Остермана, 1985; О. Микеша, 1982; П. Дин, 1988; В. Н. Орехович, 1965. Справочник А. А. Лурье, 1978. Хроматография на бумаге, 1962.
Занятие 10. Электрофорез. Демонстрации:
1. Камер для электрофореза.
2. Учебника Ф. Штрауба, 1964 и руководств Г. Маурер, 1971; Л. А. Остермана, 1981, 1983; П. Ригетти, 1986
Занятие 11. Ферменты.
1. Состав раствора Люголя: 1 % раствор иода в 2 % растворе иодида калия.
2. Демонстрации: изданий Номенклатуры ферментов 1961 и 1979 гг. и руководств Г. А. Кочетова, 1980; Э. Э. Брухмана, 1981; М. Д. Машковского.
3. Препаратов ферментов, витаминов и кофакторов.
Занятие 12. Брожение. 1. Приготовление растворов для колориметрического определения фосфата методом Лоури-Лопеца:
1.1. Раствор серной кислоты 6 н: В коническую колбу на 200 мл с 90 мл дистиллята, осторожно, избегая перегрева и разбрызгиваний, внести порциями 18 мл концентрированной серной кислоты пробы Саваля. Хорошо перемешать, охладить под краном и хранить в склянке с пришлифованной пробкой.
1.2. Свежеприготовленный 1 % раствор молибдата аммония (NH4)Mo7O24 х 4Н2О в 6 н серной кислоте: в мерную колбу на 50 мл, через воронку внести навеску молибдата аммония и, растворив его в 6 н серной кислоте, довести до метки.
1.3. Свежеприготовленный 1% раствор аскорбиновой кислоты: в мерную колбу на 50 мл, через воронку внести навеску абсолютно белого кристаллического аскорбата и, растворив его 0,0005 н раствором сульфата меди (CuSO4 х 5H2O), довести объем до метки.
2. Демонстрации: руководств P. de Cruif, 1957; Г. Готтшалка, 1982; В.П. Скулачева, 1989; Дж. Бейли и Д. Оллиса, 1989; С.Д. Варфоломеева и К.Г. Гуревича, 1999; В.К. Плакунова, 2001;
Занятие 13. Глюкоза. 1. В тест-наборе фирмы Lachema (Чехия) – 5 флаконов:
1.1. 20 мл эталонного раствора глюкозы - 25 ммоль/л. Для приготовления 10 ммоль/л рабочего раствора, ежедневно смешивают 2 мл его с 3 мл дистиллята.
1.2. 15 мл смеси 0,02 моль/л уранилацетата в 0,82 моль/л хлорида натрия. Перед употреблением довести водой до 80 мл. Раствор устойчив но, как все тяжелые металлы, токсичен!
1.3. Инкубационная смесь готовится в мерной колбе на 500 мл, последовательным растворением в 100 мл дистиллята содержимого флаконов 3, 4 и 5. Довести водой до метки и перемешать. В темной склянке при + 5 С, раствор устойчив неделю. Состав смеси:
Глюкозооксидаза – 66,6 мккат/л
Пероксидаза – 6,7 мккат/л
4-хлор-3-метилфенол - 0,6 ммоль/л
4-аминофеназон – 0,7 ммоль/л
Трис-буфер рН 8.4 33 ммоль/л
2. Демонстрации: 2.1. Препаратов сахаров и тест-полосок для полуколичественного определения глюкозы в крови и моче.
2.2. Книги Ю. Г. Чиркова и руководств по методам химии углеводов.
Занятие 14. Липиды. 1. Растворы для качественной реакции Петтенкофера на желчные кислоты: 1.1. Сахароза - 20 %.
1.2. Серная кислота - концентрированная.
1.3. Препарат желчи, разведенный водой вдвое.
2. Демонстрации: 2.1. Упаковки и внешнего вида желчи.
2. 2. Руководств Е. А. Алимовой, 1967; Г. В. Новицкой, 1972; М. Кейтса, 1975; Л. Д Бергельсона и др. 1981; Г. Грегориадиса и А. Аллисона, 1983; Л. Б. Марголиса и Л. Д. Бергельсона, 1986; А. А. Болдырева и др., 1990.
Занятие 16. Азотистый обмен. 1. Растворы для определения концентрации креатинина в биожидкостях в тест-наборе фирмы Lachema (Чехия):
1.1. Стандарт креатинина - 177 мкмоль/л, с добавлением СА.
1.2. Рабочий депротеинизирующий раствор - 1,22 моль/л трихлоруксусной кислоты = 20 % ТХУ.
1.3. Раствор пикриновой кислоты - 0,04 моль/л;
1.4. Раствор 3,7 % гидроксида натрия - 0,75 моль/л. Внимание! Во избежание сорбции СО2 из атмосферы, держать флакон плотно закрытым!
2. Растворы для определения концентрации мочевины в тест-наборе фирмы Lachema (Чехия):
2.1. Стандартный (эталонный) раствор мочевины – 16,65 ммоль/л;
2.2. Рабочий раствор диацетилмонооксимного реактива. Ежедневно, перед определением смешивают равные объемы реактивов 2 и 1. В его составе: 1) диацетилмонооксид (5,0 ммоль/л); 2) тиосемикарбазид (0,9 ммоль/л); 3) серная кислота (0,9 моль/л); 4) соль железа трехвалентного (25,0 мкмоль/л). Годен при комнатной температуре 3-4 недели. Осадок определению не мешает. Внимание!!! Тиосемикарбазид токсичен. При его попадании на кожу или в глаза - обильно промыть пораженное место водой. При попадании внутрь - сразу выпить не менее 0,5 л воды и вызвать рвоту. После оказания первой помощи, обязательна консультация у врача!
Занятие 17. Интеграция метаболизма. Демонстрация руководств Я. М. Кабака, 1968; М. П. Сурикова и И. Л. Голенда, 1970; Э. Ньюсхолма и К. Старта, 1977; Г. Селье, 1979; 1987; В. Б. Розена, 1984; В. В. Потемкина; Дж. Теппермен и Х. Теппермен, 1989.
Редактор
Подписано к печати Формат 60 * 84 1/16. Печать офсетная.
Бумага офсетная. Печ. л. _____ Тираж ____ экз. Заказ №
ГОУ ВПО «Кемеровский государственный университет».
650043, Кемерово, ул. Красная, 6.
Отпечатано в типографии издательства «Кузбассвузиздат».
650043, Кемерово, ул. Ермака, 7.
