135. Этиологическая диагностика гриппа: материал для исследования, методы, оценка результатов. Дифференциация вирусов гриппа с вирусами парагриппа.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования – носоглоточный смыв (в первые 3-5 дней), в поздние сроки – сыворотка больного, в летальных случаях – кусочки легочной ткани или мозга.

Экспресс-метод: используют РИФ для обнаружения вируса или его АГ в материале. Для постановки РИФ готовят мазки-отпечатки, прикасаясь узким стеклом к нижним раковинам носовых ходов. За счет дегенерации клеток они остаются на стекле (пластами). На мазки наносят типоспецифические противогриппозные люминесцирующие сыворотки. В люминесцентном микроскопе в цитоплазме клеток выявляют свечение.

Вирусологический метод. Для выделения вируса заражают 10-12-дневные куриные эмбрионы в аллантоисную полость смывом с носоглотки, обработанным антибиотиком. С целью выявления вируса ставят реакцию гемагглютинации (РГА), если она положительна, то для идентификации ставят реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) с антисыворотками против типа А (Н₃ N₂), (Н₂ N₂) и др. Род вируса определяют в РСК.

Для выделения вируса гриппа используют также перевиваемые тканевые культуры МД СК, Hela, Hep 2, первичную культуру клеток почек эмбриона человека, фибробласты легкого эмбриона человека.

Серологический метод – ретроспективный, его используют для выявления АТ с помощью РТГА, РСК, ИФА, реакции преципитации в геле, реакции нейтрализации. Исследуют парные сыворотки больного с интервалом в 8-12 дней. Увеличение титра АТ во 2-й сыворотке в 4 и более раз расценивают как признак острой вирусной инфекции.

Этот метод используют для оценки коллективного иммунитета: если титры антител низкие, то прогнозируют возможную эпидемию.

136. Парамиксовирусы: классификация, характеристика, роль в патологии. Профилактика эпидемического паротита. Коронавирусы: классификация, характеристика. Тяжёлый острый респираторный синдром (sars).

Семейство парамиксовирусов (Рaramyxoviridae)

I. Подсемейство: Paramyxovirinae

Роды: 1. Respirovirus (вирусы парагриппа)

2. Rubulavirus (вирус эпидемического паротита)

3. Morbillivirus (вирус кори)

II. Подсемейство: Pneumovirinae

Род: Pneumovirus (РС-вирус)

Структура и свойства.

- линейная, несегментированная (-) РНК, связанной с NP-белком.

- средний размер вириона 150-200 нм.

- суперкапсид содержит 2 гликопротеида: HN (обладает гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью), F (ответственный за слияние, проявляет гемолитическую и цитотоксическую активности) и белок слияния М (формирует внутренний слой вирусной оболочки).

- репликация вируса происходит в цитоплазме клеток хозяина, в результате чего образуются многоядерные клетки-симпласты.

Рецепторы:

	H	N	F	G
Вирус парагриппа	+	+	+	-
Вирус эпидпаротита	+	+	+	-
Вирус кори	+	-	+	-
РС-вирус	-	-	+	+
Вирус гриппа	+	+	-	-

Сравнение

Грипп	Парагрипп
8 РНК	1 РНК
80-120 нм	150-200 нм
Η, N	F-белок, H, N.
Инкуб.период менее 24 ч.	Инкуб.период 3-6 сут.
ВДП	Особенная тропность к гортани
Почкование или лизис	ЦПД – симпласты.
Размножение в ядре	Размножение в цитоплазме
Куриный эмбрион +	Куриный эмбрион -
Культуры клеток +	Культуры клеток – плохо
Изменчивость +++	Изменчивость +

Вирусы парагриппа человека

Антигенная структура. На основании различий антигенной структуры HN, F и NP-белков выделяют четыре основных серотипа вирусов парагриппа человека (ВПГЧ).

Типы 1,2 и 3 АГ родственны и перекрестно реагируют с АТ к вирусу эпидемического паротита. Вирусы 4 типа не имеют выраженного АГ родства. Представители всех серотипов проявляют нейраминидазную и гемагглютинирующую активность.

У большей части взрослого населения обнаруживают сывороточные нейтрализующие АТ для всех типов ВПГЧ, у некоторых – секреторные IgA в концентрациях, предотвращающих первичную инфекцию.

Эпидемиология. Основной путь передачи ВПГЧ – воздушно-капельный, доминирующий возбудитель – ВПГЧ–3.

Патогенез. Возбудитель репродуцируется в клетках эпителия ВДП, проникает в кровь и вызывает вирусемию.

Клинические проявления. Инкубационный период составляет 3-6 суток. Больные выделяют вирус в течении 3-10 суток. Для заболевания характерно воспаление слизистой оболочки ВДП. Вирусы парагриппа обладают тропизмом к эпителию гортани, поэтому ведущим признаком в клинической картине является отек голосовых связок, охриплость голоса, может возникнуть стенозирующий ларинготрахеит.

Ларинготрахеобронхит чаще вызывают вирусы 1 и 2 типов; бронхиолит и пневмонии у детей в возрасте до года – вирус 3 типа. В клинической картине болезни преобладают упорный сухой кашель, насморк, заложенность носа, изменение тембра голоса, лихоадка. Вирусы могут персистировать и вызывать хронические медленные инфекции – подострый склерозирующий панэнцефалит – поражение оболочек головного мозга.

Иммунитет – типоспецифический, малонапряженный, за счет секреторных IgA. Через 3-4 недели развивается ГЗТ. Несмотря на наличие нейтрализующих АТ возможна реинфекция одним и тем же типом вируса.

Лабораторная диагностика. Выявляют АГ вируса в мазках из слизи в клетках носовых ходов методами ИФА и прямой РИФ.

Вирусологический метод. Смыв с носоглотки вносят в культуру клеток, индикацию проводят по ЦПД (симпласты), РГА, реакции гемадсорбции. Для идентификации вирусов применяют РТГА.

Серологический диагноз – ставят РН, РИФ, ИФА, РТГА, РСК (исследуют парные сыворотки).

Профилактика – неспецифическая, изоляция заболевших. Лечение симптоматическое.

Вирус паротита.

Эпидемиология. Основной путь передачи – воздушно-капельный, заболевания регистрируют в течение всего года, чаще в осенне-зимние месяцы, через каждые 2-3 года отмечают вспышки инфекции. Чаще болеют невакцинированные дети от 3 до 15 лет, мальчики. Источник инфекции – больной человек.

Паротит - вирусная инфекция характеризуется преимущественным поражением околоушных слюнных желез («свинка») у невакцинированных детей; может вызывать эпидемические вспышки.

Патогенез. Возбудитель репродуцируется в эпителии носоглотки, затем попадает в кровь и в период вирусемии заносится в различные органы – околоушные слюнные железы, яички или яичники, поджелудочную, щитовидную железы, головной мозг.

Клинические проявления. Инкубационный период – 2-3 нед., типичная форма проявляется как одно- и двухсторонний паротит – воспаление и увеличение околоушных желез, сопровождается лихорадкой. Вирусемия приводит к диссеминации вируса и возникновению серозного менингита, орхита (у 30% мальчиков в пубертатном периоде), панкреатита, гепатита, поражению слюнных желез с отеком и припухлостью.

Иммунитет после перенесенного заболевания стойкий, пожизненный. Дети до 6 месяцев не болеют (естественный пассивный иммунитет), позже поствакцинный.

Лабораторная диагностика.

Материал – слюна, отделяемое носоглотки, моча (вирус можно выделить из мочи через 10 суток после начала заболевания), ликвор.

Вирусологический метод. Вирус выделяют в культуре клеток и на куриных эмбрионах. Идентификацию проводят с помощью РИФ, РН, реакции торможения гемадсорбции, РТГА, РСК, ИФА.

Серологический диагноз – исследуют парные сыворотки в РТГА, РСК, ИФА. Положительную реакцию отмечают при 4-х кратном увеличении титра АТ.

Специфическая профилактика проводится живой комбинированной вакциной тримовакс против кори, эпидемического паротита и краснухи. В 12 месяцев и в 6 лет.

Семейство коронавирусов (Coronaviridae).

Коронавирусы объединяют в семейство Coronaviridae, в которое входит единственный одноименный род Coronavirus. Если снять «корону» - непатогенны. Вызывают заболевания у человека, животных и птиц.

Вирусы поражают ВДП (до 30% от всех вирусных поражений) и ЖКТ, приводя к развитию респираторных заболеваний и гастроэнтеритов.

Структура и свойства.

- до 220 нм.

- липопротеиновый суперкапсид.

- между нуклеокапсидом и наружной липопротеиновой оболочкой находится промежуточный белковый слой (матрикс).

- имеет наружные гликопротеиновые шипы, которые в электронном микроскопе напоминают солнечную корону вокруг округлого центра вирусной частицы.

- (+) РНК, обладает инфекциозностью.

- проявляют гемагглютинирующую активность.

Возбудитель тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС-ассоциированный коронавирус).

Болезнь получила название тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС, англ. аббревиатура SARS – severe acute respiratory syndrome).

Патогенез. Вирус поступает в клетки эпителия ВДП в результате взаимодействия S-белка с рецепторами клеток. S-белок представляет собой гликопротеин, ответственный за адсорбцию и слияние вирусной частицы с пораженными клетками. После депротеинизации происходит репликация РНК вируса. Предполагается, что она осуществляется через синтез промежуточной (–) цепи РНК, которая является матрицей для синтеза информационной (+) цепи РНК (прерывистая транскрипция). После сборки вирусных частиц происходит выход вируса из клетки путем почкования с участием белков M, E, N.

Клетки эпителия ВДП могут поражаться как из-за ЦПД вируса, так и вследствие развития иммунной реакции на вирусные белки в мембране клеток.

Характеристика заболевания. Источник инфекции – больной человек. Основной механизм передачи – воздушно-капельный. Не исключается передача по фекально-оральному и контактному механизмам. К группам риска относится работающий с больными медперсонал, члены семьи заболевших или другие лица, имевшие прямой контакт с выделениями больного. Инкубационный период – от 1 до 7-10 дней. Заболевание начинается остро, у больного появляется лихорадка, миалгии. Вирус поражает всю дыхательную систему, включая легкие. Вследствие гематогенной диссеминации вируса в процесс вовлекается ЖКТ, возникает диарея. На 2 неделе у части больных лихорадка появляется вновь, возникают новые очаги поражений в легких, прогрессирует дыхательная недостаточность, усиливается диарея. Так как к этому времени уровень репликации вируса снижается, предполагается, что ухудшение связано с иммунопатологическими процессами, обусловленными вирусом. У 20% больных на 2-3 неделе развивается респираторный дистресс-синдром вследствие повреждения гемато-альвеолярного барьера с развитием отека легкого.

Иммунитет. У больных появляется выраженный противовирусный иммунитет, преимущественно гуморальный.

Лабораторная диагностика заболевания. Используются следующие основные методы диагностики – ПЦР и серологический метод.

1. Для ПЦР материалом для исследования является носоглоточное отделяемое, фекалии, реже моча. Диагноз ТОРС считается установленным, если по результатам ПЦР соблюдается одно из условий:

1) «+» 2 пробы из разных материалов, взятых от пациента;

2) «+» 2 пробы одного материала, полученные от больного с интервалом в 2 дня,

3) повторный ПЦР-анализ материала также положителен.

2. При серологическом методе исследования материалом является сыворотка больного, содержащая АТ к ТОРС-вирусу. Используется твердофазный ИФА. У здоровых лиц АТ к вирусу не обнаруживаются. У больных реакцию необходимо ставить с парными сыворотками (наблюдается появление противовирусных АТ и увеличение их титра в 4 раза и более).

Профилактика и лечение. В настоящее время меры профилактики остаются неспецифическими. Для лечения применяют противовирусный препарат рибавирин, для подавления иммунопатологических реакций используют глюкокортикостероиды.

137. Вирус кори: классификация, характеристика. Корь: патогенез, иммунитет, профилактика. Подострый склерозирующий панэнцефалит. Рубивирусы: классификация, характеристика. Краснуха: патогенез, этиологическая диагностика, профилактика. Синдром врождённой краснухи.

Род Morbillivirus включает вирусы кори, подострого склерозируещего панэнцефалита, чумы крупного рогатого скота и собак.

Структура и свойства.

- (-)РНК;

- размеры 120-250 нм;

- не имеет фермента нейраминидазы;

- на поверхности суперкапсида гемагглютинин расположен гнездно и не в каждой ворсинке;

- гемагглютинация происходит только с эритроцитами обезьян;

- при размножении в культуре ткани образует многоядерные симпласты и синцитий, а также клетки с включениями в цитоплазме и ядре;

- вызывает гемадсорбцию и бляшкообразование.

Резистентность. В окружающей среде вирус быстро погибает под действием прямого солнечного света, УФИ, поэтому дезинфекцию при кори не проводят.

Антигенная структура вируса. Основные АГ вируса – гемагглютинин (Н), пептид F (представлен мажорным и минорным белками) и нуклеокапсидный белок (NP).

Эпидемиология: корью болеет только человек. Восприимчивость к кори невакцинированных детей – 100%. Заболевание возникает в виде эпидемий, чаще в детских невакцинированных коллективах. Больной человек заразен в конце инкубационного периода и в первые дни высыпаний. Механизм передачи – воздушно-капельный.

Патогенез. Первоначально вирус размножается в эпителии ВДП и регионарных л.у., затем проникает в кровоток. Вирусемия носит кратковременный характер и развивается на 3-5 сутки инкубационного периода. Возбудитель гематогенно разносится по всему организму, фиксируется в РЭС.

Разрушение инфицированных клеток приводит к высвобождению вируса и развитию второй волны вирусемии. Тропность возбудителя к эпителиальным клеткам приводит к вторичному инфицированию конъюнктивы, слизистых оболочек дыхательных путей и полости рта. Циркуляция вируса в крови и иммунные реакции обусловливают повреждение стенок сосудов, отек тканей, некротические изменения в органах.

Клинические проявления. Инкубационный период составляет 9-11 суток, в течение которых вирус размножается в эпителии дыхательных путей и ассоциированных лимфоидных тканях. Затем наступает вирусемия, которую сопровождают продромальные симптомы, протекающие по типу ОРЗ: острое начало, температура 39^оС, головные боли; наблюдается конъюнктивит с выраженной светобоязнью, вплоть до блефароспазма. Через 5 дней, за 24-36 ч до появления сыпи, во рту на слизистой оболочке щек в области 5 зуба появляются пятна Филатова-Коплика (инфильтраты воспаления). Папулезная сыпь появляется за ушами, на лице, туловище, конечностях (сверху вниз). Появление сыпи – это васкулит – проявление действия иммунных комплексов на сосудистую стенку. Возбудитель кори вызывает слияние клеток, что обусловлено экспрессией F белка на их мембранах, образуется синцитий.

Осложнения коревой инфекции: вирусные бронхопневмонии и воспаление среднего уха, часто осложняющиеся бактериальной инфекцией; гигантоклеточная пневмония (возможна у больных с возникшими иммунодефицитами); энцефалиты.

Иммунитет после заболевания или вакцинации стойкий, пожизненный. Пассивный иммунитет сохраняется до 6 месяцев (антитела матери IgG).

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования – отделяемое из носоглотки, соскобы с кожи из участков сыпи, кровь, моча, в летальных случаях – мозговая ткань.

Экспресс диагностика основана на обнаружении специфического антигена методом РИФ, а также антител IgМ в ИФА.

Вирусологический метод. Для выделения вируса используют культуру клеток. Индикацию проводят по наличию симпластов и синцития, а также клеток с зернистыми включениями в ядре и цитоплазме. Идентификацию выделенного вируса проводят с помощью РИФ, РТГА, РН в культуре клеток.

Серологический диагноз. Ставят РН, РСК, РТГА с парными сыворотками.

Специфическая профилактика. Проводится живой аттенуированной вакциной тримовакс, в которой коревая вакцина представлена ослабленным штаммом Шварц. Вакцинацию проводят детям в 12 месяцев.

Для лечения больных и контактным лицам назначают противокоревой иммуноглобулин, который получают из плацентарной или абортной крови. Он содержит АТ против кори, а также против вирусов гриппа, гепатита, полиомиелита, коклюша. Назначают детям старше 3-х месяцев.

Подострый склерозирующий панэнцефалит (ПСПЭ):

• возникает после кори, т.к. вирус кори проникает в клетки ЦНС, где происходит абортивный цикл размножения вируса, не образуется М-белок, F-рецептор вызывает слияние клеток мозга и образование симпластов, которые приводят к губчатому поражению мозга.

• медленная инфекция - 100% летальность.

Вирус краснухи (Род Rubivirus)

Вирус имеет все характеристики тогавирусов: диаметр около 60 нм, сложный, геном +РНК, однонитевая, нефрагментированная, на поверхности суперкапсида имеются шипы двух разновидностей (Е1 – обладает ГА свойствами, Е2 – выполняет функцию рецептора), оба являются протективными антигенами.

Антигены: нуклеопротеин, связан с капсидом, выявляют в РСК; наружный антиген, связан с суперкапсидом, выявляют в реакции гемагглютинации.

Свойства. Вирус обладает гемагглютинирующей, гемолитической и нейраминидазной активностью.

Патогенез. Краснуха – высококонтагиозная инфекция, распространена повсеместно, чаще болеют невакцинированные дети 3-6 лет, но могут болеть и взрослые. Источник инфекции – больной человек и вирусоноситель. Входными воротами для возбудителя является слизистая оболочка ВДП. После заражения воздушно-капельным путем вирус попадает в лимфатические клетки шейных, затылочных, заушных лимфоузлов, в которых происходит первичная репродукция вируса. Далее вирус проникает в лимфу и кровь и разносится по организму. При заражении беременной может поражать плод.

Клиника. Продолжительность инкубационного периода составляют 11-22 дня. Характерные симптомы болезни: повышение температуры тела, мелкопятнистая несливающаяся сыпь розового цвета (ruber – красный) по всему телу, которая возникает на неизмененном фоне кожи; отмечается припухание заднешейных лимфатических узлов, могут быть боли в суставах, мышцах. Осложнения – энцефалиты.

Возможно внутриутробное заражение от матери плода, так как вирус обладает эмбриотоксическим действием. Он адсорбируется на клетках эмбриональной ткани и вызывает пороки развития и гибель плода. Отмечаются: пороки сердца, поражение органа зрения, поражение органа слуха, поражение костей черепа. При инфицировании беременных женщин в первые три месяца беременности риск развития уродств достигает 80%. В дальнейшем снижается до 10-25%. Нередко возникают выкидыши, поэтому заболевание беременной краснухой в этот период может служить прямым показанием к прерыванию беременности.

Иммунитет: вируснейтрализующие АТ – IgM, через 2 – 3 месяца они исчезают. После исчезновения сыпи – IgG, пожизненный иммунитет.

Лабораторная диагностика

Материал – кровь, моча, слюна, испражнения, ликвор вносят в культуру клеток. Идентификацию проводят в РТГА, РСК, РН, ИФА.

Серологический диагноз: определение АТ-IgМ в ИФА, РИА, РТГА в парных сыворотках больного.

Специфическая профилактика. Для предупреждения заболевания разработана живая аттенуированная вакцина (из штаммов НР V77 или RA 27/3). Так как вакцинный штамм способен размножаться в организме, иммунизацию женщин детородного возраста следует проводить лишь при отсутствии беременности. При этом женцины должны избегать зачатия в течение 3 месяцев.

В РБ вакцинация осуществляется живой вакциной тримовакс, в которой содержатся аттенуированные штаммы вирусов кори, краснухи и эпидемического паротита. Детей вакцинируют в 12 месяцев.

Лечение: средства этиотропной терапии отсутствуют. Беременным, контактирующим с больным, профилактически вводят специальный иммуноглобулин, который неэффективен при инфицировании плода.

138. Экологическая группа арбовирусов: классификация, характеристика. Арбовирусные инфекции: особенности, патогенез. Клещевой энцефалит: патогенез, этиологическая диагностика, профилактика. Экологическая подгруппа робовирусов. Вирус геморрагической лихорадки с почечным синдромом. Аренавирусы: классификация, характеристика, роль в патологии.

Арбовирусы – экологическая группа вирусов, которые передаются восприимчивым позвоночным кровососущими членистоногими (клещи, комары, москиты). Около 100 вызывают заболевания человека. Из них в РБ – 14, в РФ – 50.

Классификация:

Семейство	Роды	Количество
Togaviridae	Alfavirus	31
Bunyaviridae	Bunyavirus	124
	Phlebovirus	34
	Nairovirus	21
	Uukuvirus	6
	Hantuvirus	6
Flaviviridae	Flavivirus	63
Filoviridae	-	2
Reoviridae	Orbivirus	2
	Coetivirus	1
Arenoviridae	Arenavirus	12
Rhabdoviridae	Lyssavirus	2
	Vesciculovirus	10

Заболевания: системные лихорадки (с относительно благоприятным течением), геморрагические лихорадки (тяжелое течение с летальным исходом), энцефалиты и энцефаломенингиты. Особенности: источник – животные, переносчик – кровососущие + трансовариальная передача, сезонность – жизненный цикл переносчика (весна-лето, осень), эндемичность.

Семейство Togaviridae

Для человека патогенны представители 2-х родов: альфавирус, рубивирус.

Структура и свойства.

- (+)РНК, линейная, однонитевая.

- капсид кубический.

- супекапсид объединяет 2-3 нуклеокапсида, содержит липиды, чувствительность к эфиру.

- гликолипиды Е1 и Е2

Культивирование. Хорошо размножаются в желточном мешке куриного эмбриона, культурах клеток, где вызывают ЦПД в виде частичной дегенерации монослоя, и в организме экспериментальных животных при внутримозговом способе заражения. У животных отмечается поражение ЦНС, развиваются параличи конечностей, заболевание заканчивается гибелью животных.

Репродукция. Адсорбция (Е2) – проникновение – дезинтеграция – трансляция (+)РНК на рибосомах – образование полипептида – его нарезка – сборка вирионов – выход из клетки почкованием.

Заболевания: альфавирусные лихорадки (Синдбис, леса Семлики, карельская геморрагическая, О'Ньонг-О'Ньонг, Чикунгунья) и лошадиные энцефаломиелиты.

Переносчик – комары.

Семейство Bunyaviridae

Структура и свойства. Имеют сферическую форму, с 3 нуклеокапсидами, находящимися в суперкапсиде, каждый из которых содержит 3 отдельных линейных сегмента (-)РНК (Z-, M- и S-сегменты). Белки: 1 связан с нуклеокапсидом и 2 гликопротеина (один из них гемагглютинин), связанные с суперкапсидом. В состав вирусов входит РНК-зависимая РНК-полимераза. Литический путь развития.

• Bunyavirus более 140 вирусов – передают комары, реже мокрецы и клещи. Энцефалиты: калифорнийский, Ла Кросс, Джеймстаун Каньон, Буньямвера и др., лихорадки – Тахиня, залива терпения, Сахалин, Мадрид и др.

• Phlebovirus около 60 – переносчики москиты. Лихорадка паппатачи, неопалитанская, сицилийская.

• Nairovirus около 35 – переносчики иксодовые клещи. Крымско-конголезская геморр.лихорадка.

• Hantavirus около 6 – вызывают геморрагическую лихорадку с почечным синдромом (ГЛПС) и хантавирусный легочной синдром

• Патогенез ГЛПС. Резервуар – крысы и мыши, переносчик не определен. Заболевание проявляется в виде лихорадки с геморрагическим синдромом, образуются кровоизлияния, развивается инфекционно-токсический шок, изменяется свертываемость крови. Течение: 40о температура, миалгия, интоксикация, склероз почек, ОРВИ+пневмония. Летальность 60%

Для иммунопрофилактики применяют инактивированую формалином вакцину.

Для лечения – специфический иммуноглобулин.

Семейство Flaviviridae

Флавивирусы включают 4 подгруппы родственных вирусов: клещевого энцефалита; японского энцефалита; лихорадки Денге; вирус желтой лихорадки, лихорадки Западного Нила, энцефалиты долины Муррея и Сент-Луис, омской геморрагической лихорадки, Повассан, Негиши, Кьясанурской лесной болезни. Эти заболевания протекают в форме тяжелых менингоэнцефалитов и лихорадки с геморрагическими высыпаниями.

Переносчики – клещи, комары.

Структура и свойства.

- сложный

- (+)РНК, линейная, однонитевая.

- сферический

- нуклеокапсид содержит один белок с группоспецифическими АГ свойствами.

- суперкапсид имеет шиповидные выросты, содержащие гликопротеин, который придает гемагглютинирующие свойства, обладает типовой специфичностью.

Репродукция. В макрофагах, гистиоцитах, регионарные л.у.

1) Вирус японского энцефалита.

• Передается комарами Culex; наблюдается летне-осенняя сезонность, характеризуется тяжелым течением с высокой летальностью - до 80%.

• Инкубационный период составляет 7 – 14 дней. Начинается остро с повышения температуры до 39 и выше, нарушается сознание с развития комы, развиваются судороги, параличи.

• Специфическая профилактика в очагах – инактивированная вакцина.

2) Вирус клещевого энцефалита.

• Вирус выделен русскими учеными под руководством Зильбера.

• На территории Беларуси циркулируют Neudorf-подобные штаммы, отмечено за период официальной регистрации более 2000 больных клещевым энцефалитом, наиболее высокая заболеваемость в Брестской области. Беловежская пуща.

• Виды: Восточный КЭ передают клещи из рода Ixodes persulcatus. Западный КЭ передают клещи из рода Ixodes ricinus.

• Заражение: В 80% трансмиссивным путем. В 20% - алиментарным – при употреблении сырого козьего или коровьего молока.

• Инкубационный период – от 1 до 30 дней (7 – 12 дней).

• Патогенез. Вирус поражает двигательные нейроны передних рогов шейного сегмента спинного мозга, мозжечка, мягкую оболочку головного мозга. До проникновения в мозг вирус репродуцируется в лимфоцитах, в клетках печени, селезенки, эндотелии сосудов (экстраневральное поражение).

• Клиника: начало острое: озноб, головная боль температура 39о, тошнота, боли в мышцах, менингиальные симптомы. Затем развивается упадок сил, психические расстройства, менингеальные симптомы, нарушение чувствительности и параличи обычно плечевого пояса, которые остаются на всю жизнь. Летальность составляет 25-30%.

• Формы: лихорадочная - составляет 30 – 50% (благоприятная), менингиальная в 40 – 60%; очаговая в 8 – 15% развиваются параличи с высокой летальностью и осложнениями.

• Лечение симптоматическое, в первые дни – специфический иммуноглобулин, вакцина – культуральная, убитая.

• Лабораторная диагностика. Материал – кровь, ликвор, носоглоточный смыв, моча – берут на 1-5 день от начала заболевания.

1. Выделение вируса на мышах. Обработанный материал вводят внутрь мозга белым мышам. Результат на 8-12 день. Внутрицеребральный пассаж проводят 2-3 раза (первых убивают и гомогенат мозга вводят вторым). Если после 3 пассажа животные живы, то результат отрицательный.

2. Выделение вируса на культуре клеток (фибробласты, СПЭВ, ВНК21). Не вызывают ЦПД, поэтому опять заражают мышей культуральной жидкостью в мозг.

3. Идентификация: РН на мышах, РТГА, РСК со стандартными сыворотками.

4. Серологическая диагностика. РСК со стандартными антигенами, РНГА, РТГА.

3) Вирус лихорадки Денге.

• Единственным резервуаром вируса является человек. Переносчик – комары Aedes aegypti – ареал их обитание – тропические и субтропические страны Африки, Азии, Америки, Австралии, Европы.

• Различают 4 серотипа вируса. Геморрагическая форма возникает при повторном заражении другим серотипом вируса в результате сенсибилизации организма – летальность 30 – 50%.

• Патогенез. Вирус проникает в кровь после укуса комара, размножается в регионарных л.у. и эндотелии капилляров. Вирусемия сопровождается лихорадкой, явление капилляротоксикоза (из-за нарушения сосудистой проницаемости), сильными болями в мышцах и суставах, что вынуждает больного изменить походку. Отсюда название (анг. dandy – франт). При повторном заражении возникает геморрагическая лихорадка, геморрагическая диарея, тошнота, рвота, геморрагическая сыпь на коже конечностей, ягодиц, спины. Летальность 5%.

• Специального лечения и профилактики нет.

4) Вирус желтой лихорадки.

• Конвенционная инфекция (40 – 90% летальности) – острое тяжелое инфекционное заболевание, для которого характерна интоксикация, 2-х волновая лихорадка, геморрагический синдром, поражение почек и печени с развитием желтухи.

• Возбудитель открыт Ридом.

• Варианты ЖЛ:

Желтая лихорадка джунглей (зоонозная) – основной резервуар обезьяны (могут быть другие животные: опоссумы, муравьеды, броненосцы). Заражение животных происходит через укусы комаров (род Aedes – в Африке), в Америке – Haemogogus) – возникают эпизоотии среди обезьян, которые или погибают или приобретают иммунитет.

Городская желтая лихорадка (антропонозная инфекция) – представляет главную опасность, так как основной источник инфекции – человек, переносчик - комар. Вирус циркулирует в организме человека, не попадая во внешнюю среду.

• Инкубационный период: 3 – 6 дней (до 10 – 12 дней).

• Патогенез. Вирус размножается в л.у., затем выходит в кровь - вирусемия (до 5 дней). Затем вирус проникает в клетки разных органов, поражает эндотелий капилляров, нарушается свертываемость крови, развивается геморрагический диатез, поражаются почки и печень. Заражение происходит через укусы самки комара Aedes aegypti. Трансовариально не передается.

• Лечение: симптоматическое.

• Профилактика: живая вакцина (получил в 1936 г. Тейлор). Вакцинируют детей с 1 года и взрослых в очагах и приезжающих. Вакцина создает иммунитет на 5 лет.

• Иммунитет: После перенесенного заболевания развивается прочный длительный иммунитет, обусловленный АТ и клетками памяти.

5) Вирус омской геморрагической лихорадки.

• Эндемическое заболевание, передается через укусы клещей, характеризуется весенне-летней и осенней сезонностью.

• Вирус выделен Чумаковым.

• Инкубационный период 2 – 5 – 7 – 10 дней.

• Клиника: начало острое: повышение температуры до 39 – 40о, головная боль, слабость – затем геморрагическая сыпь, кровотечения, бронхит, пневмония. Лихорадка длится до 5-15 суток, чаще заканчивается выздоровлением, но может быть и вторая волна заболевания.

• Иммунитет пожизненный.

• Лечение: активное – антивирусная вакцина из головного мозга мышей, пассивное – специфический Ig.

Семейство Arenaviridae

Морфология и свойства.

- от латинского arena – песок – внутри вирусных частиц обнаруживаются электронно-плотные зернистые структуры 2-14, как песок, по-видимому, рибосомы клетки.

- сложный

- овальные

- (-)РНК, однонитевая сегментированная (2 фрагмента).

- до 5 наружных и внутренних белков, один из которых является РНК–полимеразой (транскриптазой). Внутренний белок является группоспецифическим, а наружные – типоспецифическими антигенами.

- гликопротеин, который находится в шипах суперкапсида – гемагглютинин.

Заболевания:

Группа Старого Света: ЛХМ и лихорадка Ласса.

Группа Нового Света: остальные.

1. Тяжелые геморрагические лихорадки с высокой летальностью: лихорадка Ласса (1 группа опасности) - основной резервуар - крыса многососковая; вирус выделяется с мочой; путь передачи - контактный от человека, аэрогенный, алиментарный; лечение – сыворотка реконвалесцента, боливийская геморрагическая лихорадка Мачупо - резервуар вируса – мышевидный грызун – хомячок; вирус выделяется с мочой; путь передачи – алиментарный, аэрозольный, контактный; аргентинская геморрагическая лихорадка Хунин - резервуар и источник инфекции – грызуны рода Calomys; вирус выделяется с мочой; путь заражения тот же.

2. Гриппоподобные поражения и серозные менингиты: вирус ЛХМ встречается в РБ (лимфоцитарный хориоменингит) - резервуар ЛХМ – домовая мышь – вирус распространен повсеместно; путь передачи - аэрозольным и алиментарным; клинически протекает как гриппоподобное заболевание с лихорадкой, головной болью, миалгией, реже – серозный менингит.

Патогенез. Входными воротами служит ЖКТ или дыхательные пути; вирусы попадают в регионарные л.у., в которых размножаются и проникают в кровь, диссеминируют по кровотоку и вызывают поражения капилляров с нарушением проницаемости и обширными кровоизлияниями.

Лабораторная диагностика: выделение вируса и проведение серологических исследований. Возбудители очень контагиозны, с ними работают в специализированных режимных учреждениях. Матерьял: кровь, моча, плевральная жидкость, л.у., отделяемого глотки после заражения культур клеток или молодых мышей и хомячков. Для серодиагностики: РСК, РН, реакцию непрямой иммнофлюоресценции, ИФА.

Лечение симптоматическое.

139. Вирус бешенства: классификация, характеристика, специфические включения. Бешенство: патогенез, этиологическая диагностика, профилактика. Работы Л.Пастера. Филовирусы: классификация, характеристика, роль в патологии.

Вирус бешенства (Род Lyssavirus)

Структура и свойства.

- сложный.

- пулевидная форма.

- (–)РНК однонитевая нефрагментированная.

- суперкапсид состоит из 2-го липидного слоя, включающего внешние поверхностные гликопротеиновые структуры.

- поверхностный гликопротеин (G) и два негликозилированных белка (М₁ и М₂).

- нуклеокапсид дополняют многочисленные копии протеина сердцевины (NP) и несколько копий вирусной транскриптазы, репликативный цикл проходит в цитоплазме клеток.

Антигенная структура. Все варианты вируса имеют 1 антигенный тип. Внутренний нуклеопротеин обусловливает групповую специфичность, выявляется в РСК, реакции преципитации в геле, иммунофлюоресценции. Гликопротеин внешней оболочки придает типовую специфичность, выявляется в РН и РТГА.

Эпидемиология. Острая зоонозная инфекция ЦНС, возникающая после укусов бешеных животных, сопровождающаяся дегенерацией нейронов головного и спинного мозга. Без своевременно начатого после контакта с бешеным животным лечения летальность заболевания составляет 100%. Заболевание распространено повсеместно за исключением островных государств. Выделяют штаммы вирусов бешенства, циркулирующие в природе у животных (к нему чувствительны все теплокровные животные) – уличный вирус бешенства.

• дикое бешенство – основной резервуар – дикие животные;

• городское бешенство – больные собаки до 90% и кошки.

Культивирование. Размножаются в миоцитах, нейронах головного мозга. Вирус бешенства культивируют в мозговой ткани белых мышей, клетки почек сирийских хомяков, овец, в диплоидных клетках человека, куриных эмбрионах. У зараженных животных развиваются параличи конечностей, затем они погибают. В цитоплазме клеток обнаруживаются ацидофильные включения – тельца Бабеша-Негри. Они являются специфическими для данного заболевания.

Патогенез. Вирус проникает в организм человека через повреждения кожных покровов, чаще при укусах, при оцарапывании и ослюнении.

• первичное размножение вируса происходит в мышечной и соединительной тканях, где он персистирует в течение недель или месяцев.

• затем вирусные частицы достигают окончаний чувствительных периферических нервов и передвигаются по осевым цилиндрам и периневральным пространствам (до 3 мм в час).

• вирус размножается в нейронах гипокампа, продолговатого мозга, ЧМН, симпатических ганглиев, где возникают воспалительные, дистрофические и некротические изменения в ЦНС. В этот период вирус также размножается в клетках слюнных желез. Происходит демиелинизация белого вещества.

Клинические проявления.

Инкубационный период от 10 дней до 1 года. Наиболее короткий инкубационный период при укусе в голову, шею, верхний плечевой пояс.

Стадии бешенства:

- продромальный период: основные симптомы - раздражительность, бессонница, страх, тревога, неприятные ощущения в области укуса;

- период возбуждения - судороги дыхательной и глотательной мускулатуры, выраженная водобоязнь (гидрофобия), может быть агрессивность, слуховые и зрительные галлюцинации;

- период параличей - через 5 – 7 дней наступает смерть от паралича дыхания или сердечной деятельности.

Лабораторная диагностика

Матерьял: мозг укусившего животного, погибшего человека.

Вирусоскопический метод (постмортальный), основан на обнаружении специфических ацидофильных включений телец Бабеша-Негри. Готовят гистологические препараты и окрашивают по методу Манна, Туревичу, Муромцеву. По Муромцеву: цитоплазма голубая, тельца розовые, четкие с внутренней зернистостью, ядра фиолетовые. При типичной форме – клетки Аммонова рога, при паралитической – продолговатый, спинной. Однако отсутствие телец не исключает бешенство. Далее проводят РИФ, путем обработки срезов антирабической сывороткой, меченной флуоресцеином. При люминисцентной микроскопии нормальная мозговая ткань слабо-желтая, а АГ – зеленые гранулы.

Биологический метод проводят при отрицательных результатах вирусоскопии. Материал – эмульсию мозга, слюну вводят внутрицеребрально белым мышам или кроликам. С 4 дня забивают по 1 мыши в день, при вскрытии обнаруживают тельца Бабеша-Негри. Для идентификации вируса ставят РИФ на белых мышах.

Серологический метод диагностики используют только для определения уровня иммунитета у людей и животных после вакцинации, ставят РН. ИФА, РИА.

Профилактика

1. специфическая:

- активная (экстренная) иммунизация антирабической вакциной - в настоящее время используется культуральная инактивированная вакцина; В настоящее время применяется фиксированная культуральная вакцина, полученная в культуре клеток почек сирийского хомячка (на основе фикс-вируса бешенства) из штамма Внуково-32, инактивированная ультрафиолетовыми лучами. Она менее реактогенна. При вакцинации в организме синтезируются вируснейтрализующие антитела, которые обладают протективным действием до проникновения возбудителя в клетки ЦНС. Антирабическую вакцину вводят внутримышечно в дельтовидную мышцу сразу после укуса, на 3-й, 7-й, 30-й и 90-й день. Детям вводят вакцину в мышцу бедра.

- пассивная – введение антирабического иммуноглобулина (или лошадиной сыворотки) в область укуса, внутримышечно. В разные половины тела вакцину и иммуноглобулин.

2. неспецифическая:

- обработка раны этанолом.

- уничтожение бродячих животных, волков, вакцинация домашних и диких животных.

В 1885 г. Л. Пастер экспериментально обосновал способ аттенуации, он провел 133 пассажа дикого, уличного вируса бешенства через мозговую ткань кроликов и на 134 пассаже отметил изменение свойств исходного штамма – он утратил патогенность для собак и человека, инкубационный период сократился до 5 дней, не давал образование телец Бабеша-Негри, поэтому фикс-вирус использовали в качестве вакцины. Использовали различные мозговые вакцины из этого штамма, но они вызывали осложнения – поствакцинальные аллергические энцефалиты.

Свойства Фикс-вируса: очень патогенен для кролика, не вирулентен для человека, очень быстро движется к мозгу и «прибегает» быстрее обычного вируса, при этом «занимает место» и обычному вирусу негде размножаться.

Семейство филовирусов

Структура и свойства:

- прямые (вирус Эбола) или извитые (вирус Марбург) нити (2000-4000нм)

- первая группа опасности

- сложный: суперкапсид с шипами

- (-)РНК однонитчатая

- в составе вириона выявлено 7 структурных белков

- вирусы устойчивы к нагреванию (при 60° погибают через 30 мин., при 56° — через 1 час), чувствительны к действию липотропных веществ и к дезинфектантам

- хорошо репродуцируются в культуре клеток обезьян

Лихорадка Марбург.

В 1967 г. лихорадка Марбург впервые была зарегистрирована в Германии и Югославии среди работников вирусологических лабораторий. Болезнь эндемична для ЮАР, Кении, Зимбабве.

Путь передачи — прямой контакт.

Инкубационный период колеблется от 3 до 9 дней.

Начало болезни острое, развивается выраженная лихорадка с геморрагической сыпью, печеночной и почечной недостаточностью. Отмечаются, психические и неврологические нарушения.

Летальность достигает 30-50%.

Лихорадка Эбола.

Первая вспышка зарегистрирована в Заире (река Эбола). Заболело 300 человек – летальность 88%. Антитела к вирусам обнаружены у жителей разных стран Центральной Африки. Предполагают, что резервуар вируса – дикие грызуны или летучие мыши. Путь передачи – контактный (через кровь, мокроту и сперму), среди медработников –аэрозольный.

Инкубационный период 3 – 16 дней.

Начало острое: сильнейшая головная боль, лихорадка, тошнота, боли в груди, далее геморрагическая сыпь, понос с кровью, развиваются кровотечения.

Летальность до 90%.

Лечение – симптоматическое.

Профилактика – неспецифическая: применение средств индивидуальной защиты, предупреждение завоза инфекции с обезьянами и др. животными в неэндемичные страны.

148. Онкогенные ДНК- и РНК-геномные вирусы. Вирусные и клеточные онкогены. Механизмы вирусного онкогенеза. Изменения клеток в процессе трансформации. Папилломавирусы: характеристика, роль в патологии человека. Профилактика папилломавирусных инфекций.

Критерии онкогенности вирусов:

• Способность вируса индуцировать развитие опухоли у лабораторных животных (in vivo).

• Способность вируса индуцировать трансформацию клеток in vitro.

• Способность одного и того же вируса вызывать опухоли in vivo и трансформацию клеток in vitro.

ДНК-содержащие вирусы:

1. Adenoviridae по онкогенности делятся на:

• высокоонкогенные (серотипы 12, 18, 31);

• слабоонкогенные (серотипы 3, 7, 8, 11);

• неонкогенные (серотипы 1, 2, 4, 5, 6).

2. Herpesviridae.

• ВПГ – II типа обнаруживают при раке шейки матки.

Вирус Эпштейна-Барр вызывает у африканцев лимфому Беркитта (опухоль верхней челюсти, В-лимфотропное действие), у мужчин китайской национальности – назокарциному.

• Вирус герпеса VIII причастен к развитию саркомы Капоши.

3. Hepadnoviridae.

• Вирус гепатита В вызывает печеночно-клеточный рак у человека.

4. Papillomaviridae.

• Вирусы вызывают доброкачественные кожные опухоли (бородавки, папилломы) у человека. В злокачественных опухолях человека выявлено около 80 генотипов папилломавирусов. Около 10% злокачественных опухолей человека имеют папилломавирусную этиологию.

5. Poliomaviridae.

• Вызывают злокачественные опухоли у грызунов.

6. Poxviridae.

• Вирусы вызывают доброкачественные миксомы и фибромы у кроликов, зайцев, белок.

• У человека эти вирусы вызывают натуральную оспу и доброкачественную кожную опухоль – контагиозный моллюск.

РНК-содержащие вирусы:

7. Retroviridae. Роды:

1. Alpharetrovirus (простые) – вирус лейкоза птиц, саркомы Рауса;

2. Gammaretrovirus (простые) – вирус лейкоза мышей Молони, лейкоза кошек;

3. Betaretrovirus (простые) – вирус рака молочных желез мышей;

4. Deltaretrovirus (сложные) – вирус лейкоза крупного рогатого скота, вирус Т-клеточного лейкоза человека 1 и 2;

5. Epsilonretrovirus (простые) – вирус саркомы рыб;

Особенноти ретровирусов:

1. Являются возбудителями рака, лейкоза и саркомы у различных видов млекопитающих, птиц и человека.

2. Имеют уникальный фермент – обратную транскриптазу и обладают уникальным способом репликации, при котором ДНК-копия вируса интегрируется с ДНК клетки хозяина.

3. Вирусы передаются вертикально, подобно клеточным генам.

Характеристика генома онкогенных вирусов и вирусного канцерогенеза. В геноме онковируса имеются гены, отвечающие за онкогенность – V- onc или экзогенные гены (-ras, -src, -foc, -myc и др. онкогены). Сейчас известно более 30 вирусных онкогенов, но онкогены имеются в клетках организма человека. Известно более 50 онкогенов, локализованных в различных хромосомах – c-onc или эндогенные гены, которые кодируют синтез ряда важнейших белков, обладающих стимулирующим действием или супрессивным, угнетающим действием.

Канцерогенез – многоступенчатый процесс, связанный с активацией c-onc генов. Роль вирусов может заключаться в перемещении c-onc генов в активные места, и эти онкогены выходят из-под контроля клетки и начинают реализовать себя.

Онкоген - онкобелок - трансформация клетки - опухоль.

Отличие опухолевых клеток от нормальных клеток.

1. модификацией роста (высокая скорость размножения, низкая дифференциация, потеря контактной ингибиции, способность к инвазии, снижение потребности в факторах роста);

2. изменением клеточной поверхности (появление новых антигенов – Т-АГ, эмбриональных, могут появиться гетерофильные антигены);

3. изменением цитоскелета клетки;

4. изменением биохимических процессов (накопление ДНК, РНК, протеаз);

5. нестабильностью генома (наличием точечных мутаций, транслокацией, повреждением хромосом)

Судьба опухолевых клеток

1. Опухолевая клетка распознается клетками иммунной системы, если на ее поверхности сильные Т-антигены, и уничтожается.

2. Опухоль растет, приобретает свою автономность, может метастазировать, если снижена функция иммунной системы или слабые Т-антигены на поверхности опухолевой клетки.

Ускользание опухоли от иммунологического надзора

• Низкая иммуногенность опухолей, так как они происходят из нормальных тканей, к которым организм толерантен.

• Развитие толерантности вместо ИО.

• Развитие ГИО вместо КИО.

• Опухоль сама вырабатывает иммунодепрессивные факторы.

Эндогенные провирусы, протоонкогены.

1. Вирусные онкогены – персистируют в организме и могут индуцировать опухолевую трансформацию клетки подобно экзогенным вирусам;

2. Клеточные протоонкогены – это обычные клеточные гены (протоонкогены), выполняющие определенные функции. В связи с мутацией под влиянием физических факторов, химических веществ и биологических агентов (других генов и пр.) они приобретают автономность, независимость от клеточной регуляции и эту автономность индуцируют в клетке, которая становится независимой от тканевых регуляторных сигналов и начинает непрерывно пролиферировать, т.е. подвергается опухолевой трансформации. Известно более 20 протоонкогенов, которые могут превращаться в провирусы.