2.Тімолова проба.

Принцип методу. При взаємодії сироватки з тімолово-вероналовим розчином з'являється помутніння внаслідок утворення глобуліново-тімолово-ліпідного комплексу.

Хід визначення і розрахунок: До 6 мл тімолово-вероналового буферного розчину добавляють 0,1 мл сироватки, залишають відстоятись 30 хв. і потім вимірюють оптичну густину при довжині хвилі 630-690 нм (червоний фільтр) проти тімолово-вероналового буфера в кюветах з товщиною шару 1 см. Реакцію проводять при кімнатній температурі.

Розрахунок ведуть по калібровочному розчину сульфату барію, готують розведення відповідно одиницями помутніння по Шенк-Хогланд. Калібровочні розчини добре збовтують і негайно при довжині хвилі 630-690 нм в кюветах товщиною шару 2 мм проти води вимірюють.

Література:

1. Конспект лекцій.

2. Губський Ю. І. Біологічна хімія.- К.-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000.- 509с.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2001.- 736с.

4. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. – Біохімія людини, 2004.

Обговорено і затверджено на засіданні кафедри, протокол №1 від 30.08.2012р.

Зав. кафедрою проф. Ерстенюк А.М.

Заняття №14

Тема: Біохімія крові.

Актуальнiсть теми: Кров- спеціалізована рідка тканина, яка поєднує біохімічні поцеси різних частин тіла в цілісну систему та підтримує постійність її складу. Біохімічний аналіз крові широко застосовують для діагностики захворювань і контролю ефекивності лікування.

Навчальнi цiлi:

Знати: основні функції крові, фізико-хімічні властивості та хімічний склад крові в нормі та за умов патології; лікарські препарати, що отримують з крові

Вмiти: визначати вміст білка в сироватці крові та дати клініко-діагностичну оцінку отриманим результатам.

Самостiйна позааудиторна робота:

1.Охарактеризуйте характерні зміни біохімічних показників плазми крові

При атеросклерозі:

ЛПВЩ-

ЛПНЩ-

Загальні триацилгліцероли-

Коефіцієнт атерогенності-

При цукровому діабеті:

Глюкоза-

Кетонові тіла-

Гемоглобін глікозильований-

Молочна кислота-

2.Підготувати вихідні дані для оформлення протоколів лабораторної роботи.

Контрольнi питання:

1. Основні функції крові, фізико-хімічні властивості крові.

2. Білковий склад плазми крові. Гіпер-, гіпо-, парапротеїнемії.

3. Ферменти сироватки крові.

4. Небілкові азотисті та безазотисті компоненти крові.

5. Неорганічні компоненти плазми крові.

6. Згортання крові. Фармпрепарати- антикоагулянти і тромболітики. Кров як джерело лікарських препаратів.

7. Особливості будови і метаболізму еритроцитів.

8. Особливості будови і метаболізму лейкоцитів.

Самостiйна аудиторна робота:

1. Дати характеристику еритроцитів і лейкоцитів за схемою:

   Клітини крові	Особливості будови	Метаболічні шляхи	функції

2. Виконати лабораторну роботу, оформити і захистити протокол.

Визначення вмісту білка біуретовим методом

Принцип методу. Вимірювання інтенсивності забарвлення, яке утворюється при взаємодії пептидних зв’язків білка з сульфатом міді в лужному середовищі. Інтенсивність забарвлення прямо пропорцйна концентрації білка і визначається за допомогою фотоелектроколориметра.

Хід роботи. В першу пробірку наливають 0,1 мл сироватки крові, в другу -0,1 мл стандартного розчину білка, в третю – 0,1 мл 0,9% розчину хлориду натрію(контроль). У всі пробірки наливають по 5 мл біуретового реактиву, перемішують і через 30 хвилин визначають екстинцію за допомогою ФЕКа в кюветах 10 мм при червоному світлофільтрі проти контрольного розчину.

Розрахунок проводять за формулою:

Х=_А*В_ , де

С

Х – вміст білка в досліджуваній пробі, г/л

А – екстинція сироватки крові

В – концентрація білка в стандартному розчині, г/л

С – екстинція стандартного розчину білка