Методичні вказівки:

РОБОТА № 1. Прямий рахунок дріжджів під мікроскопом.

Готують 0,1%-ну суспензію пресованих дріжджів . Беруть 0,1 г дріжджів, розтирають її в ступі з 2 мл стерильної водопровідної води, одержану кашицю заливають в Кобу ємністю 100 мл. Колбу доливають водою до позначки. Суспензію струшують до гомогенізації і наносять на сітку. Камеру розташовують на предметному столі мікроскопу. Підрахунок проводять з об’єктивом 8^х через 3-5 хвилин з моменту приготування препарату. Підраховують кількість клітин в 10 великих або 20 малих квадратах сітки. Враховують всі клітини, які розташовані в квадратику сітки і перетинають верхній і правий бік квадрата. Визначають середнє число клітин в квадраті та кількість клітин в 1 мл суспензії по формулі:

Х = m*v

B

Х – число дріжджових клітин в 1 г дріжджів;

M – кількість клітин в 1 мл суспензії;

V – об”єм мірної колби, мл;

В – навіска дріжджів;

Н – кількість мікробних клітин в 1 мл суспензії дорівнює 6*10⁸, тді число клітин в 1 г дріжджів :

Х = 6*10⁸ . 100 = 6*10¹¹

0,1

По закінченню роботи камеру промивають водою та протирають серветкою.

РОБОТА № 2. Посів середніх проб м^’яса (сировини), вареної ковбаси в оболонці на МПА в чашках Петрі для визначення мікробного числа за методом Коха.

Спосіб приготування гомогенату: стерильну навіску середньої проби 10 г вносять в стерильний стакан гомогенізатора, додають до неї 90 мл 0,1%-ної за буферної пептонної води і гомогенізують при 8000 обертів на протязі 2-3 хвилин. Гомогенат містить 1 г продукту в 10 мл пептонної води. Студенти відбирають піпеткою наважку гомогенату в кількості 1 мл.

Приготування розчину гомогенату. В три стерильні пробірки вносять по 9 мл стерильної води. Пробірки пронумеровують. Відбирають стерильною піпеткою 1 мл наважки гемогенату продукту і вносять в першу пробірку (розчинення 1:100), ретельно розмішують і 1 мл вносять в другу ( розчинення 1:1000), а потім вміст другої пробірки – в третю (розчинення 1:10000). Посів сировини (м’ясо), відбувається глибинний посів в МПА в чашках Петрі розчинення 1:1000 та 1:10000. Для посіву кожного розчинення беруть дві паралельні чашки. Надписують чашки: вказують вид продукту, ступінь розчинення, номер групи і номер робочого місця студента.

Посів гомогенату ковбаси. Для посіву необхідно взяти вихідний гомогенат (1:10) та розчинення 1:100 з першої пробірки.

Чашки з посівами кладуть в термостат при температурі 30^оС на 3 доби.

В протоколі дослідження записують послідовність аналізу і відповідні розрахунки.

Література:

3. Інструкція до проведення лабораторної роботи.

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 6

ТЕМА: Підрахунок колоній

МЕТА: Визначити ступінь обсіменіння бактеріями вивчає мого об’єкту і

оцінити його доброякісність.

ОБЛАДНАННЯ: термостат, чашки Петрі з живильним середовищем і вирослими колоніями, прилад ПСБ.

Хід роботи:

17. Підрахувати колонії, вирослі на живильному середовищі у чашках Петрі.

18. Визначити ступінь обсіменіння бактеріями вивчає мого об’єкту і оцінити його доброякісність за отриманими результатами.

19. Встановити, які бактерії (сарацини, бацили або палички без спор) у наявності у досліджуємому об’єкті.

Показник кількості мікроорганізмів, що вміщуються у 1 г або 1 мл продукту, може служити критерієм доброякісності товару в 1 г або 1 мл доброякісного продукту, що не підлежить термічній обробці, вміщується не більш 100 тис. (10⁵) сапрофітних мікроорганізмів. При вміщенні у 1 г або 1 мл харчового продукту більш 1 мл клітин сапрофітних бактерій знижується стійкість при зберіганні і виникає небезпека харчового отруєння.

Підрахунок вирослих колоній робиться за допомогою приладу для рахунку

колоній бактерій ПСБ.

Прилад складається з корпусу, диску зі світофільтрами, електропера, лупи імпульсного лічильника і лампи.

Прилад заземлити. Увімкнути тумблер лампи освітлення. Чашку Петрі встановити на скло з сіткою вверх дном. Підібрати світофільтр необхідного кольору. Увімкнути тумблер імпульсного лічильника, при кожному натисканні показники імпульсного лічильника повинні збільшуватись на одиницю.

Відрахунок кількості бактерій колоній робиться рахуванням різності показників імпульсного лічильника до початку відрахунку і після його закінчення.

По закінченні роботи необхідно вимкнути обидва тумблери і від’єднати апарат від електромережі. Якщо колоній багато, їх підраховують у 10 квадратах, що розташовані у різних листах чашки, виводять середню кількість на один квадрат.

S пл.. чашки = Пі² = 3,14 * 5² = 78,5 см², то

N = S * a = 78.5*a (кількість колоній у квадраті)

Кількість

колоній

у чашці

Помножив це число на знаменник розчинення, отримують кількість мікробів у 1 г і 1 мл продукту.

ВИСНОВКИ.