- •1. Определение термина «иммобилизация». Основные требования к носителям и приемам иммобилизации при одно- и многостадийных реакциях.
- •2. Классификация носителей, используемых при иммобилизации. Свойства полисахаридных носителей.
- •Полисахариды.
- •3. Основные требования к материалам-носителям. Выбор носителей при использовании иммоббилизованных препаратов в технологических исследованиях.
- •4. Синтетические полимерные материалы и неорганические носители.
- •5. Характеристика методов физической иммобилизации
- •6. Классификация методов иммобилизации. Иммобилизация на поверхности носителя и силы, определяющие связывание препарата на поверхности носителя
- •7. Иммобилизация в массе носителя.
- •8. Иммобилизация с использованием мембранной технологии и двухфазных реакционных сред.
- •9. Микрокапсулирование
- •10.Иммобилизация металлохелатным способом
- •11 Иммобилизация ферментов
- •13) Влияние иммобилизации на состояние фермента, возможные причины изменения его активности
- •14) Критерии оценки протекания ферментативного процесса при иммобилизации
- •15. Эффекты распределения реагентов в катализе иммобилизованными ферментами
- •16. Основные показатели стабильности иммобил-ных ферментов, причины, вызывающие изменения стабильности и способы устранения.
- •17. Термостабильность иммобилизованных ферментов и способы ее определения.
- •18. Способы сохранения каталитической активности ферментов при иммобилизации.
- •19. Использование иммобилизованных ферментов в производстве.
- •20. Ферментные электроды: конструирование, стадии функционирования и критерии, определяющие их качество.
- •21.Общая характеристика микробных катализаторов, требования к производственному штамму, преимущества и недостатки иммобилизованных клеток по сравнению со «свободными».
- •22.Преимущества иммобилизованных клеток по сравнению с иммобилизованными ферментами.
- •23. Классификация иммобилизованных микробных биокатализаторов по принципу действия.
- •24. Приемы выбора способа иммобилизации клеток микроорганизмов для промышленных целей.
- •25. Оценка физиологической и метаболической активностей клеток в иммобилизованном состоянии
- •26 Схема биотехнологической переработки растительного сырья. Получение спиртов и кетонов.
- •27. Получение ак, алкеноксидов, витаминов, аб, пав
- •28. Получение органических кислот, углеводов, ферментов
- •29) Утилизация отходов.
- •30) Характеристика реакторов с иммобилизованными клетками.
- •31. Преимущества выращивания растительных клеток в культуре и использование вторичных метаболитов в фармакопии.
- •33. Методы определения жизнеспособности иммобилизированных растит-х клеток.
- •34. Способность иммобилизированных растит-х клеток к биосинтезу. Характеристика процессов биотрансформации (биоконверсия).
- •36. Физиолого-биохимические процессы у иммобилизованных растительных клеток и их отличия от суспендированных (свободных) клеток.
- •37. Приемы выделения и введения в культуру клеток животных.
- •38. Характеристика способов иммобилизации клеток животных и преимущества монослойных культур.
- •1. Культивирование в плоских флаконах (матрацах)
- •2. Культивирование во вращающихся бутылях (роллерных аппаратах)
- •3. Культивирование в колонках на микроносителях – наиболее оптимальная комбинация выращивания поверхностно зависимых клеток с помощью технологии суспензионных культур.
- •39. Основные параметры, критерии и их характеристика при биотестировании физиологической активности вещества с использованием клеток животных.
- •40. Описание приема биотестирования с использование монослойной культуры клеток животных.
- •41 Процедура проведения анализа содержания гормона с использованием иммоб. Клеток животных
- •Примеры применения иммобилизованных клеток в анализе
- •1. Определение термина «иммобилизация». Основные требования к носителям и приемам иммобилизации при одно- и многостадийных реакциях.
39. Основные параметры, критерии и их характеристика при биотестировании физиологической активности вещества с использованием клеток животных.
Тест-объект (клетка, ткань, организм) – это жизнеспособные биологические структуры разных уровней организации.
Тест-реакция характеризуется изменением какого-либо показателя под воздействием эффектора (стимулятора). Этот показатель получил название тест-параметра и является количественной характеристикой проявления тест-реакции.
При биотестировании физиологически активных веществ (ФАВ) необходимо учитывать следующие критерии:
1. Тест-реакция должна быть высокоспецифичной по отношению к исследуемому ФАВ.
2. Тест-объект должен обладать высокой чувствительностью.
3. Обеспечивать достигнутую точность определения ФАВ в необходимом интервале доз.
4. Обеспечивать высокую воспроизводимость результатов тестирования как для каждой клетки (монослоя), так и между препаратами клеток, полученными из различных исходных тканей.
Характеристика критериев.
Специфичность ответа. Уровень специфичности функционального объекта на действие функционального регулятора можно обеспечить, тщательно подбирая клетки-мишени, условия их инкубации и блокирование рецепторов сходными по структуре, но биологически неактивными молекулами.
Чувствительность ответа. Ее определяют, как наименьшее количество стимулятора, которое удается отличить от нулевой дозы при заданных условиях; его находят, построив для исследуемого гормона кривую доза – ответ.
Точность определения. Определяют по графикам зависимости точности измерения от дозы гормона.
Воспроизводимость результатов играет решающую роль при интерпретации результатов. Для хорошей воспроизводимости используют отдельные монослои клеток, полученные из одной и той же исходной ткани, в различных, но следующих одна за другой процедурой биотестирования.
40. Описание приема биотестирования с использование монослойной культуры клеток животных.
1. Получают монослои клеток, иммобилизованные на полистирольной подложке, для хранения после иммобилизации меняют среды каждые 3-4 суток.
2. Удаление питательной среды, затем каждый монослой промывают 37˚С солевым раствором Хэнкса, который затем удаляется.
3. На каждый монослой наносится тестируемый или контрольный стимулятор и культуры помещают в термостат. по истечении необходимого времени инкубации стимулятор удаляется с поверхности монослоев.
4. Монослой промывается солевым раствором Хэнкса, который вновь удаляется. В каждую лунку добавляют 0,3 мл 12%-ной хлорной кислоты для прекращения действия стимулятора, для лизиса клеток и для разделения белковых и небелковых компонентов.
5. Определяют содержание специфического продукта реакции, находящегося в растворимой или нерастворимой в кислоте форме с помощью подходящего для данного вещества метода количественного анализа.
6. По окончании инкубации с гормоном проводят экстракцию продуктов реакции из иммобилизованных клеток или инкубационной среды и оценивают ответ клеток на каждую дозу стимулятора, определяя количество продуктов реакции в каждом экстракте.
7. Полученные значения ответов клеток представляются в виде калибровочной кривой, обычно в виде кривой доза – ответ.
8. Для объективной оценки эффективности приема биотестирования необходимо использовать подходящие тщательно разработанные способы контроля за качеством их проведения.