Лабораторная работа 5 (2 часа)

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МИКРОМИЦЕТОВ

Цель работы – изучение морфологических особенностей грибов

Задача работы- изучить морфологические особенности низших и высших грибов

Обеспечивающие средства- микроскоп и осветитель, бактериологическая петля, препаровальные иглы, пинцет, предметные и покровные стекла, стерильные пипетки на 1—2 мл., кристаллизатор, капельница с водой, метиленовой синькой, вод­ным фуксином, генциан- виолетовым, иммерсион­ным маслом и бензином, х|б салфетка, фильтро­вальная бумага, дезинфицирующий раствор, чистые культуры грибов.

Задание:

1. Приготовить прижизненный препарат низшего плесневого гриба мукора (Мисог) и изучить:

а) строение мицелия (нечленистого);

б) строение органов бесполого размножения: спорангиеносца, спорангия, спорангиеспор; зарисовать и обозначить их на рисунке.

2. Приготовить прижизненный препарат высшего плесневого гриба Aspergillus и рассмотреть:

а) строение мицелия (членистого);

б) строение органов бесполого размножения: конидиеносцев, стеригм и конидий; зарисовать и обозначить их.

3. Приготовить препарат плесневого гриба Penicillilim, рассмотреть его, зарисовать и обозначить в такой же последовательности.

4. Приготовить мазок из культуры дрожжей, окрасить его простым методом, просмотреть под иммерсией и зарисовать.

Требования к отчету:

1. Описать строение мицелия низших и высших грибов.

2. Описать вегетативное, бесполое и половое размножение низших и высших грибов

Технология работы и методические указания

Плесневые грибы. Вегетативное тело грибов называется мицелием. По интенсивности фермен­тативной активности, по методике их исследова­ния (рассмотрение подробностей строения под, микроскопом, культивирование их на искусственных питательных средах и т. д.) они близки к другим микроорганизмам.

Мицелий плесневых грибов состоят из перепле­тенных нитей или гиф, способствующих закрепле­нию гриба на субстрате. В отличие от актиномицетов толщина клеток мицелия плесеней – 5-7 микрон, нередко 10 микрон. Гифы плесеней могут ветвиться. Размножаются плесневые грибы спо­рами или гифами. Определяют плесени по способности спороношения.

Спороношение лучше всего наблюдать в чашках Петри, рассматривая более тонкие части колоний при малом увеличении микроскопа в про­ходящем свете. Материал для микроскопического исследования берут осторожно иглой с поверхности в каплю воды на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом с большим увеличением сухой системы (лучше пользоваться молодой культурой). Естественное расположение спор в большинстве случаев при этом нарушается, но обыкновенно удается найти в препарате места, где можно рассмотреть строение- конидиеносцев, форму конидий. Размножаются грибы вегетативным, бесполым и половым путем. Вегетативное размножение осуществляется частями мицелия, образованием оидий, хламидоспор, бластоспор и почкованием.

Бесполое размножение у низших грибов происходит при помощи спор, образующихся внутри специальных плодовых тел, называемых спорангиями. Гифы мицелия, па которых расположены •спорангии с эндоспорами, называются спорангиеносцами. Большая часть плесеней дает несовершенные формы спороиошения -конидиальные споры. Конидии отчленяются от стигм, расположенных на концах плодоносящих гиф, называемых конидиеносцами.

Представителем плесеней с простейшим типом спорообразований являются Oidium lactis — молочная плесень, появляющаяся в виде барха­тистого пушка, обычно на поверхности таких молочных продуктов, как сметана, простокваша. Колонии имеют белый, слегка приподнимающийся мицелий .

У гриба Mucor очень пушистый, ветвистый одноклеточный мицелий, который обычно заполняет ею чашку Петри, переползая даже на крышку. При рассмотрении с большим увеличением мицелий представляется как одна гигантская ветвистая клетка, но с большим количеством ядер. Еще более характерно спороношение мукора, приподнимающиеся спорангиеносцы за-канчиваются наверху шаровидными образованиями - спорангиями, наполненными эндоспорами.

Плесени Aspergillus и Penicillum имеют ветвящийся многотоклеточный мицелий. У Aspergillus на приподнимающихся конидиеносцах образуются бесцветные вздутия, на которых вырастают стеригмы, на концах стеригм развиваются цепочками споры - конидии. У плесеней Penicilliurri конец неутолщенной веточки мицелия вилкообразно ветвится, на концах первичных или вторичных веточек образуются конидии. Все спороношение вследствие параллельного положения веточек имеет форму кисточек, а отсюда и название - «кистевик».

Дрожжи— дрожжевые клетке морфологиче­ски довольно разнообразны. Они бывают округлыми, овальными, удлиненными или лимоновидными. Клетки дрожжей значительно крупнее бактериальных. Диаметр, округлых форм колеблется в среднем от 4 до 12 микрон. Оболочка дрожжевых клеток в отличие от бактериальной легко различима в обычном световом микроскопе. Особенно четко видна оболочка при исследовании дрожжей. с помощью фазово-контрастного устройства. В цитоплазме хорошо видны вакуоли. При специальной окраске в цитоплазме обнаруживается дифференцированное ядро, митохондрии , гликоген, крахмал, капельки жира, волю-тип, основным компонентом которого являются полифосфаты. Клетки дрожжей грамположительны. На плотных питательных средах дрожжи растут в виде различных выпуклых, округлых или лопастных, гладких или складчатых, бесцветных, желтовато-оранжевых или ярко-розовых колоний мягкой консистенции. Форма и цвет колоний име­ют значение для диагностики дрожжей. Размножение дрожжей осуществляется¹ почкованием и делением .

Кроме того, у многих делящихся почкующихся дрожжей наблюдается половой процесс, связанный со спорообразованием. Дрожжи способные к половому процессу, называется истинными дрожжами и относятся к классу сумчатых грибов (аскомицеты). В каждой клетке или аске образуются от двух до восьми иногда до 12 спор.

Среди дрожжей есть виды, осуществляющие спиртовое брожение, виды, вызывающие заболевание растений, животных и человека.

Морфологию грибов лучше изучать в прижиз­ненных препаратах в раздавленной капле или микрокамере. Изготавливают препарат следующим способом.

На середину чистого предметного стекла наносят каплю дистиллированной воды или физиологического раствора. Стерильной бактериологиче­ской петлей ил иглой снимают воздушный мицелий гриба с поверхности пита­тельной среды, переносят захваченный мицелий на предметное стекло в каплю воды. Мицелий разрывают на отдельные куски, препарат накрывают покровным стеклом, помещают на столик микроскопа и просматривают вначале при малом, а затем при среднем увеличении микроскопа при. опущенном конденсоре. Для лучшей видимости строения мицелия в каплю под предметное стекло добавить небольшое количество краски (одну каплю фуксина).

Для изучения морфологии дрожжей каждый студент готовит мазок из культуры хлебных дрожжей, выращенных в 10% растворе сахара. Мазки фиксируют над пламенем, окрашивают 'фуксином или метиленовой синькой и просматривают под иммерсией. При изучении мазков обращают внимание на форму дрожжевьгх клеток, наличие в их протоплазме включении, отыскивают делящиеся клетки с почками.

Контрольные вопросы:

1. Назвать особенности морфологии грибов и их отличие от бактерий и актиномицетов.

2. Способы размножения грибов и дрожжей.

3. Назвать основные классы грибов и дрожжей.

Библиографический список

1. Аникеев, В. В. Руководство к практическим занятиям по микробиологии [Текст] / В. В.Аникеев, К.А. Лукомская. – М. : Просвещение, 1977. – 146 с.

2. Аристовская, Т. В. Большой практикум по мик­робиологии [Текст] / Т. В. Аристовская [и др.]. – М. : Высш. шк., 1962. – 491 с.

3. Методы экспериментальной микологии [Текст] / под общ. ред. В. И. Билай. – Киев : Наукова думка, 1990. – 156 с.

4. Литвинов, М.А. Определитель микроскопических почвенных грибов [Текст] / М. А. Литвинов. – Л.: Наука, 1967. – 303 с.