Хід роботи

1. Виявлення в ґрунті фосфоромінералізуючих бактерії можна проводити на агаризованому середовищі (за Р. А. Менкіною): амоній сірчанокислий - 0,5 г; натрій хлористий - 0,3 г; калій хлористий - 0,3 г; магній сірчанокислий - 0,3 г; залізо сірчанокисле - сліди; марганець сірчанокислий – сліди; глюкоза - 10,0 г; крейда - 5,0 г; вода дистильована - 1000 мл.

   Для ущільнення середовища вносять 1,5—2% агару, а як джерело органічного фосфору вносять лецитін або нуклеїнові кислоти з розрахунку 3—5 мг Р₂О₅ на 25 мл середовища (0,056 г лецитину або 0,025 г нуклеїнової кислоти). Лецитін попередньо розчиняють у 96%-му спирті. Середовище стерилізують в автоклаві при 0,5 атм. протягом 20—30 хв. Для пригнічення супутньої мікрофлори в середовище перед розливом в чашки рекомендують додавати 1%-ий розчин фенолу з розрахунку 50 мл/л.

2. Зробити 5—7 послідовних десятикратних розведень у пробірках.

3. У стерильні чашки Петрі внести по 1 мл суспензії з останніх розведень.

4. Залити суспензію охолодженим до 45°С агаром після його перемішування з 1%-ним розчином фенолу. Обертальними рухами перемішати агар із суспензією в чашці.

5. Чашки з застиглим агаром помістити в термостат при температурі 27— 35°С.

6. Через 6—7 діб провести розпізнавання бактерій, що мінералізують фосфорорганічні сполуки.

7. Мікроскопічно вивчити забарвлений мазок з типових колоній виділених бактерій.

Питання для самоперевірки

1. В яких формах знаходиться в грунті фосфор?

2. Які мікроорганізми беруть участь у розкладанні органічних сполук фосфору і неорганічних фосфатів у грунті ?

Лабораторна робота 10

Облік ризосферної і кореневої мікрофлори

методом послідовних відмивань за О.З.Теппер

Мета роботи: відпрацювати методику виявлення ризосферних мікроорганізмів методом послідовних відмивань коренів за О.З.Теппер.

Теоретична частина

Виростаючи на ґрунті, рослини вступають у тісний взаємозв’язок з мікрофлорою, що знаходиться в ньому. У ділянці ґрунту, що прилягає до коренів рослин, мікроорганізмів в декілька разів більше, ніж у ґрунті, що знаходиться на деякій відстані від коренів. Це відбувається завдяки тому, що корені як би оточені мікрофлорою. Ця зона ґрунту навколо коренів, яка збагачена мікроорганізмами, називається ризосферою. В свою чергу мікроорганізми ризосфери забезпечують мінералізацію органічних речовин і мобілізацію речовин гумусу безпосередньо в зоні поглинання поживних речовин кореневою системою рослин. Крім того, вони виділяють у цю зону велику кількість гетероауксинів, вітамінів, амінокислот, ферментів і інших факторів росту. Ці стимулятори росту підсилюють ферментативні процеси в рослинах, сприяють посиленню кореневого живлення і більш енергійному обміну речовин рослин.

До складу мікрофлори ризосфери в деяких видів трав'янистих і деревних рослин входять гриби. Вони утворюють навколо кореня чохол з гіф, який має назву мікориза. Мікориза приймає активну участь у забезпеченні рослин амінокислотами, мінеральними речовинами і водою. Гриби поглинають і утилізують продукти екзосмосу коренів, перетворюють речовини, що пригнічують розвиток рослин. Взаємозв'язок між ризосферними мікроорганізмами, мікоризою і рослинами буває настільки значним і специфічним, що без них рослини не можуть нормально розвиватися.

Встановлено, що мікрофлора коренів різко відрізняється від мікрофлори ґрунту як за кількісним, так і за якісним складом. Є також відмінності у видовому складі мікрофлори коренів різних сільськогосподарських рослин. Це обумовлено, очевидно, різним складом кореневих виділень рослин.

В даний час розрізняють: а) власне кореневу мікрофлору , що знаходиться на поверхні коренів – мікрофлору ризоплани ; б) прикореневу мікрофлору ґрунту, що примикає безпосередньо до коренів - мікрофлору ризосфери, тобто мікрофлору ґрунтових шарів, розташованих на відстані до 1 см від коренів.

Запропоновано багато методів виявлення і виділення ризосферних мікроорганізмів (методи Н. А. Красильникова, Е. Ф. Березової й ін.). Достовірні результати по виявленню ризосферних мікроорганізмів у лабораторних умовах дає метод послідовного відмивання коренів, запропонований Е. С. Теппер.

Обладнання і матеріали: корені рослин, 5 колб із 99 мл стерильної дистильованої води, 2 колби з 99 мл води і піском (10 г) на кожну бригаду, порцелянові ступки, ножиці, пінцети, піпетки градуйовані на 1 мл, чашки з МПА по 7 шт. на бригаду, шпатель, бактеріологічна петля, стекла, фарби, мікроскоп.