Материал для исследования иммунного статуса
Современная практика клинико-иммунологических исследований среди различных биологических жидкостей выделила основным объектом анализа кровь – ее клеточные компоненты и сыворотку. Для иммунологических исследований используют клетки врожденного и адаптивного иммунитета – лейкоциты, к которым относятся гранулоциты, моноциты и лимфоциты. Наибольший интерес с точки зрения иммунологов представляют лимфоциты – высокоспециализированные клетки адаптивной иммунной системы. Выделение мононуклеарной фракции крови, в том числе лимфоцитов, производят по методу Boyum (1968), основанному на различии плотности форменных элементов крови.
Для исследования сыворотки кровь берется обычно из локтевой вены, в пробирке она быстро свертывается и разделяется на сгусток с попавшими клетками крови и прозрачную сыворотку крови, которую можно использовать для определения растворимых компонентов врожденного и адаптивного иммунитета.
При необходимости получения клеточных компонентов крови для иммунологических исследований в пробирку для забора крови предварительно добавляют гепарин – антикоагулянт, который препятствует свертыванию крови и обеспечивает сохранение форменных элементов крови в виде суспензии в плазме. Затем кровь разводят физиологическим раствором и наслаивают ее в пробирку, наполовину заполненную фиколл-изопаком или фиколл-верографином, и затем центрифугируют. Смесь полисахарида фиколла и рентгеноконтрастного вещества изопак или верографина создает градиент с такой плотностью, которая позволяет при центрифугировании суспензии разделить клетки периферической крови на фракции с большей и меньшей, чем градиент, плотностью. В градиенте плотности фиколл-изопака или фиколл-верографина (d=1,077г/см3) на границе раздела фаз образуется кольцо, содержащее слой мононуклеарных клеток (лимфоциты и моноциты). Эритроциты и гранулоциты оседают на дно пробирки (рис.51). Это объясняется тем, что плотность фиколл-верографина выше, чем плотность лимфоцитов, но ниже, чем плотность эритроцитов и гранулоцитов.
Материалы для исследования показателей иммунной системы могут быть различными в зависимости от клинической картины заболевания и от
Рисунок 51. Выделение лимфоцитов в градиенте плотности
Фикол-изопак
того, функции каких компонентов мы хотим исследовать (табл. 23 и 24). На этапе подготовки к исследованию весьма важным является получение и хранение биологических жидкостей; необходимо помнить о том, что нарушение этих правил может значительно исказить конечный результат.
Таблица 23. Биологические жидкости, используемые для проведения иммунного анализа
Группа |
Биологический материал |
Жидкости замкнутых пространств |
лимфа, периферическая кровь, перитонеальная, плевральная, синовиальная, цереброспинальная жидкость |
Экстраваскулярные секреты |
бронхоальвеолярная жидкость, вагинальные секреты, моча, пот, секреты верхних дыхательных путей, секреты желудочно-кишечного тракта, секреты молочных желез, слезная жидкость, слюна, эякулят |
Таблица 24. Примеры иммунологических показателей, определяемых при исследовании разных биологических материалов
Биологический материал |
Иммунологические показатели |
Цереброспинальная жидкость |
Концентрация IgA, M, G; определение свободных легких цепей иммуноглобулинов (κ типов); Содержание TNF-; IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, sIL-2R; TGF-; M-CSF, ICAM-1 |
Бронхоальвеолярная жидкость |
sIgA, Ig A, M, G; подклассы IgG, IgE общий; гистамин; 1-антитрипсин; 2-макроглобулин |
Назальный смыв |
sIgA, Ig A, M, G; IgE - общий и специфический, лизоцим и лактоферрин, TNF-; IL-1, IL-6, IL-8 |
Слезная жидкость |
Эозинофилы, основной белок эозинофилов; IgA, M, G, E; лизоцим, интерферон |
Мокрота |
Лейкоциты, IL-8 |
Слюна |
sIgA, IgA, IgM, IgG; миелопероксидаза и лактопероксидиза |
Желудочный сок, сок тонкого и толстого кишечника |
Ig A, M, G |
Cиновиальная жидкость |
лейкоциты, лизоцим, IL-8, IL-6, IL-1 |
Кожа |
Ig A |