- •Практическое занятие № 1 (1-3)
- •Тема занятия:
- •Перечень нормативных документов, регламентирующих требования к безопасности работы в лаборатории:
- •Устройство кдл
- •Содержание производственной деятельности медицинского лабораторного техника.
- •Санитарное содержание помещений.
- •Правила работы в кдл.
- •Первая помощь при химических ожогах и отравлениях
- •Задание:
- •Подготовьте полные письменные ответы на следующие вопросы:
- •Выписка из инструкции по противоэпидемическому режиму лаборатории диагностики спид
- •5 Июня 1990 г. № 42-28/38-90
- •Правила сбора мочи
- •Подготовка рабочего места для определения физических свойств мочи
- •Ознакомившись с изложенной ниже информацией, заполните предложенную таблицу по образцу:
- •Алгоритмы определения физических свойств мочи
- •Алгоритм действий:
- •Определение реакции мочи (кислотности, рН)
- •Практическое занятие № 2 (4-6)
- •Тема занятия:
- •2.1. Качественное определение белка в моче.
- •2.2. Количественное определение белка в моче с 3% сульфосалициловой кислотой и с пирогаллоловым красным.
- •2.3. Определение глюкозы в моче.
- •Внимательно прочтите ниже изложенную информацию.
- •Протеинурии
- •Определение белка в моче.
- •Метод количественного определения общего белка в моче с сульфосалициловой кислотой (30 г/л)
- •Метод определения белка в моче с пирогалловым красным
- •Определение суточной потери белка
- •Глюкозурии Внимательно прочтите ниже изложенную информацию.
- •Качественное определение глюкозы в моче.
- •Количественное определение глюкозы
- •Количественное определение глюкозы в моче ортотолуидиновым методом.
- •Количественное определение глюкозы в моче глюкозооксидазным методом
- •Определение глюкозы с использованием методов «сухой химии»
- •Алгоритмы определения белка и глюкозы Методы качественного определения белка в моче.
- •Количественное определение белка в моче кольцевой пробой
Количественное определение глюкозы
Унифицированы способы количественного определения глюкозы в моче по цветной реакции с ортотолуидином и глюкозооксидазный метод.
Количественное определение глюкозы производят только в тех порциях мочи, в которых она была обнаружена качественно. При определении глюкозы в суточном количестве мочи у больных сахарным диабетом исследуют мочу собранную за сутки. Во избежание ложноположительных результатов перед определением глюкозы приостанавливают лечение тетрациклином, хлортетрациклином, так как они выделяются с мочой и искажают результаты определений.
Количественное определение глюкозы в моче ортотолуидиновым методом.
Принцип. Глюкоза образует с ортотолуидином в кислой среде при нагревании зелено-синее окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации глюкозы.
Количественное определение глюкозы в моче глюкозооксидазным методом
Принцип. Глюкоза в присутствии фермента глюкозоксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода. Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта, определяемого фотометрически.
Реактивы.
1. Буферный раствор, рН=6,0.
2. Реагент (смесь ферментов).
3. Стандарт глюкозы 5,55 ммоль/л.
4. Стандарт глюкозы 16,0 ммоль/л.
Приготовление рабочего реагента: за несколько часов до проведения анализа (рекомендуется за сутки) содержимое флакона 2 растворяют буферным раствором из флакона 1 (до полного растворения реагента!), количественно переносят во флакон 1 и перемешивают.
Внимание! Рабочий реагент хранится в темном месте при температуре 2-8°С в течение месяца.
Ход определения. Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1:5 или 1:10, в зависимости от качественной реакции, результат умножают на коэффициент разведения (см. табл.). Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 15 мин при 37оС на водяной бане или в термостате при предварительно прогретом рабочем реагенте. Измеряют оптическую плотность опытной пробы Аоп стандарта Аст против холостой пробы. Стабильность окраски 15 мин.
Анализируемый образец, мл |
Опытная проба
|
Стандартная проба
|
Контрольная проба
|
Моча |
0,02 |
|
|
Стандарт глюкозы |
|
0,02 |
|
Дист. вода |
|
|
0,02 |
Рабочий реагент |
2,00 |
2,00 |
2,00 |
Концентрацию глюкозы в моче Соп в ммоль/л определяют по формуле:
Соп= Аоп х Сст
Аст
где Сст - концентрация одного из стандартов глюкозы, которому соответствует оптическая плотность Аст.
Для определения глюкозы в суточной моче, мочу собирают за 24 ч и измеряют ее объем. Определяют содержание глюкозы вышеописанным способом и умножают результат на количество суточной мочи.
Например: содержание глюкозы составляет 3,2 ммоль/л, суточный диурез 1,3 л, следовательно, в суточном количестве мочи концентрация глюкозы равна 3,2 ммоль/л -1,3 = 4,16 ммоль/л.
Примечание: в настоящее время для определения глюкозы в моче используют сертифицированные коммерческие наборы реагентов.