Метод количественного определения общего белка в моче с сульфосалициловой кислотой (30 г/л)

Принцип.

Белок с сульфосалициловой кислотой дает помутнение,

интенсивность которого, зависит от концентрации белка. Измерение

производится на биохимическом фотометре.

Реактивы.

Раствор сульфосалициловой кислоты (30 г/л), раствор хлорида натрия (9 г/л), стандартный раствор альбумина (10 г/л) с человеческой или бычьей сыворотки.

Оборудование и посуда. Фотометр биохимический, пробирки центрифужные мерные.

Ход определения.

В центрифужную пробирку наливают 1,25 мл про­зрачной отцентрифугированной мочи, добавляют 3,75 мл раствора сульфосалициловой кислоты. Через 5—12 мин определяют оптиче­скую плотность (ОП) на биохимическом фотометре относительно контрольной пробы с использованием оранжево-красного свето­фильтра (650—690 нм) и кюветы с длиной оптического пути (толщи­ной слоя фотометрируемого раствора) 5 мм.

Примечание. При высоком содержании белка разводят мочу обыч­ным способом.

Контроль.

В центрифужные пробирки наливают 1,25 мл отцентрифугированной мочи и добавляют 3,75 мл раствора хлорида натрия. Производят измерение на фотометре при тех же условиях, что и при постановке опытных проб.

Однако на практике для облегчения проведения реакции в опытной, контрольной пробах и построения калибровочной кривой берут 1 мл мочи и 3 мл кислоты. Расчет ведут по калибровочному гра­фику, для построения которого готовят разведения из стандартного раствора альбумина (10 г/л) из человеческой или бычьей сыворотки в растворе хлорида натрия (9 г/л) с концентрацией белка 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 г/л. Из каждого разведения берут 1 мл и обрабатывают, как опытные пробы. Прямолинейная зависимость при построении кали­бровочного графика сохраняется до концентрации 1,0 г/л.

Для определения суточной потери белка моча собирается 24 ч, хранится в холодильнике или с использованием консерванта. Затем определяют белок в моче, и полученную величину умножают на суточный диурез. Величину суточной протеинурии выражают в грам­мах. Например, за сутки выделено 1,5 л мочи, концентрация белка составляет 2 г/л, абсолютное количество белка равно 3 г за сутки (2-1,5).

Метод определения белка в моче с пирогалловым красным

Принцип. Определение белка в моче основано на образовании им ком­плекса с красителем пирогаллоловым красным в присутствии молибдата аммония, что сопровождается изменением окраски, интенсив­ность которой прямо пропорциональна содержанию белка в образце и регистрируется спектрофотометрически при длине волны монохро­матического светового потока 600 нм.

Реактивы (включенные в набор реагентов):

Состав набора реагентов	200мл	500мл
Реактив 1. Раствор красите­ля	2-100 мл	2-250 мл
Реактив 2. Калибратор белка	+	+

Приготовление растворов. Раствор красителя готов к использованию в течение всего срока годности. Его можно хранить в течение месяца при комнатной температуре.

Условия определения:

1. Длина волны спектрофотометра 600 нм.

2. Одноразовые кюветы с толщиной оптического слоя 10 мм.

3. Температура комнатная.

Ход определения.

	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Реактив 1, мкл	1000	1000	1000
Образец, мкл	20	-	-
Реактив 2, стандарт	-	20	-
Дистиллированная вода, мкл	-	-	20

Перемешать и через 10 мин измерить оптическую плотность опытной (А_обр.) и калибровочной (А _калибр) проб относительно холостой пробы. Окраска стабильна не менее 30 мин.

Расчет. Концентрация белка в образце (С_обр) рассчитывается по формуле:

С_обр= (А_обр./А_калибр.) х С_калибр,

где С_калибр — концентрация белка в стандарте.

Если концентрация белка в образце превышает 1 г/л, то образец разводят физиологическим раствором, повторяют анализ, а результат анализа умножают на коэффициент разведения.

Линейная область: 10—1000 мг/л.

Нормальные значения: менее 0,1 г/л.