Определение глюкозы с использованием методов «сухой химии»

Методология «сухой химии» реализуется с применением специальных полосок, реагентные зоны которых содержат сухие реактивы (фер­менты и/или неферменты), способные воздействовать на определен­ные метаболиты биологических жидкостей с изменением окраски индикаторной зоны.

Для экспресс-выявления глюкозы в моче и ее полуколичественно­го определения используются тест-полоски различных фирм.

Принцип. Метод основан на специфическом окислении глюкозы помощью фермента глюкозоксидазы. Образовавшаяся при этом перекись водорода разлагается вторым ферментом - пероксидазой окисляет добавленный краситель (ортотолуидин, бензидин). В результате краситель изменяет свой цвет, что свидетельствует о наличии глюкозы в моче.

Ход определения. Из пенала извлекают одну полоску, опускают поло­ску в мочу. Затем полоску оставляют на 2 мин при комнатной температу­ре, после чего сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой. Если первоначальный цвет полосы на бумаге существенно не меняется, то глюкоза в моче отсутствует. При нали­чии глюкозы цвет полосы меняется от свет­ло-зеленого до интенсивно-зеленого.

Алгоритмы определения белка и глюкозы Методы качественного определения белка в моче.

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пробирки, пипетки или дозаторы, диагностические тестовые полоски, темный фон, центрифуга, исследуемый материал

Реактивы: бромтимоловыйсиний, 10% уксусная кислота, 20% сульфосалициловая кислота

Алгоритм действий:

Вариант 1: Качественное определение белка в моче сульфосалициловым методом.

• Определяют рН (моча должна быть кислой реакции); мочу с щелочной реакцией подкисляют 2-3 каплями 10 % СН_ЗСООН на 10 мл мочи;

• Определяют прозрачность мочи визуально на черном фоне (моча должна быть прозрачной); при необходимости избавляемся от мути: 10 мл исследуемой мочи наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин;

• Приступаем к определению белка:

• Содержимое пробирки делят на две порции по 5 мл;

• Первая пробирка служит контролем (реактив в нее не добавляют), во вторую пробирку капают 1-2 капли 20% сульфосалициловой кислоты;

• Сравнивают 1 и 2 пробирку на темном фоне;

• Ход реакции представлен в таблице

Пробирки	Моча	20% р-р сульфосалициловой кислоты	Результат
1 опыт	2-3 мл	1-2 капли	При наличии белка моча мутнеет
2 контроль	2-3 мл	-	Прозрачная

К онтроль Опыт Контроль Опыт

Темный фон

+ 1-2 капель

20% сульфо-

салициловой

кислоты

• Оценивают результат:

• если жидкость помутнела, значит, в моче есть белок;

• если жидкость осталась прозрачной, то белок отсутствует.

• Полученные результаты записывают в бланк.

Вариант 2: Качественное определение белка в моче диагностической полоской.

1. 10 мл мочи наливают в пробирку.

2. Погрузить тест - полоску в мочу.

3. Удалить остатки мочи, проведя тест-полоской по краю сосуда с пробой или слегка прикоснувшись ребром тест-полоски к фильтровальной бумаге (салфетке).

4. Через указанное в инструкции время сравнить цветовое окрашивание реагентной зоны тест-полоски, определяющей белок в моче, с цветовой шкалой на упаковке.