150 Общие и частные методы обнаружения примесей

Для испытаний чистоты избирают реакции с такой чувствительностью, которая позволяет определить допустимые пределы примесей в данном лекарственном препарате. Эти пределы устанавливают предварительной биологической проверкой с учетом возможного токсического воздействия примеси.

Определить максимальное содержание примесей в испытуемом препарате можно двумя путями (эталонным и безэталонным). Один из них основан на сравнении с эталонным раствором (стандартом). При этом в одинаковых условиях наблюдают окраску или помутнение, возникающие под действием какого-либо реактива. Второй путь — установление предела содержания примесей по отсутствию положительной реакции. При этом используют химические реакции, чувствительность которых ниже, чем предел обнаружения допустимых примесей.

Используют также различные качественные методы(цветные реакции) и количесвтенные(колич содерж примесей в ЛС: хроматография, спектрофотометрия)

151 Определение остаточных количеств пестицидов, эндотоксинов

Испытания на пирогенность инъекционных препаратов. Необходимость проведения этого теста связана с присутствием в инъекционных препаратах фрагментов клеток грамположительных и грамотрицательных бактерий, грибов, вирусов и эндотоксинов. Применение таких препаратов вызывает, жар, озноб, тошноту, иногда летальный исход. Причем наибольшую опасность представляют эндотоксины, которые являются термостабильными и состоят из липополисахаридов внешней плазматической мембраны грамотрицательных бактерий, попадание которых в организм человека провоцирует резкий воспалительный процесс.

Вот почему содержание пирогенных примесей в инъекционных растворах, согласно требованиям ГФ и GMP, должно быть сведено к минимуму. Контроль содержания пирогенных примесей в инъекционных препаратах проводят двумя методами: в опытах in vivo на кроликах и in vitro с использованием ЛАЛ-реактивов, приготовленных из крови мечехвостов (ЛАЛ-тест).

Испытания на кроликах приведены в ГФ. Испытания проводят на 12 кроликах породы шиншилла, массой 2,5 — 3,0 кг с соблюдением строгого стандартного рациона питания в специально оборудованном тихом, светлом, без перепадов температуры помещении. Кроликов помещают в специально оборудованные индивидуальные боксы, позволяющие проводить постоянное измерение температуры, которая записывается в автоматическом режиме самописцем, что исключает фальсификацию данных.

В начале опыта препарат вводится трем животным. ЛС считается апирогенным, если суммарное повышение температуры тела животных (Za/) составляет не более 1,2 °С. На втором этапе испытаний препарат вводят шести животным. ЛС признают пирогенным, если ЕД/ превышает 3,0. На третьем этапе число животных равно девяти. ЛС считают пирогенным при Ед/ > 4,5. Наконец, на четвертом этапе используется 12 животных, и препарат считают пирогенным, если Ед^ > 5,4. После окончания проверки составляется протокол, который включает параметры эксперимента, заключение о соответствии проверяемого раствора требованиям на пирогенность.

Данный метод имеет ряд недостатков. В эксперименте используют животных, чувствительность которых к пирогенам в 3 — 4 раза ниже, чем у человека. Это требует соответствующего увеличения тест-дозы. Кроме того, многие лекарственные вещества в дозах, близких к терапевтическим, могут вызвать токсические реакции и даже гибель животных. Поэтому используется заниженная величина тест-доз (инфузионные растворы глюкозы, антибиотики — бензил-пенициллина натриевая соль, линкомицина гидрохлорид и др.). На проведение одной серии опыта требуется около 5 ч.

Метод Hbt LAL предназначен для количественного измерения эндотоксина в культуральной среде, плазме, сыворотке и других растворах. Предел чувствительность метода составляет 1.4 пг/мл и диапазон измеряемых концентраций от 1 до 1,000 пг/мл.

ЛАЛ-тест для определения пирогенности лекарственных препаратов является активно развивающимся в настоящее время способом контроля качества лекарственных средств. Он может быть использован и в некоторых других областях, где необходимо быстрое обнаружение грамотрицательных бактерий или их эндотоксинов. В основе этого теста лежит способность лизата амебоцитов (клеток крови) мечехвоста специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий (липополисахаридами, ЛПС). В результате реакции эндотоксина и лизата происходит помутнение прозрачной реакционной смеси или образование твердого геля, что и служит индикатором присутствия эндотоксина.