4.2. Примеси (количественное содержание)

Правильность изучают на образцах (субстанции или готового лекарственного препарата) с добавленным известным количеством примесей. Если примеси или продукты разложения недоступны, применяют арбитражный метод (см. п. 1.2.2.). Если примеси неизвестны, то чувствительность их определения может быть принята равной чувствительности определения субстанции. Если чувствительность определения субстанции и примеси существенно отличается, то вводят коэффициент пересчета. Должен быть указан конкретный способ нормирования содержания отдельной примеси или суммы примесей, например, в массовых процентах, в процентах по отношению к площади пика основного анализируемого компонента или др.

4.3. Представление данных

Правильность оценивают не менее чем для девяти определений, охватывающих весь диапазон применения (например, три концентрации и три определения для каждой). Определения должны включать все стадии методики. Правильность выражают в процентах найденного значения от введенного количества или как разность между средним и истинным значением с учетом соответствующих доверительных интервалов.

5. Прецизионность

Валидационная характеристика прецизионности изучается для методик количественного определения и методик количественного определения примесей.

5.1. Сходимость

Сходимость изучают, выполняя:

a) не менее девяти определений, охватывающих диапазон применения методики (например, три концентрации /три определения для каждой) или

b) не менее шести определений для образцов с содержанием анализируемого вещества, близким к номинальному.

5.2. Внутрилабораторная прецизионность

Устанавливают влияние случайных факторов на прецизионность валидируемой аналитической методики. Типичными исследуемыми факторами являются различные дни, различные аналитики, различное оборудование и т. п. Не считается необходимым изучать влияние каждого фактора отдельно. При изучении влияния различных факторов предпочтительно использовать планирование эксперимента.

5.3. Воспроизводимость

Воспроизводимость оценивают путем проведения межлабораторных исследований. Воспроизводимость должна быть изучена при стандартизации аналитической методики, например при включении методики в фармакопею. Эти данные не включают в регистрационное досье.

5.4. Представление данных

При изучении прецизионности следует представлять: стандартное отклонение, относительное стандартное отклонение и доверительный интервал.

6. Предел обнаружения

В зависимости от того, является ли методика инструментальной или не инструментальной, возможны различные подходы для определения предела обнаружения. Используются следующие (а также другие) подходы.

6.1. Визуальная оценка

Визуальную оценку используют как для не инструментальных, так и для инструментальных методов. Предел обнаружения устанавливают путем анализа образцов с известными концентрациями анализируемого вещества и оценкой минимального содержания, при котором анализируемое вещество надежно определяется.

6.2. Соотношение сигнал/шум

Этот подход применим только к тем методам, для которых наблюдается шум базовой линии. Для определения соотношения сигнал/шум сравнивают величины сигналов, полученные для контрольного опыта и для образцов с низкими концентрациями анализируемого вещества. На основании полученных данных устанавливают минимальную концентрацию, для которой величина отношения сигнал/шум составляет обычно от 3 до 2.

6.3. Использование калибровочной прямой и стандартного отклонения аналитического сигнала

Предел обнаружения (ПО) может быть выражен как: ПО = 3.3 · / S, (1)

где:3,3 — стандартное отклонение сигнала,

S — тангенс угла наклона калибровочной прямой. Значение тангенса угла наклона калибровочной прямой вычисляют из калибровочной прямой для анализируемого вещества. Оценка стандартного отклонения сигнала может быть проведена многими способами, например следующими.

6.3.1. Использование стандартного отклонения сигнала для контрольного опыта

Измеряют величину аналитического сигнала для необходимого числа образцов, не содержащих анализируемое вещество, и вычисляют стандартное отклонение.

6.3.2. Использование калибровочной прямой

Получают калибровочную прямую для образцов с содержанием анализируемого вещества, близким к пределу обнаружения, и вычисляют ее параметры. В качестве стандартного отклонения в формуле (1) может быть использовано стандартное отклонение свободного члена линейной зависимости.

6.4. Представление данных

Представляют значение предела обнаружения с указанием способа, использованного для его определения. Если определение предела обнаружения основывается на отношении сигнал/шум, представляют соответствующие хроматограммы. Если значение предела обнаружения получено путем вычислений или экстраполяций, его оценка должна быть подтверждена анализом необходимого числа образцов с содержанием анализируемого вещества, близким к пределу обнаружения.