- •Валидация аналитических методик. Краткая характеристика.
- •B. Проведение валидации аналитических методик
- •1. Специфичность
- •1.1. Идентификация
- •1.2. Количественное определение и испытания на примеси
- •1.2.1. Образцы примесей имеются
- •1.2.2. Образцы примесей отсутствуют
- •2. Линейность
- •4. Правильность
- •4.1. Количественное определение
- •4.1.1. Активная субстанция
- •4.1.2. Готовый лекарственный препарат
- •3. Диапазон применения
- •4.2. Примеси (количественное содержание)
- •7. Предел количественного определения
- •7.1. Визуальная оценка
- •7.2. Соотношение сигнал/шум
- •7.3. Использование калибровочной прямой и стандартного отклонения сигнала
- •9. Проверка пригодности системы
- •C. Валидация аналитических методик: особенности ее применения к методам, используемым в фармакопее
- •1. Оптическое вращение (2.2.7)1
- •1.1. Введение
- •1.2. Идентификация
- •1.3. Испытания
- •1.4. Количественное определение
- •2. Абсорбционная спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях спектра (2.2.25)1
- •2.1. Идентификация
- •D. Рекомендации относительно критериев при проведении валидации для методик количественного анализа [8,11,12,13]
- •1. Требования к неопределенности результатов анализа
- •2. Валидационные характеристики: рекомендации по проведению эксперимента и критериям приемлемости
- •2.1. Критерий незначимости
- •2.2. Нормализованные координаты
- •2.3. Линейность, правильность и прецизионность
- •2.3.1. Линейность
- •2.3.2. Правильность
- •2.3.3. Прецизионность
- •2.4. Пример проведения эксперимента и расчета критериев
- •2.4.1. Линейность, правильность и прецизионность
- •2.4.2. Предел обнаружения (по) и предел количественного определения (пко)
7. Предел количественного определения
В зависимости от того, является ли методика инструментальной или неинструментальной, возможны несколько подходов для установления предела количественного определения. Могут быть использованы следующие (а также другие) подходы. 32 33
7.1. Визуальная оценка
Визуальную оценку используют как для неинструментальных, так и для инструментальных методов. Предел количественного определения устанавливают путем анализа образцов с известными концентрациями анализируемого вещества и оценкой минимального содержания, при котором анализируемое вещество определяется количественно с требуемой правильностью и прецизионностью.
7.2. Соотношение сигнал/шум
Этот подход применим только к тем методам, для которых наблюдается шум базовой линии. Для определения соотношения сигнал/шум сравнивают величины сигналов, полученные для контрольного опыта (при отсутствии анализируемого вещества), и для образцов с низкими концентрациями анализируемого вещества. На основании полученных данных устанавливают минимальную концентрацию, для которой величина отношения сигнал/шум составляет около 10:1.
7.3. Использование калибровочной прямой и стандартного отклонения сигнала
Предел количественного определения (ПКО) может быть выражен как:
ПКО = 10 . / S , (2)
где: 10 — стандартное отклонение сигнала,
S — тангенс угла наклона калибровочной прямой. Значение тангенса угла наклона калибровочной прямой S может быть определено из калибровочной прямой для анализируемого вещества. Оценка стандартного отклонения сигнала может быть проведена многими способами, например следующими.
7.3.1. Использование стандартного отклонения сигнала для контрольного опыта
Измеряют величину аналитического сигнала для необходимого числа образцов, не содержащих анализируемое вещество, и вычисляют стандартное отклонение.
7.3.2. Использование калибровочной прямой
Получают калибровочную прямую для образцов с содержанием анализируемого вещества, близким к пределу количественного определения, и вычисляют ее параметры. В качестве стандартного отклонения у в формуле (2) может быть использовано стандартное отклонение свободного члена линейной зависимости.
7.4. Представление данных
Представляют значение предела количественного определения с указанием способа, использованного для его определения. Значение предела количественного определения должно быть подтверждено анализом необходимого числа образцов с содержанием анализируемого вещества, близким к пределу количественного определения.
8. Робастность
Оценку робастности проводят на стадии разработки методики с учетом типа изучаемой методики. Эта оценка должна доказать надежность результатов анализа при небольших изменениях параметров методики. Если на результаты анализа влияют условия его проведения, то эти условия должны быть стандартизированы и в текст методики вносят соответствующие предостережения. Типичные примеры изучаемых параметров: устойчивость во времени аналитических растворов; время экстракции. В случае жидкостной хроматографии: рН подвижной фазы; состав подвижной фазы; колонки (различные серии и/или поставщики); температура; скорость подвижной фазы. В случае газовой хроматографии: колонки (различные серии и/или поставщики); температура; скорость газа-носителя.