- •Міністерство охорони здоров’я україни
- •Завідуючий Сектором із забезпечення діяльності Міністра р.Й.Василишин
- •Методичні вказівки
- •Listeria monocytogenes у харчових продуктах та продовольчій сировині”
- •Загальні положення
- •2. Коротка характеристика мікроорганізмів роду Listeria
- •3. Організація контролю продукції на Listeria monocytogenes
- •6. Апаратура, матеріали, лабораторний посуд, реактиви, поживні середовища
- •6.1. Апаратура та інструментарій
- •4. Організація лабораторних досліджень на Listeria monocytogenes
- •5. Сутність методу
- •6.2. Лабораторний посуд та матеріали
- •7. Підготовка до дослідження
- •7.1. Приготування розчинів та реактивів
- •7.2. Приготування поживних середовищ
- •8. Відбір і підготовка проб харчових продуктів для дослідження
- •8.1. Загальні положення по відбору і підготовці проб
- •8.2. Відбір і підготовка проб молока, молочних продуктів, сирів, морозива
- •8.3. Відбір і підготовка проб м'яса, м'ясних напівфабрикатів, м'яса птахів і птахопродуктів, ковбасних виробів і інших м'ясопродуктів
- •8.4. Відбір і підготовка проб плодоовочевої продукції
- •8.5. Відбір і підготовка проб риби, нерибних об'єктів промислу і продуктів, що з них вироблені
- •8.6. Відбір і підготовка проб продуктів дитячого, лікувального харчування і їх компонентів
- •9. Порядок проведення дослідження
- •10. Виявлення Listeria monocytogenes у реакції наростання титру фага (рнф)
- •11. Визначення Listeria monocytogenes за допомогою автоматичного імуноаналізатора типу “miniVidas”
- •12. Біологічні, серологічні та молекулярно-генетичні дослідження
- •13. Вимоги безпеки
- •14. Нормативні посилання
- •Додаток до методичних вказівок
- •Поживні середовища промислового виробництва, зареєстровані в Україні, рекомендовані для виділення Listeria monocytogenes Для культивування ізолятів
- •Дріжджовий триптон-соєвий агар / бульйон - Tryptone Soya Yeast Extract Agar / Broth (m1214 / m1263)
- •Середовища селективного збагачення Основа бульйону Фрейзера - Fraser Broth Base (m1327)
- •Бульйон збагачення для лістерій - Listeria Enrichment Broth (м569
- •Середовище збагачення для лістерій (uvm) –
- •Бульйон збагачення для лістерій, модифікований –
- •Основа бульйону вторинного збагачення для лістерій –
- •Основа селективного бульйону для лістерій –
- •Диференційно-діагностичні селективні середовища Агар для ідентифікації лістерій (palcam) –
- •Основа Оксфордського середовища для лістерій –
- •Селективний агар для лістерій (двокомпонентне середовище) –
- •Основа агару МакБрайда для лістерій / Основа агару МакБрайда для лістерій модифікована –
- •Основа селективного агару lpm для лістерій - lpm Agar Base (m1228)
- •Нітратний агар / Нітратний бульйон –
- •Бульйон для визначення цукролітичної активності лістерій –
- •Основа бульйону з бромкрезоловим пурпурним для лістерій –
Додаток до методичних вказівок
„Організація контролю і методи виявлення
бактерій Listeria monocytogenes у харчових
продуктах та продовольчій сировині”
(Рекомендований)
Поживні середовища промислового виробництва, зареєстровані в Україні, рекомендовані для виділення Listeria monocytogenes Для культивування ізолятів
Поживний агар / бульйон - Nutient Agar / Broth (M001 / M002)
Склад |
М001 грам/дм3 |
М002 грам/дм3 |
Пептичний перевар тваринної тканини М’ясний екстракт Дріжджовий екстракт Натрію хлорид Агар-агар Кінцеве значення рН (при 25ºС) 7,4 ± 0,2 |
5,00 1,50 1,50 5,00 15,00
|
5,00 1,50 1,50 5,00 – |
Приготування: Розмішати 28,0 г порошку М001 або 13,0 г порошку М002 в 1000 см3 дистильованої води. Прокип’ятити до повного розчинення часток. Розлити у відповідні ємкості. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121ºС) протягом 15 хв. Для приготування середовища для культивування лістерій в середовище M001 перед стерилізацією вносять глюкозу (10,0 г) і ретельно перемішують, або стерильний розчин глюкози асептично додають (до кінцевої концентрації 1%) в середовище M001 після його стерилізації. Готове середовище має світло-бурштиновий колір, прозоре або з легкою опалесценцією.
Дріжджовий триптон-соєвий агар / бульйон - Tryptone Soya Yeast Extract Agar / Broth (m1214 / m1263)
Ці середовища рекомендовані фахівцями комітету ISO для виявлення лістерій, а також для культивування і зберігання багатьох гетеротрофних мікроорганізмів.
Склад |
М1214 грам/ дм3 |
М1263 грам/ дм3 |
Гідролізат казеїну Папаїновий перевар соєвого борошна Натрію хлорид Калію гідрофосфат Глюкоза Дріжджовий екстракт Агар-агар Кінцеве значення рН (при 250С) 7,3 ± 0,2 |
17,00 3,00 5,00 2,50 2,50 6,00 15,00
|
17,00 3,00 5,00 2,50 2,50 6,00 –
|
Приготування: Розмішати 51,0 г порошку М1214 або 36,0 г порошку М1263 в 1000 см3 дистильованої води. Кип’ятити до повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Готові середовища мають жовтий колір, прозорі.
Принцип і оцінка результату. За рекомендаціями американських фахівців, для виділення Listeria monocytogenes з молочних продуктів досліджуваний матеріал засівають в середовище збагачення і інкубують при 300С протягом 24-48 год. Потім культуру засівають штрихами на Модифікований агар Мак-Брайда для лістерій (М891) з циклогексамідом або Агар LPM (М1228) з подальшою інкубацією при 350С протягом 48 год. Підозрілі на лістерії колонії відбирають у відбитому світлі (450), після чого їх розсівають на Дріжджовий Триптон-соєвий агар (М1263). Колонії лістерій виглядають щільними білими або веселково-білими, нагадуючи бите скло. Колонії інших мікроорганізмів жовті або оранжеві.