- •3 Серпня 2010 р. – 31 серпня 2010 р.
- •6.2. Хроматографічна очистка алкогольоксидази на сорбенті діасорб пеі 14
- •1. Загальна інформація про організацію – базу проходження практики
- •2. Інформація про структуру та організацію роботи біохімічної лабораторії; її забезпеченість реактивами, матеріалами та обладнанням
- •3. Опис виконання практики згідно з календарним планом
- •4. Вступ
- •5.3. Визначення активностi алкогольоксидази
- •5.4. Визначення концентрації білка
- •5. Матеріали та методи досліджень
- •5.1 Об’єкти досліджень
- •5.2. Одержання безклітинного екстракту.
- •5.5. Електрофорез ао h. Рolymorpha за нативних умов
- •5.6. Статистична обробка результатів
- •6. Результати досліджень та їх обговорення
- •6.1. Дослідження неорганічних сорбентів з метою імобілізації алкогольоксидази
- •6.2. Хроматографічна очистка алкогольоксидази на сорбенті діасорб пеі
- •7. Висновки
- •8. Список використаної літератури
7. Висновки
У ходi роботи було проведено дослідження по скринінгу сорбентів з метою ефективного очищення алкогольоксидази дріжджів Hansenula polymorpha, зокрема:
Обрано оптимальний сорбент для іммобілізації та очистки алкогольоксидази, а саме сорбент на основі мінерального носія, силохрому - Діасорб ПЕІ;
Встановлено оптимальні умови іммобілізаціїї фермента: 50мМ фосфатний буфер, рН 7.0;
Проведена ефективна очистка алкогольоксидази дріжджів Hansenula polymorpha .
8. Список використаної літератури
Гончар М.В., Сибірний А.А., Майдан М.М. Аналітичний набір для ферментативного визначення алкоголю в біологічних рідинах “АЛКОТЕСТ”: Технічні умови: Затв. М-вом охорони здоров’я України 29.03.1994а. – 23 с.
Гончар М.В., Сибірний А.А., Майдан М.М., Покрасьон М.М. Інструкція використання аналітичного набору для ферментативного визначення.
Гончар М.В., Майдан М.М., Сибірний А.А. Спосіб кількісного визначення перекису водню та субстратів оксидаз у біологічних об’єктах // Пат. 10752 України, МПК5 G 01 N 33/48 / Заявка № 95073201; Заявлено 10.07.95; Опубл. 25.12.96, Бюл. № 4. -11 с.
Gonchar М.V., Grabek D., Оklejewich B., Pavlishko H.М., Shamlian О.V., Sybirny V.А., Kotylak Z., Rudke К., Rudke K., Csoregi E., Sibirny A.A. A new enzymo-chemical method for simultaneous assay of methanol and formaldehyde // Ukr. Biochem. J. – 2005. – V. 77, N 3. – P. 146-154.
Сибирный В.А., Гончар М.В., Рябова О.Б., Майдан М.М. Современные методы анализа формальдегида, метанола и этанола // Мікробіол. журн. – 2005. – Т. 67, N 4. – С. 85-110.
Ho M.H., Richards R.A. Enzymatic method for the determination of formaldehyde // Environ. Sci. Technol. – 1990. – V. 24. – P. 201-204.
Sawicki E., Hauser T.R., Stanley T.W., Elbert W. The 3-methyl-2-benzothiazolone hydrazone test. Sensitive new methods for the detection, rapid estimation, and determination of aliphatic aldehydes // Anal. Chem. – 1961. – V. 33. – P. 93-96
Schutte H., Flossorf J., Sahm H. et. al. Purification and properties of formaldehyde dehydrogenase and formate dehydrogenase from Candida boidinii // Eur J. Biochem. - 1976.- V. 62. - Р.151–160.
Dijken J.P., Oostra-Demkes G.J., Otto R. et. al. S-Formylglutathione: the substrate for formate dehydrogenase in methanol-utilizing yeasts // Arch. Microbiol. - 1976. - Vol. 111. - №1-2. - P.77-83.
Gonchar M., Ksheminska G., Hladarevska N., Sibirny A. Catalase-minus mutants of methylotrophic yeast Hansenula polymorpha impaired in regulation of alcohol oxidase synthesis // Proc. Intern. Conf. “Genetics of Respiratory Enzymes in Yeasts” / Ed. by T.M. Lachowicz. – Karpacz (Poland). – Wroclaw: Wroclaw University Press. – 1990. – P. 222 – 228.