6. Применение

ПЦР в реальном времени широко используется для решения многих исследовательских задач в лабораториях. Также этот метод нашел применение в биотехнологии (для определения содержания микроорганизмов в продуктах питания и растительных материалах, для детекции ГМО) и медицине (для диагностики заболеваний). Также кПЦР используется для генотипирования вирусов и других патогенов человека и определения их количественного содержания.

7.1 Диагностические исследования

Количественная ПЦР применяется для быстрого выявления генов или фрагментов ДНК, которые являются маркерами генетических отклонений, инфекционных заболеваний, и др. Введение данного метода в клинические лаборатории существенно улучшило качество диагностики инфекционных заболеваний. Также кПЦР используется в качестве инструмента для определения вновь возникающих заболеваний. Например, новых штаммов гриппа.

Использование кПЦР может позволить провести количественные измерения и генотипирование вирусов, например, вируса гепатита С. Степень инфекции, которая оценивается, как число копий вирусного генома на единицу ткани пациента, имеет немалое значение во многих случаях. Например, вероятность реактивации вируса простого герпеса типа 1 зависит от количества инфицированных ганглиев. В зависимости от того, интегрировал ли вирус в геном пациента (как, например, в случае вируса папилломы человека) или нет, количественный анализ осуществляется либо с применением обратной транскрипции, либо без неё.

Количественная ПЦР также широко используется для детекции опухолевых клеток в материале из плотных опухолей (solid tumours) и также при некоторых формах лейкемии.

7.2 Выявление циркулирующих опухолевых клеток

Наиболее частая причина смерти среди раковых больных - рак молочной железы. Часто смерть вызвана возникшими метастазами, а не только самой опухолью. Сами метастазы возникают от того, что особенные клетки, которые способны к пролиферации, отделяются от опухоли, выходят в кровяное русло и вторично поселяются в какой-либо части организма. Данные клетки называются циркулирующими стволовыми клетками (ЦСТ). Присутствие подобных клеток в крови пациентов, которые больны раком молочной железы, обычно связано с плохим прогнозом исхода терапии и выживаемости в целом, поэтому является достаточно важным диагностическим параметром. Тем не менее, выявление ЦСТ является довольно трудной задачей из-за очень низкого количества. И кПЦР, как высокочувствительный метод, может быть использован для решения этой проблемы. Дело в том, что ЦСТ, как и все раковые клетки, имеют эпителиальной происхождение и экспрессируют определенный набор генов, отличающийся от окружающих их клеток крови, имеющих мезенхимальное происхождение. Для применения подобной методики необходимо определить набор генов-маркеров ЦСТ и оценить их уровень экспрессии.

7.3 В микробиологии

ПЦР в реальном времени может применяться для микробиологических работ в сфере безопасности продуктов питания, в сфере здравоохранения, для оценки качества вод (питьевых и сточных). Данный метод может также использоваться для идентификации микрофлоры кишечника.