- •Гематокрит. Определение объемного соотношения форменных элементов и плазмы
- •Задача 1 Метод центрифугирования в гематокритной центрифуге
- •Задача 2 Электронно-автоматический метод определения гематокрита
- •Подсчет форменных элементов крови
- •Для подсчета форменных элементов крови:
- •Задача 1 Подсчет эритроцитов
- •Задача 2 Подсчет ретикулоцитов
- •Задача 3 Подсчет лейкоцитов
- •Задача 4 Подсчет тромбоцитов
- •Автоматический подсчет форменных элементов крови
- •Определение содержания гемоглобина в крови по методу сали
- •Определение содержания гемоглобина в крови с помощью фотоэлектроколориметра
- •Характеристика красной крови
- •Задача 1 Вычисление цветового показателя крови
- •Задача 2 Определение среднего объема эритроцита
- •Задача 3 Вычисление среднего содержания гемоглобина в одном эритроците
- •Задача 4 Вычисление средней концентрации гемоглобина в эритроците
- •Изучение различных видов гемолиза
- •Изучение осмотической резистентности эритроцитов
- •Определение скорости оседания эритроцитов (соэ)
- •Для определения соэ:
- •Наблюдение буферных свойств сыворотки крови по фриденталю
- •Определение группы крови
- •Определение резус-фактора
- •Определение времени свертывания крови
- •Определение времени кровотечения
- •Тромбоэластография
Наблюдение буферных свойств сыворотки крови по фриденталю
Эта работа позволяет наглядно убедиться в буферных свойствах сыворотки крови. Равные объемы сыворотки и воды (для контроля) титруют кислотой и щелочью до сдвига реакции соответственно в кислую и щелочную сторону.
Кровь высших животных и особенно человека отличается большим постоянством активной реакции. Величина рН в среднем составляет 7,36 и колеблется в очень узких границах, не выходя за пределы 7,3–7,4, т. е. слабощелочной реакции. Постоянство рН крови сохраняется, несмотря на непрерывное поступление в кровь кислых и щелочных продуктов обмена. Особенно много в тканях образуется кислых веществ (угольная кислота, молочная кислота и др.). Известно, что для того, чтобы сделать реакцию сыворотки щелочной (по фенолфталеину), к ней приходится прибавить в несколько десятков раз (40–70) больше, чем к дистиллированной воде. А чтобы сделать реакцию кислой (по метилоранжу), к сыворотке нужно прибавить в несколько сотен раз (300–400) больше соляной кислоты, чем к дистиллированной воде.
Постоянство рН крови обеспечивается целым рядом регуляторных механизмов, и в первую очередь следующими буферными системами:
1) гемоглобина (оксигемоглобин и восстановленный гемоглобин);
2) угольной кислоты – гидрокарбоната натрия (карбонатный буфер);
3) NaH2P04 и Na2HP04 (фосфатный буфер);
4) белков плазмы (белковый буфер).
Для работы необходимы: 4 стаканчика, 2 пипетки объемом 10 мл, 4 бюретки: сыворотка крови, разведенная в 10 раз, 0,01 н. раствор NaОН, 0,1 н. раствор НСl, дистиллированная вода, индикаторы – метилоранж и фенолфталеин. едкого натра
Проведение работы. Для изучения буферных свойств крови берут два чистых стаканчика и наливают из бюреток в один 5 мл сыворотки крови, в другой – 5 мл воды. Прибавляют в оба стаканчика по капле метилоранжа и титруют (считая капли) 0,1 н. НСl до появления не исчезающего при взбалтывании красного (алого) окрашивания. Титрование необходимо начинать с воды, которая не обладает буферными свойствами. Для простоты отсчет титрования ведут в каплях. Записывают, во сколько раз больше капель кислоты понадобится на титрование сыворотки, чем воды, чтобы в обоих стаканчиках получился одинаковый красный (алый) цвет.
Затем берут еще два стаканчика и снова наливают в один 5 мл сыворотки крови, а в другой – 5 мл воды. Прибавляют в каждый стаканчик по капле фенолфталеина и (считая капли) титруют 0,01 н. NaОН до не исчезающего в течение 1 мин слабого фиолетового окрашивания (для более точного сравнения нужно поставить оба стаканчика рядом на белую бумагу). Считают капли раствора щелочи при титровании воды и сыворотки. Устанавливают, во сколько раз больше NaОН понадобилось на титрование сыворотки, чем воды.
Результаты работы и их оформление. Запишите результаты. Сравните данные, полученные при титровании сыворотки кислотой и щелочью. Отметьте, во сколько раз буферные способности сыворотки нейтрализовать кислоту отличаются от ее способности нейтрализовать щелочь. Сформулируйте в виде вывода, что доказывает проведенный опыт.
Р а б о т а 11