3.3. Фиксация и окрашивание мазков

3.3.1 Общие правила фиксации и окрашивания мазков из синовиальной жидкости

- фиксация и окрашивание мазков может выполняться вручную или автоматически с помощью специальных устройств, в которые загружаются нефиксированные мазки. Последующее автоматическое дозирование фиксатора-красителя и буферных растворов обеспечивает стандартную и равномерную окраску;

- применение любой методики фиксации и окрашивания мазков требует точного соблюдения последовательности процедур при приготовлении растворов и временных промежутков в течение процесса фиксации и окрашивания;

- фиксация мазков выполняется либо как предварительный этап перед окрашиванием, либо одновременно с окрашиванием, если по технологии используются растворы готовых панхромных красителей.

Подготовительная работа для выполнения фиксации и окрашивания мазков из синовиальной жидкости состоит: в приготовления буферного раствора, смеси Никифорова, рабочих растворов красителей, и подготовке оборудования.

3.3.2 Для фиксации и окрашивания мазков необходимо приготовить следующие реактивы:

а) приготовление фосфатного буфера ( рН 7,0).

Для приготовления основного раствора фосфатного буфера необходимо приготовить растворы следующих солей:

• КН₂РО₄ - 3,4 г : растворяется в 200 мл дистиллированной воды;

• Nа₂ НРО₄ - 8,5 г : растворяется в 500 мл дистиллированной воды.

Непосредственно перед употреблением готовится рабочий раствор фосфатного буфера. Для этого к 400 мл дистиллированной воды, добавляется 20 мл раствора КН₂РО₄ и 60 мл раствора Nа₂ НРО_4.

П р и м е ч а н и е  Для приготовления буферного раствора ( рН 7,0) допустимо использование готовых форм (смеси фосфатных солей в виде таблеток, навесок)

б) приготовление смеси Никифорова:

смесь Никифорова готовится из этилового спирта и диэтилового эфира в пропорции 1:1 и используется для хранения чистых предметных стекол;

в) приготовление рабочих растворов красителей:

1) для фиксации мазков из синовиальной жидкости используется раствор (фиксатора-красителя) эозин-метиленового синего по Май-Грюнвальду или Лейшману; ¹ Раствор красителя Май-Грюнвальда (или Лейшмана) не разводится, для окрашивания препаратов 50 мл стандартного раствора красителя Май-Грюнвальда помещается в химический стакан или специальную кювету контейнера для окрашивания мазков;

2) готовый краситель Романовского-Гимзы разводится перед окрашиванием препаратов приготовленным рабочим буферным раствором (рН 7,0). Для этого в химический стакан к 5 мл красителя добавляется 40 мл буферного раствора.

П р и м е ч а н и е  Отдельные партии красителя имеют различную интенсивность окраски, которая устанавливается опытным путем (окрашивается серия препаратов (мазков) раствором красителя, меняя длительность его воздействия).

3.4. Технология окрашивание мазков из синовиальной жидкости по Паппенгейму

Реактивы:

- раствор фиксатора-красителя эозин метиленового синего по Май-Грюнвальду (или Лейшману);

- рабочий раствор красителя азур-эозина Романовского-Гимзы;

- буферные растворы: основной и рабочий;

Оборудование:

- кювета для окраски мазков со штативом-контейнером (или лотки со специальными «рельсами» для окрашивания цитологических препаратов;²

- химические стаканы низкие, для разведения красителей;

- резиновые перчатки.

Последовательность выполнения:

• сухие нефиксированные мазки аккуратно помещают в штатив-контейнер или на лотки со специальными «рельсами» для окрашивания мазков;

• штатив-контейнер опускают в кювету с раствором фиксатора-красителя Май-Грюнвальда на 3-5 минут или наливают раствор на препараты, находящиеся на «рельсах»;

• контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой в течение 1 минуты или на мазок, не сливая фиксатора-красителя, добавляют дистиллированную воду на 1 мин;

• помещают решетку с мазками в кювету с азур-эозиновой краской Романовского-Гимзы или наливают на мазки краску на 8-15 минут;

• смывают краску водопроводной водой;

• мазки высушивают на воздухе в течение 15 – 20 минут до полного высыхания.