Условия для выделения колоний

Операция	Среда	Термостатирование			Количество колоний или вариантов на одной чашке Петри
		Температура, ºС	Продолжительность, ч
Посев суспензии после воздействия и термостатирования	Агар с гидролизованным молоком и 2,5 %	25 или 30	72	20-30
Выделение колоний, термостатирование	Обезжиренное молоко	25 или 30	24	50-100
Пересадка вариантов (5-7 раз)	То же	25 или 30	17	-
Отбор вариантов	То же	25 или 30	17	-

У наиболее активных вариантов (свертывающих молоко до 17 ч) проверяют продолжительность свертывания пастеризованного молока и органолептические показатели по сравнению с исходным штаммом (при внесении 3% культуры). Отбирают варианты, свертывающие молоко не менее чем на 30% быстрее исходного штамма, образующие в молоке плотный колющийся сгусток и чистый кисломолочный вкус. После 2—3 пересадок в стерильное обезжиренное молоко варианты вновь проверяют на длительность свертывания пастеризованного мо лока и органолептические показатели по сравнению с исходным штаммом. Такой отбор проводят 2—3 раза.

Этиленимин является производным иприта, легко воспламеняю­щимся веществом. Поэтому при-работе с этиленимином необходимо пользоваться защитными очками, резиновыми перчатками и смочен­ной водой марлевой повязкой (последняя только при вскрытии ампулы и приготовлении раствора этиленимина). Вся работа по вскрытию ампулы, приготовлению раствора этиленимина и посеву проводится без спиртовки или газовой горелки в настольном боксе, предварительно облученном бактерицидной лампой. При работе с УФ-лучами работают в защитных очках и резиновых перчатках. Бокс при обработке бактерицидной лампой и облучении УФ-лучами сус­пензии клеток должен быть защищен от действия дневного света. Для чтого стенки и крышку бокса закрывают светонепроницаемой бума­гой или белой тканью.

У наиболее активных вариантов (свертывающих молоко до 17 ч) проверяют продолжительность свертывания пастеризованного молока и органолептические показатели по сравнению с исходным штаммом (при внесении 3 % культуры). Отбирают варианты, свертывающие молоко не менее чем на 30 % быстрее исходного штамма, образующие в молоке плотный колющийся сгусток и чистый кисломолочный вкус. После 2-3 пересадок в стерильное обезжиренное молоко варианты вновь проверяют на длительность свертывания пастеризованного молока и органолептические показатели по сравнению с исходным штаммом. Такой отбор проводят 2-3 раза.

Этиленимин является производным иприта, легко воспламеняю­щимся веществом. Поэтому при работе с этиленимином необходимо пользоваться защитными очками, резиновыми перчатками и смочен­ной водой марлевой повязкой (последняя только при вскрытии ампулы и приготовлении раствора этиленимина). Вся работа по вскрытию ампулы, приготовлению раствора этиленимина и посеву проводится без спиртовки или газовой горелки в настольном боксе, предварительно облученном бактерицидной лампой. При работе с УФ-лучами работают в защитных очках и резиновых перчатках. Бокс при обработке бактерицидной лампой и облучении УФ-лучами сус­пензии клеток должен быть защищен от действия дневного света. Для этого стенки и крышку бокса закрывают светонепроницаемой бума­гой или белой тканью.

Воздействие N-нитрозоэтилмочевины (НЭМ) на штаммы L.lactis. Отобранные штаммы L.lactis (17-18 ч на стерильном обезжиренном молоке) засевают в пробирки с гидролизованным молоком, содержащим дрожжевой автолизат, термостатируют при оптимальной температуре роста 17-18 ч. Затем в колбочку с той же средой вносят I |% культуры и термостатируют при оптимальной температуре для развития клеток (культуры) в средней фазе логарифмического роста| и содержания сотен миллионов клеток в 1 мл.

Культуральную жидкость центрифугируют в стерильных центри­фужных стаканчиках, после чего сливают надосадочную жидкость. Бактериальные клетки встряхивают, добавляют стерильную дистил­лированную воду и вновь центрифугируют. Такую операцию повторя­ют дважды.

Отмытые клетки ресуспендируют в 1%-ном буферном растворе pH 6,0 (Na₂HP0₄ и КН₂РО₄) N-нитрозоэтилмочевины (НЭМ). Сус­пензию клеток готовят так, чтобы их содержание в 1 мл было равно 500-1000 клеток. Среды, режимы термостатирования и центрифуги­рования приведены в табл.4.

Таблица 4