Тема № 2 Приготовление прижизненных препаратов

Основное требование при работе с микроорганизмами – соблюдение асептики, т.е. таких условий, при которых в пробирку с изучаемой культурой не могли бы попасть другие микроорганизмы (например, из воздуха, с предметов, используемых в процессе выполнения работы). Кроме того, нужно иметь в виду, что среди микроорганизмов многие условно патогенны, что требует повышенного внимания и аккуратности в работе.

Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические петли, иглы, шпатели. Бактериологические петли изготовляют из проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях или впаивают в стеклянные палочки. Толщина игл и петель не должна превышать 0,5 мм (рис. 10).

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Пробирки со средами и культурами при работе следует устанавливать на штативах.

Бактериологическая петля прокаливается, пробки и край пробирки фламбируются. Если в работе используют суспензии микроорганизмов или культуры, выращенные на жидких средах, их берут предварительно простерилизованной пипеткой, у которой широкий конец закрыт ватой. Такие пипетки стерилизуют и хранят завернутыми в бумагу (каждая отдельно).

Изучают микроорганизмы, изготавливая препараты из них. Для этого применяют чистые, хорошо обезжиренные стекла, на поверхности которых капля воды свободно растекается.

При микроскопировании можно использовать препараты из культур, выращенных в жидких средах. Небольшое количество бактериальной массы из культуры, выращенной на плотных средах, можно суспендировать (развести) с помощью стерильной бактериологической петли или иглы в капле стерильной жидкой среды или физиологического раствора. В зависимости от цели исследования готовят прижизненные или фиксированные препараты.

Определение подвижности у микробов

В практике бактериологических лабораторий часто исследуют живых бактерий с целью определения подвижности, т.к. это важный видовой признак, имеющий диагностическое значение. Поэтому все микробы делят на две группы: подвижные и неподвижные.

Например, возбудитель сибирской язвы и антракоиды (сибиреязвенно-подобные бациллы) сходны по ряду морфологических и культуральных признаков, однако сибиреязвенная бацилла неподвижна, а антракоиды – активно подвижны.

Движение микробов происходит при помощи: а) жгутиков, которые представляют собой тончайшие извитые нити, отходящие от тела бактерий; б) змеевидных движений тела; в) реактивного движения по поверхносям при одновременном резком выделении слизи; г)аэросом – специальных органоидов, заполненных газом, из глубины водоёма к поверхности.

Для прижизненных наблюдений наиболее часто готовят препараты

«раздавленная капля» или «висячая капля».

Метод «раздавленной капли»:

1. На предметное стекло носят каплю физиологического раствора.

2. Бактериологической петлей вносят культуру микроорганизма с плотной питательной среды (при исследовании микробной культуры, полученной с жидкой питательной среды, физиологический раствор наносить не надо).

3. Каплю накрывают покровным стеклом.

Метод «висячей капли»:

1. На края предметного стекла с лункой наносят тонкий слой вазелина.

2. В центр покровного стекла помещают каплю микробной культуры. Капля должна быть круглая, выпуклая, с ровными краями.

3. Переворачивают предметное стекло и накрывают им каплю на покровном стекле так, чтобы она оказалась напротив центра лунки (Рис.3).

В таких условиях капля дольше не высыхает и легче соблюдать технику безопасности.

В обоих случаях микроскопию проводят в затемненном поле: конденсор опускают, диафрагму суживают. Объектив х40 или х90 (под иммерсией).

На светло-сером фоне микробы темно-серые.

Рис. 3. Метод «висячей капли».