1. Отработать методику изготовления мазков.

2. Контрольные вопросы:

1. Число и расположение жгутиков у разных бактерий

2. Механизмы движения. Таксис.

Тема№3 Изучение микроорганизмов в окрашенных, фиксированных мазках

Мазки - это предназначенные для бактериоскопии, изготовленные на предметных стёклах препараты, в которых клетки тканей и микроорганизмы расположены в один слой.

Этапы приготовления мазков:

1 этап - нанесение исследуемой культуры или материала, на предметное стекло;

2 этап - высушивание;

3 этап - фиксация;

4 этап - окрашивание.

1-й этап. Нанесение материала:

- из органов:

поверхность органа прижигают раскаленным шпателем и делают разрез стерильным скальпелем. С поверхности разреза берут материал пастеровской пипеткой или бактериологической петлей и тонким слоем наносят на предметное стекло.

Из ткани органов делают мазки-отпечатки. С этой целью стерильными ножницами (скальпелем) вырезают небольшой кусочек, берут его пинцетом и легким прикосновением к чистому и обезжиренному предметному стеклу делают несколько отпечатков.

- из гноя или мокроты:

пастеровской пипеткой или бактериологической петлей исследуемый материал наносят на предметное стекло, накрывают другим предметным стеклом, раздавливают и разводят в разные стороны, получая при этом два мазка.

- из крови:

на предметное стекло, ближе к одному из краев, наносят каплю крови. Шлифованным предметным стеклом под углом в 45^о делают скользящее движение, равномерно распределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла.

- из бактериальной культуры:

для приготовления мазков из культуры, выращенной на плотной питательной среде, на обезжиренное предметное стекло бактериологической петлей, предварительно прокаленной докрасна (профламбированной), наносят небольшую каплю стерильного физ.раствора. Затем петлю фламбируют повторно, внося ее в пламя горелки в вертикальном положении, после чего из пробирки с культурой вынимают пробку мизинцем правой руки, обжигают край пробирки и вносят в нее бактериологическую петлю. Прежде чем взять небольшое количество культуры, петлю охлаждают, касаясь стенок пробирки. Петлю с культурой осторожно вынимают, еще раз обжигают края пробирки и закрывают ее пробкой, а культуру вносят в приготовленную ранее каплю физраствора, тщательно размешивают, равномерно распределяя по стеклу в виде небольшого круга или овала (1,5-2 см в диаметре). После окончания приготовления мазка петлю вновь прокаливают.

Для приготовления мазка из бульонной культуры бактериологической петлей наносят 1-2 капли исследуемого материала на поверхность предметного стекла и равномерно распределяют тонким слоем.

2-й этап.

Приготовленные мазки высушивают на воздухе. Для ускорения высушивания стекло с мазком, обращенным вверх, держат в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, не допуская его перегревания.

3-й этап.

Мазки фиксируют.

Методы фиксации мазков

Физический способ используют для фиксации мазков, приготовленных из бульонных или агаровых культур. С обратной стороны мазка карандашом по стеклу (стеклографом) или маркером обводят его границы и записывают шифр. Затем стекло с мазком, обращенным вверх, медленно проводят 3-4 раза над верхней частью пламени горелки, нагревая стекло не выше 60^оС. После этого материал плотно прикрепляется к стеклу и не смывается при дальнейшей обработке.

Химический способ используют для фиксации мазков из крови, мазков-отпечатков, и в некоторых случаях, мазков из патматериала, т.к. высокие температуры разрушают клеточные элементы. Для этих целей мазки погружают в фиксирующие жидкости:

- метиловый спирт – 5 минут;

- ацетон - 5 минут;

- этиловый спирт -10 минут;

- жидкость Никифорова (смесь спирта и эфира в равных объемах) – 15-20 минут.

Цель фиксации:

- закрепить микроорганизмы на стекле;

- убить и тем самым обезвредить микробные клетки;

- коагулировать белки микробных клеток, после чего они лучше воспринимают окраску.

4-й этап.

Окрашивание мазков. При необходимости для окрашивания микроорганизмов используют различные методы.