4. Особенности иммунитета при туберкулезе.

Механизмы саногенеза.

• Человек обладает естественной резистентностью.

• Отмечено существование генетической предрасположенности к заболеванию туберкулезом.

• У больных и переболевших обнаруживаются АТ к различным АГ туберкулезной палочки, но они не играют роль в формировании приобретенного иммунитета.

• Сенсибилизация организма — гиперчувствительность замедленного типа — она опосредуется системой Т-лимфоцитов (с помощью своих рецепторов и при участии белков HLA класса I распознают инфицированные клетки —>атакуют их и разрушают.

• Специфические антимикробные АТ —> связываются с микробными АГ —> образуют циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) —> способствуют удалению АГ из организма.

• АТ к корд-фактору (и др) взаимодействуют с микробными клетками => оказывают токсическое действие на микобактерии.

• АТ к полисахаридным АГ — усиливают фагоцитоз, активируют систему комплемента и т. д.

• Появление гиперчувствительности замедленного действия —> формируется приобретенный постинфекционный (и поствакцинальный) иммунитет.

5. Методы микробиологической диагностики туберкулеза.

Материал для исследования в зависимости от клинической формы заболевания: мокрота, моча, спинномозговая жидкость, испражнения, гной, экссудат, промывные воды желудка и бронхов, которые собирают в стерильную посуду.

Микроскопический этап — наиболее распространенный.

1. Мазки для окрашивания приготовляют, растирая извлеченные гнойные комочки между двумя стеклами => Получают два препарата-близнеца.

2. Промывные воды бронха, желудка, мочу, пунктаты и другие материалы центрифугируют, осадок помещают на предметные стекла —> Мазки высушивают, фиксируют на огне и окрашивают.

3. Окрашенные по Цилю-Нильсену мазки микроскопируют с иммерсионной системой 10 мин.

—> Микобактерии обнаруживаются в виде тонких, прямых или слегка изогнутых красных палочек, часто кучками или небольшими скоплениями.

*в палочках можно видеть одно или несколько темных зерен.

4. Если палочек мало, то применяют методы «обогащения» или «накопления» микобактерий:

• Метод флотации: микобактерии извлекают из водной суспензии при помощи углеводородов или других жидкостей с меньшей, чем у воды, относительной плотностью.

5. Используется также люминесцентная микроскопия —> Препарат окрашивают аурамином, => микобактерии светятся ярким золотисто-зеленым светом.

6. Результаты — ориентировочные, т. к. при микроскопии микобактерии мб не обнаружены + не дифференцируются патогенные микробы от многочисленных сапрофитных и атипичных.

Бактериологический этап — имеет большие преимущества перед бактериоскопическим:

• Позволяет выделять культуру при наличии 20-100 микобактерий в исследуемом материале.

• Выросшие культуры могут быть подробно изучены и идентифицированы.

• Может быть определена чувствительность выделенных микобактерий к этиотропным химиотерапевтическим препаратам.

1. Исследуемый материал обрабатывают кислотой или щелочью (для освобождения от сопутствующей флоры) —> центрифугируют —> осадок нейтрализуют 8% соляной кислотой —> засевают на специальные среды.

2. Первичное выделение микобактерий из материала производят на элективно-селективных яичных средах:

• среда Левенштейна-Йенсена — рост получают на 8-15-25-й день после посева положительного материала.

• среда Финна-II — используется глутамат натрия — рост микобактерий появляется иногда даже несколько раньше, чем на среде Левенштейна-Йенсена;

3. Выделяют чистую культуру и идентифицируют ее по морфологическим, биохимическим свойствам и вирулентности для лабораторных животных.

4. Методом серийных разведений определяют чувствительность микобактерий к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам.

* Т.к. микобактерии растут медленно, есть методы ускоренного выращивания:

• метод микрокультур Прайса — На нескольких предметных стеклах делают толстые мазки —> высушивают —> обрабатывают 5 мин 6% серной кислотой и нейтрализуют —> опускают во флаконы с гемолизированной цитратной кровью в разведении 1:4-1:8 и ставят в термостат —> Через 7-14 дней извлекают стекла—> фиксируют препарат, —> окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют => Вирулентные штаммы в виде жгутов или «кос», которые образуются под влиянием корд-фактора микробов.

Биологическая проба.

1. Заражение лаб. животных и изучение реакции на органах и тканях на внедрение микобактерий — основной критерий вирулентности и 1 из дифференциальных тестов на определение видовой принадлежности микобактерий.

* В последнем случае используют различия в патогенности для белых мышей, кроликов, морских свинок и цыплят.

2. Перед заражением морским свинкам массой тела 200-250 г проводят реакцию Манту —> вводят 0,02 мл альттуберкулина Коха внутрикожно в наружную поверхность бедра и столько же бульона в другую лапку => Через 48 ч при отрицательной реакции морскую свинку можно брать в опыт.

4. Заражение производят подкожно, обычно в паховую область —> Через 2-3 нед зараженную морскую свинку взвешивают, определяют наличие и размеры регионарных (паховых) ЛУ и повторно ставят реакцию Манту —> Повторяют через 6 нед и далее.

5. При отрицательных реакциях животное забивают через 4 мес и исследуют печень, селезенку, легкие, ЛУ гистологически и бактериологически.

6. О вирулентности штамма судят по количеству специфических изменений в органах, продолжительности жизни животного, снижению массы тела и т.п.

* Можно применить интратестикулярное заражение морских свинок => удается чаще выявить туберкулезные микобактерии, даже если они изониазидоустойчивые и слабовирулентные.

Серологический этап.

Реакции на выявление АГ микробактерий или АТ к ним — не обладают необходимой специфичностью или дают ложноположительный результат на АТ и АГ других микобактрий.