Лабораторна робота № 3. Приготування мазка і фіксація мазку-препарату. Прості методи фарбування мікроорганізмів

1.Теоретична частина

Забір досліджуваного матеріалу

Бактеріологічну петлю беруть правою рукою, пропалюють в полум'ї спиртівки. Петлю необхіднотримати як ложку.

1. З рідких культур краплю матеріалу нанести на предметне скло за допомогою бактеріальної петлі і рівномірно розподілити по центру скла. Шар препарату повинен бути тонким і мати круглу форму (d= 1-2 см²).

2. З культури мікроорганізмів на твердому середовищі за допомогою петлі зробити забір мікробної маси і розмішати з краплею води на предметному склі. Шар препарату повинен бути тонким і мати круглу форму (d=1-2 см²).

3. Залишки культури на петлі спалити в полум'ї спиртівки.

4. Мазок висушити, тримаючи препарат мазком вгору високо (20-25 см) над полум'ям спиртівки або на повітрі при кімнатній температурі.

Фіксаця мазка

Після повного висихання мазки фіксують, чим досягається умертвіння мікробів і міцне прикріплення їх до скла. Фіксація покращує фарбування мікробів. Найпростіший спосіб - фіксація жаром полум'я спиртівки.

1. Великим і вказівним пальцем скло з препаратом взяти за краймазком вгору.

2. Опустити скло в полум'я на 2 секунди, роздавлюючи верхню частину полум'я. Повторити фіксацію ще двічі з тим, щоб загальний час фіксації склал 6 секунд

3. Перевірка фіксації: при дотику скла відразу після фіксації до тильної сторони кисті має відчуватися легке печіння.

Важливо: фіксація повинна бути виконана правильно, забарвлення буде невірне (перетримали в полум'я) або барвник змиється разом з мікроорганізмами (погано зафіксували).

Прості методи фарбування

Способи фарбування препаратів діляться на дві групи: прості (орієнтовні) і складні (диференційні). При простих методах фарбування використовують один барвник.Таке забарвлення дозволяє вивчити форму і розміри мікроорганізмів. Найбільш поширені барвники: метиленовий синій, фуксин Циля (карболової фуксин) та ін

1. На фіксований мазок нанести краплю барвника. Витримати час: для метиленового синього - 5 хвилин, для фуксину - 3 хвилини.

2.Злити надлишок барвника, підсушити мазок шматочком фільтрувального паперу (або підсушити високо над полум'ям спиртівки).

. Мікроскопіровать за допомогою імерсійноїсистеми.

Мікроскопічна картина: метиленовий синій забарвлює всі клітини в синій колір, фуксин - у рожево-червоний колір.

2. Експериментальна частина

Матеріал та обладнання: спиртівки, бактеріологічні петлі, культура м/о, етиловий спирт, світловий мікроскоп, предметні скла, розчин фуксину, розчин метиленового синього, імерсійна олія.

2.1. Приготувати фіксований мазок-препарат м/о. Забарвити розчином фуксину (2-3 краплі). Мікроскопувати. Нарисувати мікроскопічну картину.

2.2. Приготувати фіксований мазок-препарат м/о. Забарвити розчином метиленового синього (2-3 краплі). Мікроскопувати. Нарисувати мікроскопічну картину.

3.Контрольні питання

3.1.Правила фіксації препарату.

3.2.Прості методи фарбування фіксованого мазка.

3.3.Загальні правила фарбування мазків.

3.4.Біохімічні аспекти забарвлення мікроорганізмів.