Лабораторна робота № 5. Культивування бактерій. Штучні поживні середовища.

0. Теоретична частина

Поживні середовища (ПС) служать для виділення чистих культур мікробів з досліджуваного матеріалу та вивчення їх властивостей. До складу середовищ входять неорганічні і органічні компоненти і біоактивні речовини. Неорганічні компоненти поділяються на макроелементи (N, O, C, P, S, Na, Mg, Fe, Н) і мікроелементи (Co, I, Mn, B, Cu). Все макро- та мікроелементи повинні знаходитися в ПС в легкозасвоюваних для даного мікрорганізму з'єднаннях. Органічні компоненти ПС можуть мати рослинне та тваринне походження і є для м/о джерелом азоту. За характером засвоєння азоту м/о поділяються наступним чином: одні з них отримують його з простих амонійних сполук, інші потребують амінокислоти. Треті розщеплюють високомолекулярні речовини - пептони, що представляють собою продукти часткового ферментативного розщеплення білків. Облігатні паразити розмножуються тільки в присутності нативного білка.Ростові фактори представлені групою вітамінів: вітамін А, вітаміни групи В, аскорбінова кислота, нікотинова і парабензойна кислоти.

ПС можуть містити буфер-компоненти для підтримки рН,тому що ряд мікробів виробляютькислоти тазсувають рН в кислий бік, що може зупинити їх зростання.

ПС не можуть бути універсальними для всіх видів м/о, тому що вони володіють індивідуальними особливостями харчування і проявляють свої характерні фізіологічні властивості в певних умовах обміну. Тому на практиці користуються різноманітнимиПС стосовно того чи іншого видумікроорганізму.

Вимоги, що пред'являються до готових ПС

• Задовольняти потреби обміну речовин мікробної клітини.

• Легко засвоюватися бактеріями.

• Містить необхідні солі.

• Бути стерильними

• Мати оптимальний рН.

• Мати достатню вологість.

• Утримувати фактори росту.

За складом ПС підрозділяють на природні, штучні і синтетичні.

Природні ПС складаються з натуральних продуктів тваринного або рослинного походження (молоко, овочі, тваринні тканини, жовч).

Синтетичні ПС у своєму складі мають хімічно чисті сполуки, взяті в точних концентраціях (амінокислоти, мінеральні солі, вуглеводи, вітаміни).

По консистенції ПС поділяються на рідкі, напіврідкі, тверді, сипучі і сухі. Рідкі ПС застосовують для вивчення фізіолого-біохімічних особливостей м/о. Ріст бактерій у рідких ПС зазначається візуально по появі каламутності. Найбільш поширена рідка ПС - м'ясо-пептони бульйон (МПБ).

Тверді ПС використовуються для виділення і вивчення властивостей м/о, тому що на них можна отримати ізольоване зростання окремих клітин. Тверді ПС (м'ясо-пептонний агар (МПА)) готують з рідких за допомогою додавання до них 1-2% агар-агару. Агар-агар - складний полісахарид, який утворює гель з точкою плавлення 96-100 ˚ С і температурою застигання 40 ˚ С. Сухі ПС виготовляються у вигляді сухих гігроскопічних порошків,які добре розчиняються у воді при кімнатній температурі.

2.Ескпериментальна частина

Матеріал та обладнання: спиртівки, бактеріологічні петлі, штативи, стерильні чашки Петрі з МПА, термостат, етиловий спирт, світловий мікроскоп, предметні скла, набір барвників для фарбування за Грамом, імерсійна олія, досліджувальна культура м/о.

2.1. Приготувати фіксований мазок-препарат культури м/о. Забарвити за методом Граму. Мікроскопувати в імерсійної системі та ідентифікувати культури. Нарисувати.

2.2. Зробити посів на МПА ідентифіковану рідку культуру м/о. Стерильну бактеріальну петлю внести в попередньо приготовлену рідку культуру м/о. Зробити посів на поверхню МПА в чашці Петрі методом «штриху», - «зигзагу». Закрити кришкою, завернути в папір та підписати (прізвища студентів, група дата, вид м/о). Помістити у термостат на 24 год. при температурі 37⁰ С.

3.Контрольні питання

3.1.Фізіологія мікроорганізмів.

3.2. Харчування бактерій. Культивування бактерій.

3.3. Штучні поживні середовища.

3.4. Поняття про ПС. Класифікації ПС.

3.5. Вимоги до готових ПС.

3.6. Методи виконання посівів на тверді та рідкі ПС.