Лабораторна робота № 6,7

Тема: Визначення кількості мікроорганізмів у повітрі. Виявлення наявності бактерій групи кишкової палички в санітарно – бактеріологічних змивах з рук, стін, обладнання.

Мета: навчити студентів визначати кількість мікроорганізмів у повітрі і виявлять наявність бактерій кишкової групи в змивах з рук, стін і обладнання.

Обладнання: лабораторний посуд, поживні середовища (МПА, Ендо, Кода), термостат, чашки Петрі, трафарет 10х10, ватні тампони на металевих стержнях, пробірки з фізіологічним розчином.

Завдання:

1. Визначення кількості бактерій у повітрі.

2. Визначити наявність бактерій групи кишкової палички в санітарно - бактеріологічних змивах з рук, стін, обладнання.

3. Провести облік результатів і дати санітарну оцінку досліджувальним об’єктам.

Методичні вказівки

Додержуючись правил асептики, в стерильні ч. Петрі розливають по 10-15 мл. розплавленого і охолодженого до 45⁰С МПА. Проби повітря беруть за допомогою попрата Кротова або методом осаджування мікроорганізмів із повітря по Коху. Чашки з посівами мікроорганізмів ставлять в термостат кришкою вниз і витримують при температурі 37⁰С 48 годин. Загальну кількість колоній підраховують на слідую чому занятті.

Дослідження повітря методом осаджування м/о по Коху

Чашки Петрі з МПА залишають відкритими на протязі 5 хв. на висоті 0,5 – 1,5 м. від підлоги (т.б. там де знаходиться сировина або дихальні шляхи працюючих). Чашки ставлять на листки паперу, в яких вони стерилізувались; кришки ставлять на бортик чашки. Потім чашки закривають і ставлять в термостат. Потім підраховують кількість колоній і розраховують по формулі, що запропонував Омелянським, в 1м³ повітря.

Встановлено, що на площі 100см² МПА, за 5 хвилин осідає стільки мікроорганізмів, скільки їх є в 10 л. повітря. Тоді кількість мікроорганізмів в 1 м³ буде

Х = , де :

Х – кількість мікроорганізмів в 1 м³ повітря;

А- загальна кількість колоній, що виросли на МП, шт.;

В – площа чашки, см²

Т- час, хв..

100 – число для перерахунку площі чашки на 100см²;

100 – число для перерахунку 10 л. повітря в 1 м³.

Санітарна оцінка повітря в цеху вважається задовільною, якщо кількість бактерій і в 1 м³ не більше 1000.

Визначення наявності бактерій групи кишкової палички в змивах із рук, стін, обладнання.

Змиви беруть до початку роботи за допомогою ватного тампона і трафарету 10х10. ватний тампон готують із куска вати, який намотують на металеву проволоку і опускають в пробірку з 2 мл фізіологічного розчину або стерильну воду. Пробірки закривають ватною пробкою, тампон знаходиться вище рівня рідини.

Пробірки з тампонами і трафарети стерилізують при температурі 120⁰С на протязі 20 хв.

На об’єкт накладають трафарет і ретельно протирають тампоном змоченим в фізіологічному розчині, в двох взаємно перпендикулярних площинах. Потім тампон занурюють в пробірку відмивають і віджимають.

Для перевірки чистоти працюючого, змоченим тампоном протирають долоні, пальці, між пальцеві і піднігтьові участки з обох рук і занурюють в пробірку із якої він був вийнятий.

В журналі записують дату взяття проби, її порядковий номер і найменування досліджувального об’єкту.

В лабораторії проби доливають фізіологічним розчином ( 1:10), а при значному забрудненні об’єкту ( 1: 100). Потім пробірку ретельно крутять із розведень роблять посіви з метою :

1. визначення загальної кількості мікроорганізмів. Для цього 1 мл. розведення вносять на дно стерильної ч. Петрі і заливають МПА 10-15 мл. ;

в) виявлення бактерій групи кишкової палички. Для цього на середовище Ендо вносять 0,1 мл. змиву розведенням 1:10 і шпателем рівномірно розподіляють по всій поверхні. Для прискорення виявлення БГКП використовують середовище Кода. Для цього в пробірку з 5 мл середовища добавляють 1 мл. змиву.

На другий день проводять облік результатів.

Приклад: на МПА виросло 200 колоній – це число множать на ступінь розведення 200 х 10 = 2000. число 20 – це кількість м/о в 1см ² поверхні досліджувального об’єкта. На Ендо кишкова паличка росте у вигляді темно – червоних колоній з металевим блиском. Середовище Кода, при наявності БГКП, із зеленого кольору стає жовтим.