Вопрос 12

Простые (один краситель), можем судить Сложные (несколько, последовательно

о форме, взаиморасположению клетки наносимых красителей и дополнительные

способы обработки) судят об ультраструктурных компонентах клетки

Техника окраски спор по методу Ожешко.

- нанести несколько капель 0,5% раствора соляной кислоты на нефиксированный мазок и нагреть до появления паров (2-3 мин);

- слить кислоту, промыть водой, высушить;

- зафиксировать в пламени;

- окрасить по методу Циля-Нельсена (при этом споры окрашиваются красный цвет, а вегетативные формы – в синий).

Техника окраски по методу Циля-Нельсена.

- нанести несколько капель карболового фуксина на фиксированный мазок, покрытый фильтровальной бумагой и подогреть до появления паров (3-5 мин);

- бумагу снять, мазок охладить и обесцветить 5% раствором серной кислоты и 3% раствором солянокислого спирта (2-4 с);

- тщательно промыть водой;

- окрасить синькой Леффлера (3-5 мин);

- промыть водой и высушить споры.

Кислотоустойчивые бактерии, в результате такой окраски становятся рубиново-красными, а все остальные – синими.

2. Приготовить мазок по методу Бурри-Гинса, промикроскопировать, зарисовать.

Многие виды микроорганизмов обладают способностью откладывать на поверхности своего тела мощный слизистый слой вокруг клеточной стенки, его называют капсулой. Капсулы имеют консистенцию геля, поэтому при микроскопии живых бактерий они видны очень плохо. Для их обнаружения применяют негативную окраску. При негативных способах краситель заполняет пространство вокруг бактерий, в результате чего они выглядят светлыми частицами на темном фоне.

Техника обнаружения капсул по методу Бурри-Гинса.

- приготовить тушевой препарат по Бурри (смешать каплю взвеси микробов с каплей туши и при помощи стекла со шлифованным краем приготовить мазок, как мазок из крови), затем высушить и зафиксировать (налить на поверхность мазка 96% спирт и поджечь);

- окрасить препарат водным фуксином (1-2 мин);

- промыть препарат водой, высушить на воздухе и микроскопировать.

Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы выявляются на черно-розовом фоне.

Исследование микроорганизмов в живом состоянии.

В живом состоянии микроорганизмы исследуют с целью выявления их формы, подвижности и т.д.

3. Изучить нативные и окрашенные препараты, используя методы «раздавленной» или «висячей» капли.

Прижизненная (витальная) окраска.

Взвесь микроорганизмов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрального красного. Затем готовят препарат «раздавленная» или «висячая» капля и микроскопируют его.

Техника метода «раздавленной капли».

- на середину предметного стекла нанести петлей каплю исследуемого материала, накрыть ее покровным стеклом;

- рассмотреть в микроскопе с темным полем зрения, с объективом х40.

Техника метода «висячей капли».

- каплю исследуемого материала нанести на середину покровного стекла;

- быстро повернуть его каплей вниз и наложить на предметное стекло с углублением («лункой») в середине, причем капля должна свисать в углубление, не соприкасаясь с дном и краями;

- промикроскопировать

Вопрос 13 Бактериальная (прокариотическая) клетка (А) окружена клеточной стенкой (КС). Цитоплазма обильно насыщена рибосомами. Молекула ДНК обычно расположена в центре клетки. Цитоплазма эукариотической клетки (Б) окружена цитоплазматической мембраной (ЦМП), включает митохондрии (М), вакуоли (В), шероховатую эндоплазматическую сеть с рибосомами (ШЭС), гладкую эндоплазматическую сеть (ГЭС), запасные гранулы (ЗГ) и ядро (Я).