- •Лекция №22 Тема: «Окраска бактерий и гистохимические методы исследований»
- •Патогенетическая роль хеликобактера в развитии гастритов, язв желудка и двенадцатиперстной кишки.
- •Морфологические свойства
- •Эпидемиология хеликобактерной инфекции.
- •Характеристика заболевания
- •Роль гистологических исследований в диагностике хеликобактерной инфекции.
- •Методика окрашивания гастробиопсий азуром на Хеликобактер пилори
- •Понятие об амилоидозе внутренних органов, макроскопическая характеристика пораженных органов
- •Микроскопическая характеристика амилоидоза
- •Методика окрашивания на амилоид красным конго
- •Гистологическая диагностика амилоидоза
- •Характеристика гистохимических методов
- •Общие принципы, лежащие в основе гистохимических реакций
- •Примеры гистохимических реакций
- •Гитохимия ферментов
- •Выявление гидролаз
- •Выявление окислительно-восстановительных ферментов
- •Выявление полисахаридов (кислых и нейтральных)
- •Методика проведения реакции Шифф-йодная кислота (Шик-реакция)
- •Рабочие растворы
- •Методика окрашивания
Эпидемиология хеликобактерной инфекции.
В эпидемиологии хеликобактерной инфекции имеет значение возраст, географическое, социально-экономическое положение и профессия.
Инфицирование HP обычно осуществляется в детстве и при отсутствии лечения бактерия развивается более чем у половины людей, инфицированных в возрасте до 20 лет. Частота инфекции HP в развивающихся странах достигает почти 100% среди взрослого населения. Особенно широко она распространена в Африке. В развитых странах инфицированность меньше. В странах Восточной Европы HP встречается у 40-70% населения. Чем ниже социально – экономический статус населения, тем выше риск инфицирования. Возможно, это связано с чистой питьевой воды и другими гигиеническими условиями, т.к. HP инфекция передается per OS.
Заразиться хеликобактером очень просто, через поцелуй, посуду, предмета быта. Если у кого–то из близких язва, то всем членам его семьи следует пройти обследование на наличие микроба. Необходимо соблюдать простые правила гигиены. Мыть посуду с дезинфицирующим раствором, выделить заболевшему родственнику отдельную посуду, приборы, полотенце, ограничить личные контакты, пока он не вылечиться.
Характеристика заболевания
После попадания в желудок Хеликобактер пилори, быстро двигаясь при помощи жгутиков, преодолевают защитный слой слизи и прикрепляются к эпителиальным клеткам слизистой оболочки желудка, к которым обладают свойством адгезии (способностью к прикреплению). Закрепившись на поверхности слизистой, бактерии начинают вырабатывать фермент уреазу, расщепляющую мочевину с образованием аммиака. Аммиак нейтрализует соляную кислоту желудка и обеспечивает бактерии поддержание компенсаторное для неё HP (около 6-7). По механизму отрицательной обратной связи это вызывает компенсаторное повышение секреции соляной кислоты и пепсина, оказывающих агрессивное воздействие на слизистую оболочку.
Секретируемые бактериями во внешнюю среду литические ферменты – муциназа, протеаза, липаза – вызывают растворение защитной слизи желудка, в результате чего соляная кислота и пепсин получают непосредственный доступ к оголенной слизистой желудка и начинают её разъедать, вызывая химический ожог, воспаление и изъязвление слизистой оболочки.
Кроме того, липополисахариды наружной оболочки Хеликобактер пилори вызывают иммунный ответ организма хозяина и развитие воспаления слизистой. Привлечённые воспалением лейкоциты вырабатывают различные медиаторы, воспаления, что приводит к прогрессированию воспаления и ещё большему изъязвлению слизистой.
Продукция хеликобактером различных экзотоксинов вызывает вакуолизацию, повреждение и гибель клеток слизистой желудка и в конечном итоге повышение вероятности рака желудка.
Роль гистологических исследований в диагностике хеликобактерной инфекции.
Существует большое количество различных методов диагностики Хеликобактер пилори, но уникального метода, так называемого «золотого стандарта», для диагностики хеликобактериоза пока не существует. Всё многообразие методов диагностики данного микроорганизма можно разделить на инвазивные (требуют проведения фиброгастродуоденоскопии) и неинвазивные (не требуют проведения фиброгастродуоденоскопии), прямые (определение собственно Хеликобактер пилори) и косвенные (определение продуктов жизнедеятельности Хеликобактер пилори). Каждый метод исследования Хеликобактер пилори имеет свои преимущества и недостатки. Результаты различных методов не всегда идентичны, следовательно, чтобы избежать получения ложных результатов, для более точной диагностики наличия инфекции необходимо использовать как минимум два метода и результат считать положительным или отрицательным при совпадении показателей обоих методов исследования.
К наиболее достоверным методом идентификации микроорганизма традиционно относят бактериологический, гистологический и молекулярно-генетический инвазивные методы исследования.
Бактериологический метод основан на культивировании микроорганизма на специальных питательных средах и в основном используется в научных целях. Молекулярно – генетический метод является сложным, но высокочувствительным методом и основан на выделении и изучении ДНК микроорганизма.
Гистологический метод — наиболее объективный метод диагностики Н. pylori, ведь используя именно этот метод, Уоррен и Маршал описали наличие спиралевидной бактерии в слизистой оболочке желудка больных активным хроническим гастритом. Он позволяет обнаружить микроорганизм в гистологических препаратах слизистой оболочки желудка, определить степень обсемененности и расположение микробных тел (поверхностное, внутриэпителиальное), форму микроорганизма (вегетативную или кокковую), а также пути взаимодействия Н. pylori с тканями организма человека и наличие морфологических изменений слизистой оболочки желудка, связанных с инвазией микроба (признаки воспаления, атрофия, метаплазия, дисплазия). В основе метода лежит микроскопическое морфологическое и морфометрическое исследование парафиновых срезов, окрашенных различными способами: гематоксилин-эозином, азуром, по Романовскому-Гимзе, генциан-виолетом, по Генту, толуидиновым синим, а также использование иммуногистохимического метода. К преимуществам этого метода диагностики относятся удобство хранения и транспортировки образцов, возможность проведения ретроспективного анализа, проведения оценки взаимосвязи между степенью обсемененности Н. pylori и состоянием слизистой оболочки желудка. Недостатками метода являются длительное приготовление парафиновых срезов, некоторая субъективность в определении степени изменения слизистой оболочки желудка, невозможность отдифференцировать виды Helicobacter и тем более их генотип, возможность получения ложнонегативных результатов в связи с неправильным забором гастробиопсийного материала (биопсия только из антрального отдела желудка, скудные биоптаты, не содержащие эпителия и слизи), а также наличия участков кишечной метаплазии, погрешностей окраски. Наряду с собственно гистологическим методом, может использоваться цитологическое исследование мазков со слизистой оболочки желудка, что позволяет существенно уменьшить время получения результатов анализа. Существенное повышение результатов диагностики инфекции достигается при использовании иммуногистохимического метода с моноклональными антителами против Н. pylori. К сожалению, широкое использование данного метода ограничено из-за его высокой стоимости и технической сложности.
