9. Общие принципы, лежащие в основе гистохимических реакций

В основе большинства гистохимических реакций лежат общие принципы.

1. Определенные химические группировки окрашиваются тем или иным красителем. Например, фосфатные группы РНК образуют с основными красителями (пиронин, толуидиновый синий и др.) солеобразные окрашенные соединения.

2. Краситель растворяется в определенном субстрате, входящем в состав клеточных структур. Например, окраска жировых включений в клетке основана на растворении судана в жировой капле.

3. Некоторые химические компоненты клеток, такие, как ДНК, полисахариды, неспособны реагировать с красителя­ми. В таких случаях прибегают к превращению их химиче­ских группировок в реакционно-активное состояние (гидро­лиз ДНК хлористоводородной кислотой, окисление полиса­харидов йодной кислотой). При этом освобождаются или создаются вновь химические группировки, которые спо­собны реагировать с соответствующими реактивами, в ре­зультате чего образуется окрашенный продукт реакции.

4. При выявлении локализации некоторых компонентов клетки прибегают к многоступенчатым промежуточным реакциям и переводу неокрашенного продукта реакции в окрашенный. Например, так поступают при гистохимиче­ском окрашивании ферментов.

10. Примеры гистохимических реакций

Выявление нуклеиновых кислот

Рибонуклеиновая кислота (РНК) осуществляет синтез белков в клетке, а дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК)-хранение и передачу наследственной информации. Первая содержится в цитоплазме и ядрышках, вторая – в хроматине ядер. Столь важная роль нуклеиновых кислот является причиной большого интереса к изучению их содержания и распространения в органах и тканях организма.

Выявление ДНК по методу Фельгена.

Сущность метода заключается в том, что в слабокислой среде молекула ДНК расщепляется, а продукты гидролиза (альдегиды) восстанавливают окраску основного фуксина, предварительно обесцвеченного сернистой кислотой в реактиве Шиффа, образуя пурпурно окрашенный комплекс. Локализация продукта реакции указывает местонахождение ДНК, а интенсивность окраски – её концентрацию.

Окрашивание жиров и липидов

Термин «липиды» - собирательный. Им обозначают все жироподобные вещества экстрагируемые растворителями (бензин, эфир, хлороформ). В основе окрашивания лежат чисто физические процессы. Суть их заключается в том, что вещества, красящие жиры, хорошо в них растворяются и поэтому легко переходят из раствора в липиды. В качестве красителей используют судан III, IV, судан чёрный

Выявление белков

Белки входят в состав большинства клеточных и тканевых структур с ними связаны пластические, энергетические, транспортные и ферментные процессы. Поэтому гистохимическое выявление белков имеет важное значение для характеристики изменений, происходящих в клетках и тканях как в норме, так и в патологии.

Выявление (сумарное) белков по методу Даниелли (в модификации М.Г. Шубина)

Сущность этого метода состоит в том что на препараты сначала воздействует трис-диазонием розанилина (основного фуксина), реагирующего со многими аминокислотными остатками белков. Для усиления окрашивания их обрабатывают Н – кислотой, которая соединяется с реактивными группами трис- диазония, связанного с белками. Интенсивность красно-фиолетого окрашивания зависит от концентрации белков в структуре.