5. Гистологическая диагностика амилоидоза

Достоверная диагностика амилоидоза требует выявления амилоида в биоптатах пораженных тканей после специального окрашивания, прежде всего почки, затем слизистой оболочки прямой кишки, реже ткани десны. При светооптическом исследовании с использованием традиционных окрасок амилоид выглядит как аморфное, эозинофильное, гиалиноподобное межклеточное вещество, в результате прогрессирующего накопления и давления которого развивается атрофия клеток органа. Для того чтобы отличить амилоид от других депозитов (коллаген, фибрин), используют ряд гистологических методов, например окраску конго красным, вследствие чего амилоид приобретает двойное лучепреломление.

Амилоидные отложения имеют довольно типичную локализацию: в стенках кровеносных и лимфатических капилляров и сосудов, в их внутренней и наружной оболочках; в строме органов по ходу ретикулярных и коллагеновых волокон; собственной оболочке железистых структур.

Амилоид может выпадать как диффузно (общий амилоидоз), так местно, на ограниченных участках (местный аммилоидоз).

При самом распространенном амилоидозе – почек, амилоид вначале откладывается между капиллярами клубочков, затем вдоль их базальных мембран. Постепенное распространение амилоидных отложений и вовлечение в процесс сосудистой стенки приводит к развитию основных проявлений амилоидоза почек - нарастающей протеинурии с возникновением почечной недостаточности, иногда артериальной гипертензии.

Амилоид может откладываться между канальцами почек, а отложение его в мозговом веществе приводит к нефрогенному несарному диабету, нарушению реабсорции воды в собирательных трубочках.

6. Микроскопическая характеристика амилоидоза

Амилоид представляет собой гликопротеид основным компонентом которого является фибриллярные (нитевидные) белки (F - компонент).

Фибриллы амилоида имеют диаметр 0,5 нм и длину 800 нм. Каждая фибрилла состоит из двух полипептидных цепей (филаментов) по 2,5 нм в диаметре. Фибриллярные белки амилоида синтезируются соединительнотканными клетками – амилобластами. В отличие от коллагена они богаты аминокислотой триптофаном, не содержат оксипролина и связаны с небольшим количеством нейтральных сахаров и сиаловой кислоты.

Фибриллярные белки амилоида входят в сложные соединения с белками и полисахоридами (глюкопротеидами) плазмы крови, которые являются вторым обязательным компонентом амилоида. Это так называемый плазменный компонент (Р - компонент), который одинаков при всех формах амилоидоза. Роль Р – компонента в амилоидогенезе неясна.

7. Методика окрашивания на амилоид красным конго

Для выявления амилоида существует целый ряд специальных методов, из которых наиболее распространенными являются: 1) окраска генциановым фиолетовым (генцианвиолет), 2) метиловым фиолетовым (метилвиолет) и 3) окраска красным конго (конгорот).

Окраска красным конго

Широко распространенный способ. Окраска хорошо удается как после спиртовой, так и формалиновой фиксации и на любых срезах. Парафиновые срезы предварительно должны быть освобождены от парафина. Окрашенные препараты можно заключать в бальзам, в котором они хорошо сохраняются.

Методика окраски.

1. Срезы из воды переносят в 1 % водный раствор красного конго (готовят на дистиллированной воде) на 1—2—3 минуты.

2. Промывают в водопроводной воде 1—2 минуты.

3. Дифференцируют (в чашечке или прямо на предметном стекле) 70— 80° спиртом 1/2 —2 минуты, а иногда и больше, до тех пор, пока препарат из ярко-красного станет бледно-розовым. При резком перекрашивании приходится дифференцировать до 10— 15 минут. Дифференцировку желательно вести под контролем микроскопа.

4. Промывают в водопроводной воде 1—2 минуты.

5. Подкрашивают срез каким-нибудь квасцовым гематоксилином (Бемера, Эрлиха, Караци) и снова промывают в воде 2— 3 минуты.

6. Обрабатывают 96° спиртом, просветляют в карбол-ксилоле, промывают ксилолом и заключают в бальзам.

Результат: амилоид окрашивается в красный цвет.

При перекрашивании в гематоксилине можно дифференцировать в 1 % соляной кислоте (водный раствор) и затем подсинивать в слабо подщелоченной нашатырным спиртом воде. После подсинивания срез, особенно замороженный, следует хорошо (5—10 минут) промыть в водопроводной воде, ибо от действия соляной кислоты он вначале изменяет свой цвет, принимая зеленоватый или коричневатый тон, который в промывной воде быстро исчезает, вновь сменяясь красным.

Очень хорошие результаты получаются, если срез вначале окрасить каким-либо квасцовым гематоксилином и уже после — красным конго.