Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам
Диффузионные методы.
Диффузионные методы
Методы разведения
диско-диффузионный
Е-тест
Серийное разведение в жидкой питательной среде
Разведение в агаре
1.
При определении чувствительности
диско-диффузионным методом
на поверхность агара в чашке Петри
наносят бактериальную суспензию
определенной плотности (обычно
эквивалентную стандарту мутности 0,5
по McFarland) и затем помещают диски,
содержащие определенное количество
антибиотика. Диффузия антибиотика в
агар приводит к формированию зоны
подавления роста микроорганизмов
вокруг дисков. После инкубации чашек
в термостате при температуре 35о-37оС
в течение ночи учитывают результат
путем измерения диаметра зоны вокруг
диска в миллиметрах (рис.
).
2. Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис.). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.
Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35о-37оС проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).
Минимальная подавляющая концентрация (МПК) - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий
Рис. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде.