- •Биохимия
- •Содержание
- •Введение
- •Техника безопасности в лаборатории биологической химии
- •Раздел 1 Белки
- •Лабораторная работа № 1 Простые белки. Цветные реакции на белки и аминокислоты.
- •Приготовление реактивов:
- •Опыт 1 Биуретовая реакция
- •Опыт 4 Реакция Миллона
- •Опыт 2 Нингидриновая реакция
- •Опыт 5 Реакция Сакагучи
- •Опыт 6 Реакция Адамкевича (на триптофан)
- •Опыт 7 Реакция Фоля
- •Опыт 8 Реакция на остаток аргинина (Сакагучи)
- •Опыт 9 Диазореакция
- •Опыт 10 Реакция на присутствие углеводных компонентов
- •Опыт 11 Реакция Вуазене (на триптофан)
- •Опыт 12 . Реакция Паули (на гистидин и тирозин)
- •Лабораторная работа № 2 Тема: Реакции осаждения белков
- •Необратимое осаждение белков.
- •Опыт 1 Осаждение белка кипячением
- •Опыт 2 Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
- •Опыт 3 Осаждение белков органическими кислотами
- •Опыт 5 Осаждение белков органическими растворителями.
- •Опыт 6 Осаждение белков реактивами на алкалоиды.
- •Обратимое осаждение белков Опыт 5 Обратимое осаждение белков.
- •Опыт 5 Альбумины и глобулины в природных белках
- •Опыт 7 Определение изоэлектрической точки белка
- •Лабораторная работа № 3 Тема: Сложные белки
- •Реакции на нуклеопротеиды
- •Приготовление гидролизата дрожжей
- •С гидролизатом проводят следующие реакции:
- •Реакции на фосфопротеиды.
- •Выделение казеиногена из молока
- •Доказательство белковой природы казеиногена
- •Реакции на гликопротеиды
- •Открытие углеводного компонента в яичном белке
- •Выделение муцина из слюны
- •Раздел 2 Ферменты
- •Лабораторная работа № 4 Ферментативный гидролиз крахмала
- •Лабораторная работа № 5 Тема: Свойства ферментов
- •Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов.
- •Лабораторная работа № 6 Протеолиз
- •Опыт 1 Определение активности протеиназ
- •Амилолитические ферменты
- •Опыт 2 Определение амилазной активности слюны
- •Опыт 3 Определение амилазной активности мочи
- •Окислительно-восстановительные процессы
- •Опыт 3 Качественная реакция на каталазу
- •Опыт 4 Качественные реакции на дегидрогеназы
- •Опыт 5 Открытие липазы
- •Опыт 7 Количественное определение активности ферментов
- •Раздел 3 Витамины
- •Лабораторная работа № 7 Тема: Открытие витаминов
- •Опыт 1 Водорастворимые витамины
- •Открытие аскорбиновой кислоты в шиповнике
- •Обнаружение аскорбиновой кислоты в соке картофеля или капусты
- •Количественное определение аскорбиновой кислоты в моче
- •Примечание. Данную работу можно рекомендовать на группу в 3-4 учащихся. Причем экстракция чая делается одна на группу, а титрование и расчет производит каждый Опыт 2 Жирорастворимые витамины
- •Открытие ретинола (витамина а) в рыбьем жире
- •Открытие токоферола (витамин е)
- •Раздел 4 Углеводы Лабораторная работа № 8 Тема: Открытие углеводов
- •Открытие крахмала
- •Тема: Свойства углеводов
- •Раздел 5 Липиды Лабораторная работа № 9 Тема: Открытие липидов (жиров)
- •Опыт 1 Растворимость жиров и масел
- •Опыт 2 Гидролиз жиров и масел
- •Опыт 3 Выделение жира из молока
- •Опыт 4 Обнаружение глицерина в жирах (акролеиновая проба)
- •Опыт 5 Определение ненасыщенности кислот в составе жира
- •Опыт 6 Определение йодного числа
- •Опыт 7 Определение кислотного числа
- •Опыт 8 Омыление жиров
- •Опыт 9 Определение числа омыления
- •Раздел 6 Взаимосвязь обмена веществ и энергии
- •Задания теста:
- •Конечные продукты метаболизма:
- •4 Распад
- •Реакции цикла Кребса
- •Лабораторная работа № 1 Тема: Обмен простых белков
- •Хроматографический метод определения аминокислот. Разделение смеси аминокислот с помощью радиальной хроматографии
- •Лабораторная работа № 2 Обмен сложных белков
- •Обмен нуклеопротеидов
- •Обмен хромопротеидов
- •Открытие билирубина
- •Реакции на желчные пигменты
- •Лабораторная работа №3 Переваривание белка Опыт 1 Действие желудочного сока на белки
- •Опыт 2 Переваривание белка пепсином
- •Опыт 3 Переваривание белка трипсином
- •3.1 Переваривание фибрина
- •3.2 Переваривание казеина
- •3.3 Выделение триметиламинооксида
- •Практическая работа: Белки Задание № 1
- •Задание № 2
- •Задание № 3
- •Лабораторная работа № 4 Тема: Обмен углеводов
- •Опыт 1 Переваривание углеводов в пищеварительном тракте
- •Лабораторная работа №5 Обмен липидов
- •Опыт 2 Действие фосфолипаз поджелудочной железы.
- •Опыт 3 Эмульгирование жира
- •Опыт 1 Качественная реакция на желчные кислоты.
- •Опыт 4 Проба на понижение поверхностного натяжения
- •Опыт 5 Реакции на ацетоновые тела а) Реакция на образование йодоформа
- •Б) Реакция с нитропруссидом натрия
- •В) Реакция на ацетоуксусную кислоту
- •Лабораторная работа № 6 Переваривание жиров
- •Практическая работа: Обмен липидов Решение тестовых заданий
- •Лабораторная работа № 7 Водный и минеральный обмен
- •Открытие хлоридов
- •Открытие сульфатов
- •Открытие фосфатов
- •Вопросы к зачету по биохимии
- •Вопросы к экзамену по биохимии
- •Проверка и контроль знаний по биохимии
- •1 Химия белков и аминокислот
- •2 Химия нуклеиновых кислот
- •Как называются входящие в состав нуклеиновых кислот гетероциклические основания?
- •3 Химия углеводов
- •4 Химия жиров и липидов
- •5 Витамины
- •6 Ферменты
- •7 Обмен веществ и энергии
- •8 Обмен липидов
- •9 Обмен белков
- •11 Водный и минеральный обмен
- •12 Задания на повторение темы « Обмен энергии»
- •13 Задания на повторение темы « Обмен углеводов»
- •Темы курсовых работ по биохимии
- •Задачи по биохимии
- •Примеры тестовых заданий
- •Рекомендуемая литература
Опыт 2 Гидролиз жиров и масел
а) В 2 пробирки поместите по небольшому кусочку жира и прилейте в 1 пробирку 1…2 мл раствора щелочи (NaOH разб.), а во вторую – 1…2 мл соляной кислоты (1:1). Пробирки встряхните. Если изменений не наблюдается, поместите пробирки в водяную баню на 5…10 мин.
Сделайте вывод о гидролизе жиров на холоду и при нагревании.
б) в 2 пробирки поместите по 0,5 мл растительного масла и прилейте в 1 пробирку 1…2 мл раствора щелочи (NaOH разб.), а во вторую – 1…2 мл соляной кислоты (1:1). Пробирки встряхните. Если изменений не наблюдается, поместите пробирки в водяную баню на 5…10 мин.
Сделайте вывод о гидролизе растительного масла на холоде и при нагревании.
Опыт 3 Выделение жира из молока
К 6 мл цельного молока прибавляют 2 мл 10 %-ного раствора Na2CO3, хорошо перемешивают и взбалтывают с 5 мл эфира. Эфирный слой помещают в чашечку для выпаривания на водяную баню (под тягой). После испарения эфира остается сливочное масло – молочный жир.
Опыт 4 Обнаружение глицерина в жирах (акролеиновая проба)
В пробирку вносят 2…3 капли масла (жира), 0,1…0,2 г безводного KHSO4 и нагревают на спиртовке (под тягой) до появления белых густых паров. В пары вносят бумажку, смоченную аммиачным раствором нитрата серебра или раствором фуксинсернистой кислоты.
Аналитический эффект: Бумажка с раствором солей серебра темнеет, а с раствором фуксинсернистой кислоты становится ярко-розовой.
Акролеиновая проба проводится для обнаружения в липидах глицерина. При нагревании в присутствии водоотнимающих средств (KHSO4, MgSO4, борная кислота) из глицерина образуется непредельный альдегид – акролеин (пропеналь).
Опыт 5 Определение ненасыщенности кислот в составе жира
В пробирку поместите 2–3 капли масла (жира) и 8 – 10 капель бромной воды. Пробирку встряхните.
Аналитический эффект: Обесцвечивание бромной воды
Опыт 6 Определение йодного числа
В предварительно взвешенную сухую колбу для титрования помещают 3…4 капли масла (жира).
Колбу повторно взвешиваю на аналитических весах. По разности весов рассчитывают массу навески масла (жира). В колбу добавляют 25 мл спирта (при плохой растворимости слегка подогревают на водяной бане). Затем в колбу вносят 12,5 мл 0,2н спиртового раствора йода (из бюретки), 100 мл воды и перемешивают 5 мин. Содержимое колбы титруют 0,1н раствора тиосульфата натрия до появления слабо желтого окрашивания.
Для более точного определения в колбу приливают 1 мл раствора крахмала и титрование заканчивают до исчезновения синего окрашивания.
Опыт повторяют – контроль, но без масла (жира).
Расчет йодного числа проводят по формуле:
И.ч. = (V2 – V1) х 0,0127 х 100/ m,
где V2 – объем (мл) раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титрование контроля; V1 – объем (мл) раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титрование пробы масла; 0,0127 – титр тиосульфата по йоду; m – навеска масла (г)
Опыт 7 Определение кислотного числа
В предварительно взвешенную сухую колбу для титрования помещают примерно 2 мл масла (жира) – 2…3 г. Колбу повторно взвешиваю на аналитических весах. По разности рассчитывают массу навески масла (жира) ≈ 2…3 г. В колбочку добавляют 10…15 мл смеси спирта с эфиром (1:1), 1…2 капли фенолфталеина и титруют 0,1 н раствор КОН до появления слабо-розового окрашивания. Окраска после взбалтывания не должна исчезать в течение 0,5…1 мин.
Кислотное число рассчитывают по формуле:
К.ч. = V T/ m,
где К.ч. – кислотное число; V – объем (мл) спиртового раствора КОН, пошедшего на титрование (мл); Т – титр 0,1 н раствора КОН; m – масса навески масла (жира), г.
