- •1) Правила поведения в баклабораториях
- •2) Правила забора материала для микробиологических исследования
- •3) Правила забора материала, хранения и транспортировке при оои
- •4) Составить направление на мб исследование
- •5) Дезинфекция в микробиологической лаборатории
- •6) Подготовка посуды к стерилизации
- •7) Этапы приготовления мазка
- •10) Метод Циль-Нильсена
- •8) Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)
- •9) Метод Грамма
- •11) Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли»
- •12) Методы культивирования анаэробов
- •13) Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические)
- •14) Метод Дригальского
- •15) Выделение чистой культуры анаэробов
- •16) Заражение куриного эмбриона
- •17) Реакция гемагглютинации
- •18) Реакция фаголизиса
- •19) Определение фаготипа
- •20) Метод бумажных дисков
- •21) Учет результатов полимеразная цепная реакция (пцр)
- •22) Ра на стекле
- •23) Ра Видаля
- •24) Ра Райта
- •25) Рпга
- •26) Ра по Асколи
- •27) Рн токсина антитоксином по Оухтерлони
- •28) Рск Борде-Жангу
- •29) Рск Вассермана
- •30) Опсоно-фагоцитарная реакция
- •31) Рн на мышах с целью установления экзотоксина
- •32) Реакция Нейтрализации на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита
- •33) Ртга
- •35) Учет реакции ифа
- •37) Серологическая диагностика Вич,с помощью реакции иммуноблотинга
30) Опсоно-фагоцитарная реакция
Механизм: усиление фагоцитоза микробных клеток под влиянием содружественного воздействия антител, иммунной сыворотки и комплемента.
Компоненты реакции:
1) антиген - суточная микробная культура;
2) испытуемая сыворотка больного;
3) комплемент - свежая сыворотка морской свинки;
4) фагоциты - лейкоцитарная взвесь.
Опсонины - это антитела, которые содержатся в нормальных и иммунных сыворотках и подготавливают микробы к фагоцитозу.
Реакция ставится в специальных пробирках при t=37°» минут. Затем из каждой пробирки готовят мазки, считают по, 100 фагоцитов и определяют число фагоцитированных микрс контроле.
Опсонический индекс = фагоцитарный показате. сыворотки/фагоцитарный показатель нормальной сывороп
Чем выше опсонический индекс (должен быть >1), исследуемая сыворотка, и, следовательно, тем выше им! бруцеллезе).
Применяется для олределения опсонинов — антител, стимулирующих фагоцитарную активность лейкоцитов, т.е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.
Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Рав-фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Рс-фрагментов к Рс-рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше, и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.
Компоненты:
- Исследуемая сыворотка
- Нормальная сыворотка
- Суточная микробная культура (напр., стафилококковая)
- Фагоциты — взвесь нейтрофилов
Инкубация при 37 °С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и считают под микроскопом количество микробов, в 100 и более нейгрофилах, т.е. определяют фагоцитарный показатель.
Фагоцитарный показатель — количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.
Опсонический индекс фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.
Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.
Опсоно-фагоцитарный индекс — это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглощенных микробов). Максимальный показатель -75.
31) Рн на мышах с целью установления экзотоксина
В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин.
Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.
Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген—антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген—антитело.
Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.
Реакция нейтрализации экзотоксина происходит при его взаимодействии с антитоксической сывороткой (антитела-антитоксины). В результате образовании комплекса антиген-антитело токсин теряет свои ядовитые свойства.
Реакцию нейтрализации проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов.
Токсины получают путем фильтрования жидкой питательной среды или исследуемого материала, где размножались токсигенные бактерии. При обработке формалином в течение 30-45 дней при температуре 37°С токсин превращается в анатоксин, который используют для иммунизации животных с целью получения антитоксической сыворотки.
Реакция нейтрализации in vivo. Для определения типа токсина его смешивают с диагностической антитоксической сывороткой и эту смесь вводят белым мышам. При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши не погибают.
Реакцию нейтрализации используют для определения антитоксического иммунитета у детей при дифтерии (проба Шика) и скарлатине (проба Дика). Для этого в область предплечья внутрикожно вводят определенное количество соответствующего токсина (1/40 DLM). При наличии в организме антитоксинов произойдет нейтрализация токсина и реакция будет отрицательной. При отсутствии антитоксинов в организме возникает воспалительная реакция на месте введения токсина.