- •1) Правила поведения в баклабораториях
- •2) Правила забора материала для микробиологических исследования
- •3) Правила забора материала, хранения и транспортировке при оои
- •4) Составить направление на мб исследование
- •5) Дезинфекция в микробиологической лаборатории
- •6) Подготовка посуды к стерилизации
- •7) Этапы приготовления мазка
- •10) Метод Циль-Нильсена
- •8) Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)
- •9) Метод Грамма
- •11) Определение подвижности микроорганизмов методом «раздавленной капли»
- •12) Методы культивирования анаэробов
- •13) Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические)
- •14) Метод Дригальского
- •15) Выделение чистой культуры анаэробов
- •16) Заражение куриного эмбриона
- •17) Реакция гемагглютинации
- •18) Реакция фаголизиса
- •19) Определение фаготипа
- •20) Метод бумажных дисков
- •21) Учет результатов полимеразная цепная реакция (пцр)
- •22) Ра на стекле
- •23) Ра Видаля
- •24) Ра Райта
- •25) Рпга
- •26) Ра по Асколи
- •27) Рн токсина антитоксином по Оухтерлони
- •28) Рск Борде-Жангу
- •29) Рск Вассермана
- •30) Опсоно-фагоцитарная реакция
- •31) Рн на мышах с целью установления экзотоксина
- •32) Реакция Нейтрализации на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита
- •33) Ртга
- •35) Учет реакции ифа
- •37) Серологическая диагностика Вич,с помощью реакции иммуноблотинга
24) Ра Райта
Реакция агглютинации является одним из основных методов диагностики бруцеллеза у людей. Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза.
Техника постановки реакции.
В пробирки разливают физиологический раствор: в первую - 2,4 мл, в остальные по 0,5 мл. В первую пробирку добавляют 0,1 мл исследуемой сыворотки, перемешивают, переносят 0,5 мл в третью пробирку и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл смеси выливают, в результате получают в каждой пробирке по 0,5 мл следующих разведений 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. Из первой пробирки 0,5 мл переносят в чистую пробирку и добавляют туда 0,5 мл физиологического раствора (контроль сыворотки в разведении 1:50), а 1,0 мл выливают.
Диагностикум разводят физиологическим раствором согласно прилагаемому к нему наставлению и добавляют по 0,5 мл во все пробирки, кроме контроля. После добавления диагностикума разведение сыворотки соответственно удваивается, т.е. получается 1:50, 1:100 и т.д. Сыворотки с антигеном смешивают путем встряхивания и помещают в термостат (37 °C ) на 18 - 20 часов. После инкубации пробирки выдерживают 1 - 2 часа при комнатной температуре и проводят учет реакции.
Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости.
Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза.
Дальнейшее разведение антигена физиологическим раствором производят по схеме 1.
Схема 1
РАЗВЕДЕНИЕ АНТИГЕНА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИМ РАСТВОРОМ
|
Степень агглютинации |
||||
++++ |
+++ |
++ |
+ |
|
|
Антиген, разведенный 1:2 |
0 |
0,25 |
0,5 |
0,75 |
1,0 |
Физ. раствор |
1,0 |
0,75 |
0,5 |
0,25 |
0 |
% просветления |
100 |
75 |
50 |
25 |
0 |
Стандарт мутности готовят каждый раз при постановке РА и ставят в термостат одновременно с основной реакцией.
Титром сыворотки является максимальное ее разведение, дающее 50% агглютинации, - просветление, оцениваемое на 2+.
При применении стандартизированного диагностикума титры исследуемых сывороток соответствуют количеству международных единиц антител (ме/мл).
Так, титры 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. соответственно равны 50, 100, 200 и т.д. ме/мл.
При диагностической оценке РА рекомендуется следующая схема:
- титр сыворотки 1:100 (100 ме/мл) - результат положительный;
- титр сыворотки 1:200 (200 ме/мл) - результат положительный;
- титр сыворотки 1:400 (400 ме/мл) - результат резко положительный.
Диагностическим титром принято считать реакцию агглютинации не менее 2+ при разведении сыворотки 1:100 и выше.
Недостатком реакции агглютинации признают также необходимость частых кровопусканий у животных, что создаёт почти непреодолимые трудности при реализации этого метода в крупных хозяйствах, в особенности У овец и свиней. У последних неудобство усугубляется тем, что изъятие крови производят из хвоста.