13) Выделение чистой культуры микробов(механические и биологические)

Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на:

1. Механическом разобщении бактериальных клеток

• Метод Дригальского - распределение капли суспензии материала с помощью шпателя;

• Рассев штрихом;

• Метод Коха является количественным и позволяет определить количество бактерий в исследуемом материале

2. Биологические методы:

• Посев на элективные среды;

• Метод Шукевича - посев материала в конденсат скошенного МПА для выделения чистых культур бактерий, обладающих ползучим ростом (например, протей);

• Обработка кислотами и щелочами (например, микобактерии туберкулеза);

• Прогревание при 80°С для выделения споровых форм;

• Заражение лабораторных животных - для диагностики зоонозов и др. (туляремия).

Выделение чистой культуры микробов является обязательным этапом всякого бактериологического исследования. Чистая культура необходима для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых определяется видовая принадлежность исследуемого микроорганизма.

Метод механического разъединения микроорганизмов, находящихся в исследуемом материале, с целью получения изолированных колоний на поверхности или в глубине питательной среды. Очень широко применяются элективные питательные среды.

При выделении чистой культуры патогенных микробов из патологического материала, загрязненного посторонней микрофлорой, прибегают иногда к заражению лабораторных животных, восприимчивых к тому виду микроба, который предполагается выделить из исследуемого материала. Биологический метод выделения чистой культуры применяется при исследовании мокроты на содержание в ней пневмококков, микобактерий туберкулеза. Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). Три пробирки, содержащие по 15 мл мясо-пептонного агара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43— 45 °С. В пробирку вносят одну бактериальную петлю исследуемого материала. После этого прокаленной и остуженной; петлей содержимое 1-й пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок. После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения материала.

14) Метод Дригальского

Метод Дригальского основан на механическом разобщении на поверхности плотной, питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.

I этап.

1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка* окраска по Граму).

2. Посев на чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.

3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37°С.

II этап.

1. Макроскопическое изучение колоний по величине, форме, окраске, характеру поверхности, краев, консистенции.

2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление мазка, окраска по Граму).

3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным агаром.

4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37°С.

III этап.

Проверка культуры на чистоту (макроскопическим - однородный рост, микроскопическим — однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признаками клетки).

IV этап.

Идентификация проводится по:

- ферментативным свойствам.

- антигенным свойствам, токсигенности и другим признакам

- фагочувствительности