- •Методичнi вказівки з мікробіологічної діагностики кашлюку та паракашлюку
- •1. Загальні положення
- •2. Характеристика мікробів роду Bordetella
- •3. Показання до лабораторного обстеження
- •4. Лабораторна діагностика
- •5. Доставка матеріалу й оформлення направлення
- •6. Бактеріологічний метод дослідження
- •7. Вивчення ферментативної активності
- •8. Дослідження атипових штамів бордетел
- •9. Терміни видачі і формулювання відповідей
- •10. Серологічна діагностика
- •10.4. Реакція аглютинації
- •11. Перспективні методи лабораторної діагностики*
- •12.Форми первинної облікової звітності
- •13. Збереження культур бордетел
- •13.1. Способи тривалого збереження (без пересівання) культур бордетел
- •13. 2. Збереження культур бордетел в напіврідкому ква (із кров'ю і без крові)
- •14 Вимоги безпеки
- •Характеристика мікробів роду Bordetella
- •Методи приготування поживних середовищ
- •1. Гідролізат казеїну
- •3. Екстракт дріжджів
- •4. Казеїново-вугільний агар
- •5. Середовище із сухого казеїново-вугільного агару (ква)
- •6. Картопляно-гліцериновий агар (середовище Борде-Жангу), (розрахунок на 4дм3 середовища)
- •7. Молочно-кров'яний агар
- •8. Поживний агар з тирозином
- •9.Середовище Сімонса
- •10. Бульйон Хоттінгера із сечовиною
- •11.Реактиви для визначення уреази (метод Закса)
- •12.Розчин для змочування тампонів
- •13. Приготування і стерилізація тампонів
- •14. Порядок використання антибіотиків
- •Контроль якості поживних середовищ
- •1.Методика кількісного визначення азоту
- •2. Підготовка культур збудника кашлюку для перевірки якості поживних середовищ
- •3.Контроль ростових якостей середовища із сухого казеїново-вугільного агару (ква)
5. Середовище із сухого казеїново-вугільного агару (ква)
У 100 см3 очищеної (дистильованої) води ретельно розмішують 4,5-5,0 г порошку, доводять до кипіння, автоклавують 30 хв. при 110°С. Середовище перемішують і розливають у чашки Петрі або пробірки. Повторне розтоплювання середовища не рекомендується.
Для поліпшення якості на 100 см3 стерильного охолодженого КВА додають 3-5 см3 стерильної дефібринованої крові барана, коня, великої рогатої худоби, кролика, людини. Середовище ретельно перемішують і розливають у чашки Петрі або пробірки.
Замість крові для поліпшення росту можна додати, до автоклавування середовища, 0,5% активованого вугілля марки «А» або іншої марки одночасно з дріжджовим діалізатом або екстрактом (50см3 на 1дм3 середовища), попередньо нейтралізованим (за бромтимоловим синім до зеленого кольору) до рН 7,0.
6. Картопляно-гліцериновий агар (середовище Борде-Жангу), (розрахунок на 4дм3 середовища)
Картоплю ретельно миють щіткою з милом, обтирають спиртом і знімають ножем поверхневий шар, ретельно вирізуючи всі бруньки. Промивають дистильованою водою, нарізають на шматки і зважують необхідну кількість у чистий посуд. Картоплю в кількості 500 г заливають 1дм3 дистильованої води, варять до неповної готовності, додають 4% гліцерину і варять до повної готовності. Рідину, що залишилася, фільтрують через 6 шарів марлі, попередньо промитої і висушеної. До картоплі, що залишилася в каструлі, додають невелику кількість гарячої дистильованої води, струшують, дають недовго відстоятися і фільтрують через той же фільтр, після чого доводять об’єм рідини до первісного (1дм3), додаючи гарячу воду (дистильовану) через той же фільтр. Картопляний відвар можна приготувати про запас, стерилізуючи при 120°С протягом 15хв.
До 3 дм3 дистильованої води додають 0,75% хімічно чистої NaCl (з розрахунку на 3 дм3) і 4% агар-агар (з розрахунку на всю кількість середовища). Суміш поміщають в автоклав, де агар-агар розплавляється текучою парою протягом години. Після відстоювання (у виключеному автоклаві) агар фільтрують через один шар марлі, не виливаючи осаду. Сольовий агар (3 частини) і картопляний відвар (1 частина) змішують у гарячому вигляді, розливають у флакони й однократно стерилізують при 120°С протягом 30 хв. Реакцію середовища не перевіряють.
Перед уживанням до розтопленого й охолодженого до 45°С картопляно-гліцеринового агару додають стерильну дефібриновану кров у кількості 20-25% (цитратна і консервована кров непридатна).
7. Молочно-кров'яний агар
До 1дм3 водопровідної води додають 40-45 г агару, 10 г хлориду натрію і розтоплюють в автоклаві. Потім фільтрують через кілька шарів марлі. До гарячого агару додають рівну кількість знежиреного молока, підігрітого до температури 65 - 70°С, перемішують і витримують в апараті Коха при текучій парі протягом 30-40хв., після чого фільтрують також в апараті Коха через кілька шарів марлі, дають відстоятися й обережно декантують верхній прозорий шар. Після цього середовище розливають у пляшки і стерилізують в автоклаві при 0,5 атм. протягом 40 хв. Перед уживанням до розплавленого й охолодженого до 44°С агару додають дефібриновану кров людини, коня, кролика або барана в кількості 20-25%.
