2. Підготовка культур збудника кашлюку для перевірки якості поживних середовищ

В. pertussis, висушена з замороженого стану під вакуумом, може зберігатися дуже довгий час в ампулі при температурі не вище 10°С. Ампулу з висушеним штамом розкривають стерильно над лотком. Верхній кінець ампули нагрівають на полум’ї пальника і знімають парафін, потім шматочком стерильної вати, змоченим у стерильній воді, обережно торкаються до відтягнутого кінця ампули так, щоб утворилась невелика тріщина, і також мокрою ватою обводять навколо носика ампули. Після утворення кругової (або не повністю кругової) тріщини, легким ударом пінцета видаляють кінець ампули.

Після розкриття ампули в неї асептично вносять 0,2-0,3 см³ стерильного фізіологічного розчину. Після розчинення сухого вмісту ампули його переносять пастерівською піпеткою на чашку з поживним середовищем і 48-72 години вирощують при температурі 35-37°С.

У перших пересівах мікроби мають дещо знижену життєздатність. Для відновлення повної життєздатності потрібно 2-3-пасажи на оптимальних поживних середовищах. Рекомендується для роботи користуватися культурою після другого або третього пересівання. Надалі культури В. pertussis зберігають на середовищі Борде-Жангу або КВА з 10% крові, пересіваючи 1 раз на 3-4 тижні. Дозволяється користуватися культурою не більше 10-го пасажу.

3.Контроль ростових якостей середовища із сухого казеїново-вугільного агару (ква)

У зв’язку з досить складним прописом казеїново-вугільного середовища і великою чутливістю його до режиму стерилізації, варто періодично перевіряти якість готового середовища. З цією метою необхідно використовувати щойно виділені культури В. pertussis.

У стерильних пробірках роблять 8 різних розведень суспензії 2-3-х добової культури. Густина суспензії в 1 пробірці повинна відповідати 5 млрд. мікробних тіл у 1см³ за стандартом мутності. В 2-6 пробірки наливають по 4,5 см³ стерильного фізіологічного розчину, у 7-у наливають 2 см³ і в 8-у - 1 см³. Поверхню однієї з двох чашок Петрі з досліджуваним середовищем ділять на 2-4 або 8 секторів (у залежності від поживного середовища): 0,5 см³ суспензії з 1 пробірки переносять стерильною піпеткою в 2 пробірку і цією ж піпеткою наносять 0,1 см³ суспензії на сектор 1. Іншою стерильною піпеткою перемішують вміст другої пробірки, переносять із неї 0,5 см³ у 3-ю пробірку і 0,1 см³ наносять на сектор 2 і т.д. Для кожного розведення слід вживати окрему стерильну піпетку, перемішуючи нею вміст пробірки. У 8-у пробірку переносять із 7-ї 1см³ суспензії, також перемішуючи стерильною піпеткою і наносять 0,1 см³ на сектор 8.

Чашку Петрі обережно, кришкою догори (щоб краплі не злилися) ставлять у термостат і витримують протягом 3-5 діб. Якщо середовище приготоване правильно, то на перших трьох секторах ріст має вигляд суцільних бляшок, на секторах 4, 5 і 6 виростають близько розташовані колонії, а на секторах 7 і 8 - невелика кількість ізольованих колоній. Якщо немає росту на останніх двох секторах, то середовищем користуватися не можна.

При використанні поживних середовищ з додаванням крові, чашки Петрі поділяють на два сектори, а при використанні сухих середовищ КВА з додаванням дріжджового екстракту - на 4 сектори.

У лабораторіях районних СЕС перевірку якості поживного середовища можна проводити за полегшеним методом. Посів колоній В. pertussis роблять на 1/16 поверхні чашки із середовищем КВА, розлитим у чашки Петрі. Усього перевіряють 5-10 колоній. Облік росту культури проводять через 48 годин. У випадку росту культури по всьому сектору - середовище доброї якості, при рості на 1/2 сектора - уповільнений ріст В. pertussis; ріст тільки на посівній площі - середовище непридатне.

Схема приготування розведень В. pertussis для перевірки якості КВА

№ пробірок	Кількість фіз. р-ну (у см3 )	Об’єм внесеної суспензії (у см3)	Кількість мікробів у 1 см3
1	1,0	1,0 вихідної суспензії	5.000.000.000. (5х109)
2	4,5	0,5 з 1-ї пробірки	500.000.000. (5х108)
3	4,5	0,5 з 2-ї пробірки	50.000.000. (5х107)
4	4,5	0,5 з 3-ї пробірки	5.000.000. (5х106)
5	4,5	0,5 з 4-ї пробірки	500.000. (5х105)
6	4,5	0,5 з 5-ї пробірки	50.000.(5х104)
7	2,0	0,5 з 6-ї пробірки	10.000. (104)
8	1,0	1,0 з 7-ї пробірки	5.000. (5х103)

23