Образование бляшек.

Размножение некоторых вирусов (энтеровирусов, арбовирусов, миксовирусов и др.) в культуре клеток можно выявить методом бляшек.

В основе метода лежит появление в монослое зараженных клеток под агаровым покрытием обесцвеченных участков (бляшек). Бляшки представляют собой деструктивные клетки, разрушенные вирусом и неспособные окрашиваться в отличие от живых клеток (рис. 4).

Рисунок 4. «Бляшки» (негативные колонии вируса).

Реакция гемагглютинации.

В основе РГА лежит способность некоторых вирусов агглютинировать эритроциты человека, отдельных видов животных и птиц. Впервые явление гемагглютинации эритроцитов вирусом гриппа было описано в 1941 г. Херстом. При вскрытии зараженных гриппом куриных эмбрионов исследователь установил, что кровь, вытекающая из пораженных сосудов, смешиваясь с вируссодержащей аллантоисной жидкостью, собирается в комочки. По РГА можно выявить не только наличие вируса в исследуемом материале, но и определить его гемагглютинирующий титр. РГА применяется для индикации вирусов гриппа, паргриппа, аденовирусной инфекции, кори, полиомиелита и др.

В качестве исследуемого материала при геамагглютинации используют аллантоисную и амниотическую жидкость, суспензию хорионаллантоисных оболочек куриного эмбриона, взвеси и экстракты из органов животных, а также культуральную жидкость инфицированных клеток. Перед постановкой реакции испытуемый материал освобождается от крупных частиц ценртифугированием.

Компоненты РГА: вирусосодержащий материал, взвесь эритроцитов человека или животных, физиологический раствор (рис.5).

Техника постановки РГА. РГА можно ставить двумя методами: капельным методом на стекле и в пробирках или лунках пластин.

Для постановки капельной реакции на чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю 5% взвеси эритроцитов и каплю вируссодержащего материала, тщательно перемешивают пипеткой. При положительной реакции через 1-2 минуты макроскопически обнаруживают появление агглютинации эритроцитов в виде хлопьев.

Постановка РГА в пробирках. В штативе устанавливают 10-12 пробирок, в которых готовят последовательные разведения вируса. Затем во все пробирки вносят по 1 мл 1% взвеси эритроцитов. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и оставляют для инкубации. При наличии гемагглютинирующего вируса в исследуемом материале агглютинированные эритроциты осядут на дно пробирки в виде зонтика с неровными зубчатыми краями. При отрицательной РГА эритроциты оседают на дно в виде точки с ровными гладкими краями.

Рисунок 5. Схема реакции гемагглютинации.

Реакция гемадсорбции.

Сущность реакции гемадсорбции состоит в том, что на поверхности клеток, инфицированных вирусами, обладающими гемадсорбирующей активностью, адсорбируются эритроциты. Реакция гемадсорбци применяется при диагностики гриппа, парагриппа, клещевого энцефалита, оспы.

Компоненты реакции гемадсорбции: пробирки с культурой клеток, зараженных вирусом, 0,5% взвесь эритроцитов (рис.6).

Техника постановки реакции гемадсорбции. Для постановки реакции используют 10 пробирок с хорошо сформированным монослоем клеток. Культуры клеток заражают вирусосодержащим материалом. После 3-7 дневной инкубации добавляют в каждую пробирку 0,2 мл 0,5% стерильной суспензии эритроцитов, выдерживают в течение нескольких минут, затем встряхивают и просматривают под микроскопом. Зараженные вирусом клетки адсорбируют на своей поверхности эритроциты, не зараженные клетки эритроцитов не адсорбируют.

Рисунок 6. Реакция гемадсорбции.