Цветная проба (колориметрический тест).

Заражение клеточных культур цитопатогенным вирусом ведет к подавлению их метаболизма. Последнее можно определить колориметрическим методом (цветной пробой). Свежая питательная среда pH 7,4-7,8, содержащая феноловый красный, имеет красный цвет. Растущие клетки в процессе метаболизма продуцируют кислоту, что приводит к изменению цвета питательной среды на желтый. При заражении вирусом клетки погибают раньше, чем вырабатывают достаточное количество кислоты, чтобы изменить цвет среды на желтый. Таким образом красный цвет среды указывает на размножение вируса, желтый – на отсутствие вируса.

Идентификация вирусов.

Методы определения типа вирусов (в вируссодержащем материале) относятся к методам идентификации и основаны на нейтрализации вирусов типоспецифическими сыворотками:

• Нейтрализация ЦПД;

• Нейтрализация гемадсорбции;

• Нейтрализация цветной пробы;

• Реакция торможения гемагглютинации;

• Выявлением вирусов при помощи флюоресцирующих антител;

• Нейтрализация в опыте на животных;

• РСК, ИФА, ПЦР, иммуноблотинг.

Реакции нейтрализации.

Реакции нейтрализации основаны на способности специфических гипериммунных сывороток нейтрализовать инфекционное действие гомологичного вируса в культуре клеток, курином эмбрионе, лабораторных животных. Выбор восприимчивой системы определяется свойствами испытуемого вируса. В реакции нейтрализации один из компонентов (вирус или сыворотка) должны быть обязательно известным и применяться в постоянной дозе. Второй (исследуемый) компонент применяется в различных разведениях (титруется).

Постановка реакции нейтрализации в зависимости от цели осуществляется двумя вариантами. Применяют реакцию нейтрализации для выявления и определения титра специфических антител в сыворотках крови переболевших животных. В этом случае реакция нейтрализации ставится с постоянной дозой известного вируса и разными разведениями испытуемых сывороток.

В сыворотках крови вируснейтрализующие антитела накапливаются, как правило, в период реконвалесценции и могут сохраняться в течение многих месяцев и даже лет. Динамика накопления и исчезновения вируснейтрализующих антител определяется в значительной степени биологией вируса. Так, при гриппе человека вируснейтрализующие антитела в высоких титрах определяются на 21-28-й день и содержание их уменьшается к 6 мес. При энцефалите антитела обнаруживаются через 1,5-2 месяца и сохраняются в течение длительного срока.

Компоненты реакций нейтрализации: 1) вирус известного вида (типа) для серологической диагностики заболевания или исследуемый вирус для идентификации; 2) сыворотка, специфическая для идентификации выделенного вируса, или исследуемая сыворотка для серологической диагностики заболевания.

Реакция торможения (задержки) гемагглютинации.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на свойстве специфических антисывороток подавлять (тормозить) гемагглютинирующую способность вирусов. Реакция используется для идентификации неизвестного вируса (по известной специфической сыворотке) или для определения специфических антител в сыворотке переболевших животных (по известному вирусному антигену).

Компоненты РТГА: вирус, специфическая гипериммунная сыворотка, 1% взвесь эритроцитов, физиологический раствор.

При использовании РТГА для серологической диагностики вирусных инфекций парные сыворотки больных титруют с несколькими вирусными антигенами. Специфичность последних, равно как и рабочий титр, заранее проверяются посредством эталонных специфических сывороток.

Положительным результатом РТГА считается отсутствие гемагглютинации в пробирке с большой концентрацией сыворотки.

При использовании РТГА для идентификации выделенного вируса испытуемый вирус относится к тому виду (типу), сыворотка которого вызвала его нейтрализацию и торможение реакции гемагглютинации.