Идентификация вирусов при помощи флюоресцирующих антител.

В основу метода иммунофлюоресцирующих антител положено свойство антител при окрашивании флюорохромами флюоресцировать (светиться) в ультрафеолетовых лучах. Коньюгированные флюорохромами иммунные сыворотки называются «мечеными»

При взаимодействии с гомологичным антигеном в клетках ткани или мазках меченые антитела фиксируются, образуя прочный комплекс антиген-антитело. В люминесцентном микроскопе фиксированные антитела излучают свечение, цвет которого зависит от флюорохрома, использованного для коньюгации. В том случае, если меченый глобулин не гомологичен исследуемому антигену, комплекс антиген-антитело не образуется и флюоресцирующий гамма-глобулин легко удаляется при следующей промывке. Методы РИФ просты, высокочувствительны, специфичны, позволяют в течение короткого времени диагностировать заболевание.

Для приготовления препаратов необходимы: исследуемый материал (мазки-отпечатки из органов и тканей больных животных, органы и ткани здоровых животных, культуры клеток, инфицированные вирусом и незараженные культуры клеток), коньюгированный гомологичный гамма-глобулин или коньюгированные специфические сыворотки, отрицательная коньюгированная сыворотка.

Техника постановки. На предметное стекло делают мазки-отпечатки из патологического материала, предназначенного для исследования. Препарат фиксируют ацетоном в течение 10 минут с последующим высушиванием в течение 20 минут при 37С. На исследуемые препараты наслаивают флюоресцирующий специфический глобулин. Препараты помещают во влажную камеру и окрашивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем дважды тщательно промывают фосфатным буферным раствором, высушивают. На препараты наносят каплю забуференного глицерина, накрывают покровным стеклом, просматривают под иммерсионной системой люминесцентного микроскопа в отраженном свете. В положительных случаях специфические антитела, фиксирующиеся в местах расположения вирусного антигена, обнаруживают по свечению.

Литература:

1. Васильев Ю.М., Руднева И.А., Коктяева И.Б. Сравнительное изучение размножения вируса гриппа в культуре клеток и куриных эмбрионах //Вопросы вирусологии. – 2009. - №4. – С. 18-23.

2. Воробьёв А.А., Быков А.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. М.: Учебник для СПО/ Москва, Издательство Academia – 2009. – 288 с.

3. Елисеева О.П. Выявление герпес вируса и вирусоспецифических антител методом полимеразной цепной реакции и иммуноферментным анализом //Вопросы вирусологии. – 2005. - №6. – С. 46-50.

4. Колешко О.И., Завезенова Т.В. Микробиология с основами вирусологии. М.: Учебник для мед. ВУЗов/ Москва, Издательство Academia – 1999. – 287 с.

5. Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. Медицина/ Москва, Издательство Феникс – 2009. – 282 с.

6. Окулова О.Н., Мищенко В.А., Пономарев А.П. Культивирование ротавируса в перевиваемых культурах клеток в щелочных условиях //Вопросы вирусологии. – 2008. - №1. – С. 44-46.