12. Ознакомьтесь с правилами забора материала для бактериологических, вирусологических и серологических исследований.

Исследуемый

материал

Цель

исследования

Методика забора и посева материала

Условия доставки на исследование

1

2

3

4

Кровь

(бактериологическое исследование)

ОБЩИЕ ПРАВИЛА ЗАБОРА КРОВИ. Венозную кровь следует забирать во время подъема температуры с первого дня заболевания, до начала антибактериального лечения или через 12-24 часа после последнего введения препарата больному с соблюдением правил асептики (обработка операционного поля 70° спиртом, потом 5% настойкой йода и снова 70° спиртом, обрабатывать круговыми движениями от центра к периферии) в питательную среду в соотношении 1:10 (не менее 10 см³ у взрослых, 5 см³ у детей).

Доставить в лабораторию немедленно или хранить в термостате при 37°С, до следующего дня

на стерильность

Посев в питательную среду проводить над пламенем спиртовки, открывая пробку флакона и подставляя его под струю крови, в случае применения резиновой пробки проколоть пробку иглой. У больных неясной этиологии, которые продолжительно температурят, кровь засевают на анаэробы методом укола вглубь специальной питательной среды в соотношении 1:10.

Примечание. Все питательные среды, предназначенные для анаэробного посева, заранее подвергают регенерации (прогреванию 20 мин. при 100°С на водяной бане и дальнейшего резкого охлаждения под струей воды). Регенерацию можно выполнять только один раз.

на гемокультуру

С 1-го дня болезни и до конца лихорадки 5‑10 см³ венозной крови внести над пламенем спиртовки во флакон с 50‑100 см³ 10% желчного бульона (1:10)

на ботулизм

До введения антиботулинической сыворотки 10‑15 см³ венозной крови немедленно доставить в бак.лабораторию. Лучше брать кровь с 4% р‑ром лимоннокислого натра в соотношении 3:1.

Доставить в баклабораторию горСЭС немедленно

на выявление возбудителей бактериальных менингитов

Несколько капель венозной крови засеять на чашки с сывороточным гаром, кровяным агаром и вареной кровью, остаток – на среду для контроля стерильности в соотношении 1:10. Среды должны быть подогретыми до 37°С.

Доставить в биксе на грелке при 37°С 37°С немедленно

Толстая капля

Экспресс метод на возбудитель менингита

На средину предметного стекла нанести каплю крови или приложить стекло непосредственно к капле, выступающей из пальца. Нанесенную на стекло кровь растереть стеклянной палочкой до диаметра 1‑1,5 мм. Стекло оставить в горизонтальном положении до подсыхания.

Доставить в баклабораторию в стерильной чашке Петри

1

2

3

4

Сыворотка крови (серологические исследования)

ОБЩИЕ ПРАВИЛА: 2-5 см³ венозной крови, взятой натощак или через 3 часа после еды, внести в стерильную пробирку плавно, не разбрызгивая, во избежание разрушения эритроцитов. Пробирку поместить на 10-15 мин в термостат для образования сгустка, потом сгусток отделить от стенок пробирки стерильной пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой и поместить в холодильник при +4+8°С на 18-24 ч. Затем осторожно пипеткой отобрать сыворотку в стерильную пробирку с резиновой пробкой. При наличии центрифуги кровь центрифугоровать при 1000‑1500 об/мин 7-10 мин, после чего осторожно отобрать сыворотку. Сыворотка крови должна быть прозрачной, без следов гемолиза. При невозможности получения крови из вены у детей, ее берут из пальца в количестве 0,2 мл и вносят в пробирку с 1,8 см³ стерильного физ. Раствора.

До отправки в лабораторию хранить при +4+8°С не больше 48ч.

Диагностика

Коклюш, дифтерия, столбняк

Проводить в динамике с интервалом 10-14 дней

Доставить в баклабораторию горСЭС

Брюшной тиф, паратифы, сыпной тиф, дезентерия

Проводить в динамике с интервалом 7-10 дней

Грипп и группа ОРВИ

Проводить в динамике с интервалом 7-10 дней

Доставить в вирусологическую лабораторию

Эпид.паротит

Проводить в динамике с интервалом 10-14 дней

Корь, коревая краснуха

Однократно, не ранее 4-7 дня от начала сыпи

Вирусный гепатит

Однократно, в любой день заболевания

Напряженность иммунитета

Коклюш, дифтерия, столбняк

Обследовать клинически здоровых лиц однократно, не ранее чем через 6 месяцев после прививки

Доставить в баклабораторию горСЭС

Корь, полиомиелит, коревая краснуха, эпид.паротит

Обследовать клинически здоровых лиц однократно, не ранее чем через 1 год после прививки

Доставить в вирусологическую лабораторию

1

2

3

4

Спинномозговая жидкость (СМЖ)

Выявление возбудителей бактериальных менингитов

Забор ликвора должен проводить врач до начала лечения с соблюдением всех правил асептики. Первую порцию СМЖ взять в отдельную пробирку для проведения общего исследования. Вторую порцию для бакисследования в количестве 2-5 см³ внести в стерильную пробирку. В нерабочее время баклаборатории: неоюходимо провести посев СМЖ на среду обогащения – среда для контроля стерильности (1:10) и 2-3 капли материала внести на поверхность сред кровяной агар и шоколадный агар, подогретых до 37°С, растереть тампоном по всей поверхности среды

Доставить в биксе на грелке при 37°С немедленно в баклабораторию или сохранять 2 ч. в термостате

Выявление возбудителей вирусных менингитов

1‑2 см³ СМЖ отобрать в стерильную пробирку, хранить в холодильнике при 0..+8°С

Доставить в вирусологическую лабораторию не позже 48ч.

Носоглоточная слизь

На выявление менингококка

Слизь из задней стенки носоглотки забрать натощак или через 3-4 часа после еды стерильным тампоном, укрепленном на согнутом стержне. Материал брать с обязательным нажатием шпателем на корень языка. Тампон ввести концом кверху за мягкое небо в носоглотку и провести 2-3 раза по задней стенке. При вытягивании тампон не должен касаться зубов, слизистой щек, языка и язычка. Материал сразу же засеять на чашку с подогретым сывороточным агаром.

Доставить в биксе на грелке при 37°С НЕМЕДЛЕННО в баклабораторию

Ротовая полость

На микрофлору

Материал брать натощак или через 2 ч после еды сухим стерильным ватным тампоном из слизистой оболочки или ее пораженных участков, поверхности языка или язвы. При наличии пленки, последнюю снять пинцетом, налет соскоблить спинкой или ребром скальпеля. Использовать тампон с транспортной средой промышленного или лабораторного производства.

Доставить в лабораторию в течении 2 часов. При использовании тампонов с промышленной транспортной средой до 18-24 часов. Для вирусологических исследований – на холоде.

Носовая полость

На бактериальную и вирусную флору

Материал брать сухим стерильным ватным тампоном, который ввести вглубь полости носа, использовать тампон с транспортной средой для бактерий или вирусов промышленного и лабораторного производства.

Глотка

На бактериальную и вирусную флору

Материал забирать натощак или через 2 ч после еды сухим стерильным ватным тампоном при широко открытой ротовой полости и придавленным шпателем языке так, чтобы тампон не затрагивал язык и слизистую оболочку рта. Сначала тампоном обтереть одну миндалину потом небную дужку, язычок, вторую миндалину и заднюю стенку глотки. Необходимо забирать материал двумя тампонами: одним из очага поражения, другим так как описано выше. При локализации процесса в носоглотке применять согнутый тампон, им пользоваться под контролем носоглоточного зеркала. Использовать тампон с транспортной средой для бактерий или вирусов промышленного и лабораторного производства.

1

2

3

4

Мокрота

На микрофлору

Забирать утреннюю мокроту во время кашля в стерильную посуду в количестве не менее 1-2 см³, перед откашливанием больной чистит зубы, полощет рот кипяченой водой.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч.

Промывные воды бронхов

На микрофлору

При бронхоскопии ввести не больше 5 см³ физ. р-ра с дальнейшим его отсасыванием в стерильную пробирку.

Пунктат инфильтрата или абсцесса легкого

На микрофлору

Материал получить при трансторакальной пункции с соблюдением правил асептики и поместить его в стерильную пробирку в количестве 3‑5 см³.

Слизь из зева и носа

На выявление возбудителей дифтерии

Материал из миндалин и носа брать отдельными тампонами натощак или не ранее чем через 2 ч после еды при достаточном освещении с использованием шпателя не затрагивая тампоном языка, слизистой щек и зубов. При наличии налетов материал следует брать с границы поврежденных и здоровых тканей слегка нажимая на них тампоном. При наличии пленок их немедленно доставить в лабораторию на стерильных тампонах или в стерильных пробирках для бактериоскопии. При невозможности немедленной доставки тампонов в лабораторию провести посев на теллуритовый кровяной агар (ТК), на одну чашку от одного человека, используя при этом одну половину поверхности среды для посева из зева, а другую для посева из носа. На чашке должна быть маркировка «зев» и «нос». При посеве материал втереть в среду со всех сторон тампона на участке площадью 2*1 см², а потом этим же тампоном рассеять по всей поверхности среды. Среды должны быть подогреты при комнатной температуре, срок годности не более 4-чх суток! При проведении курса лечения антибактериальными препаратами исследования проводить не ранее чем через 3 дня после последнего приема препаратов.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч.

Или хранить в термостате при 37°С не более 24 часов

На стафилококк

Материал из зева и носа брать отдельными тампонами натощак или не ранее чем через 2 ч после еды при достаточном освещении. Посев проводить на среду Чистовича (желточно-солевой агар) на одну чашку от одного больного, используя при этом одну половину поверхности среды для посева из зева, а другую для посева из носа. На чашке должна быть маркировка «зев» и «нос».

Слизь с задней стенки глотки, гортани

На коклюш

С первого дня и до конца третьей недели заболевания.

1 метод: метод кашлевых пластинок – во время кашля поднести открытую чашку с питательной средой ко рту больного на расстояние 5-10 см 2 раза.

2 метод: согнутым тампоном забрать слизь из гортани и засеять согнутой внешней стороной тампона на сектора среды КУА, потом рассеять по всей поверхности среды другим тампоном.

Выполняется в баклаборатории горСЭС

1

2

3

4

Желчь

На микрофлору, брюшной тиф и паратифы

Собрать порции В и С отдельно в две стерильные пробирки по 5 см³ каждой порции, или во время операции шприцем в одну пробирку, соблюдая правила асептики

Доставить в лабораторию в течение 2 ч

Отделяемое открытых ран, пупковая культя новорожденного

На микрофлору

Кожу вокруг раны обработать 70° спиртом или другим антисептиком.

Некротические массы, детрит и гной удалить стерильной салфеткой. Материал забрать стерильным ватным тампоном круговыми движениями от центра к периферии поверхности раны. Материал берется двумя тампонами (один – для посева, другой – для микроскопии). Использовать тампон с транспортной средой промышленного и лабораторного производства.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч (тампоны с транспортной средой до 18-24 ч), мазок в стерильной чашке Петри

Отделяемое из глубины раны, пунктат замкнутой полости

При подозрении на анаэробную инфекцию

Для отбора могут быть использованы тампоны, которые сразу же погружаются в регенерированную среду для анаэробов. Рекомендуется также использовать коммерческие тампоны с транспортной средой. Пунктат засевают на регенерированную среду для исследования на анаэробы (СКС) или в шприцах доставляют в лабораторию.

Регенерация – прогрев 20 мин при 100°С на водяной бане и охлаждение под струей воды.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч (промышленные тампоны с транспортной средой до 18-24 ч)

Отделяемое глаз

На микрофлору

Материал должен забирать врач‑окулист с пораженных мест в разгар воспалительного процесса с соблюдением правил асептики. За 5-6 часов до обследования отменить все медикаменты и процедуры. С конъюнктивы материал забрать стерильным ватным тампоном с внутренней поверхности нижнего века движением от внешнего угла к внутреннему углу глазной щели, заранее удалив гной стерильной салфеткой. Корочки удалить пинцетом. С роговицы материал забирать после обезболивания. При применении контактных линз необходимо исследовать их внутреннюю поверхность. Слезные мешки: секрет, который выделяется при массаже, отобрать пипеткой или ватным тампоном. Использовать тампон с транспортной средой промышленного и лабораторного производства

Доставить в лабораторию в течение 2 ч (промышленные тампоны с транспортной средой до 18-24 ч)

1

2

3

4

Отделяемое ушей

На микрофлору

Материал должен забирать врач‑отоларинголог стерильным ватным тампоном. При поражении внешнего уха кожу обработать 70° спиртом с дальнейшим промыванием стерильным физ. р-ром. Потом из пораженного очага материал забрать на стерильный ватный тампон или на тампоны с транспортной средой. При поражении среднего или внутреннего уха исследовать пунктаты, полученные во время оперативных вмешательств в стерильную посуду (1‑2 см³) или оставляют в шприце.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч (промышленные тампоны с транспортной средой до 18-24 ч)

Отделяемое женских половых органов

На микрофлору

Материал должен забирать врач‑гинеколог стерильным ватным тампоном, используя тампоны с транспортной средой промышленного и лабораторного производства (вульва, влагалище). Мазок из шейки матки забирать после тщательной обработки влагалища (физ.р-ром или стерильной водой). Материал из матки, придатков матки, полученный при инструментальном исследовании поместить в количестве 3-5 см³ в стерильную пробирку. Параллельно с отбором материала на посев необходимо готовить мазки для микроскопии (не менее 2-х), используя для этого стерильные тампоны. При приготовлении мазков надо равномерно растереть материал на предметном стекле, мазок высушить, поместить в чашку Петри и доставить в баклабораторию.

Приказ №59 (мониторинг в роддомах)

Забор из влагалища и цервикального канала осуществлять ватно‑марлевым тампоном с погружением в 5 см³ физ.р-ра.

Отделяемое мужских половых органов

На микрофлору

Материал должен забирать врач‑уролог. Уретра: материал забирать утром перед мочеиспусканием стерильным ватным тампоном. В некоторых случаях можно провести небольшой массаж мочеиспускательного канала. Предстательная железа: секрет брать с помощью массажа через прямую кишку. Во избежание его загрязнения уретральной флорой, в мочеиспускательный канал ввести стерильный ватный тампон. Придаток и яички: исследовать эякулят или пунктат придатка яичка. Собирать в стерильную посуду.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч

Моча

На стерильность

Исследованию подлежит средняя порция свободно выпущенной мочи, взятой в количестве 3‑5 см³ в стерильную посуду после туалета внешних половых органов.

Женское грудное молоко

На микрофлору

Перед сцеживанием тщательно вымыть руки мылом, обработать соски и околососковую зону 70° спиртом. Исследованию подлежит средняя порция молока в количестве 3‑5 см³, сцеженная отдельно из каждой молочной железы в стерильную промаркированную посуду.

1

2

3

4

Рвотные массы, промывные воды

При пищевых отравлениях, на ботулизм

Собрать в стерильную посуду до применения антибактериальных препаратов и введения антиботулинической сыворотки в количестве 5‑10 см³.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч

Испражнения

На пат.микрофлору (дизентерия, сальмонеллез, эшерихиозы)

Испражнения собрать из чистых горшков (без следов дез.средств), суден, пеленок и с помощью ректальных петель засеять в магниевую среду в соотношении 1:5. Для посева на среды Плоскирева и Эндо нужно использовать разведение кала в стерильном физ.р-ре 1:10, в пробирке. Содержимое тщательно эмульгировать ректальной петлей, потом той же петлей провести высев на среды Плоскирева и эндо так, чтобы получить изолированные колонии. Использованную пробирку направить в лабораторию для обеззараживания. При отсутствии нативного кала материал отобрать ректальной петлей с прямой кишки. Перед посевом петлю увлажнить стерильным физ.р-ром, ввести в прямую кишку на 5-8 см детям, на 10 см взрослым. Посев нативного кала, собранного больным в домашних условиях, не допускается.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч или держать в термостате при 37°С не более 24ч.

Контроль лечения

После лечения дизентерии – посев на ср.Плоскирева, после лечения сальмонеллеза – на среду Плоскирева и магниевую ср., после лечения эшерихиозов – на ср. Эндо, после лечения ОКЗ невыясненной этиологии – на ср. Плоскирева и магниевую и Эндо.

На патогенную, условно-патогенную микрофлору и стафилококк

В пробирку с 9,0см³ физ.р-ра и отметкой до 10см³ (или 4,5 см³ физ.р-ром с отметкой до 5 см³) ректальной петлей поместить до метки нативный материал тщательно его эмульгировать, этой же петлей приблизительно 1 г кала поместить в 5 см³ магниевой среды. В лаборатории из разведения материала 1:10 проводится количественный посев на УПМ и стафилококк.

При невозможности доставки в течении 2ч посевы на пит.средах поместить в 37°С, разведение 1:10 – в холодильник.

На дисбактериоз

По назначению анализа на дисбактериоз при наличии дисфункции кишечника необходимо заранее провести исследование на патогенные энтеробактерии. Инструктаж по забору и доставке материала на дисбактериоз проводится в бак.лаборатории. Испражнения из чистых горшков, суден, пеленок (памперсы исключить) в объеме столовой ложки забрать стерильным предметом в стерильную посуду (получить в бак.лаборатории). Эффективность лечения дисбактериоза оценивается после повторного исследования микрофлоры, которое необходимо назначить не ранее, чем через 4‑5 недель в случае приема бактерийных препаратов или антибиотиков.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч

1

2

3

4

Испражнения

На холеру

0,5 г кала или материал, забранный ректальной петлей из прямой кишки засеять на 1% пептонную воду с рН7,8 или рН9,4 в зависимости от того, в какое время суток проводится восев.

‑ на 1% пептонную воду с рН7,8 проводить посев материала, забранного с 2⁰⁰ до 12⁰⁰ в будние дни

‑ на 1% пептонную воду с рН9,4 проводить посев с 12⁰⁰ до 2⁰⁰ в будние дни и круглые сутки в выходные и праздничные дни.

рН7,8 доставить в лабораторию немедленно или не позднее 6ч с момента забора. рН9,4 доставить немедленно или поместить в термостат при 37°С не более 24ч.

На кампилобактериоз

В пробирку с транспортной средой, закрытой резиновой пробкой, поместить кал в соотношении от 1:3 до 1:5, заранее отлив часть среды с таким расчетом, чтобы после посева уровень доходил до пробки.

Доставить в лабораторию в течение 2 ч или хранить в холодильнике не более 24ч

На иерсиниоз

0,5 г кала засеять в 5 см³ фосфатно-буферного физ.р-ра

На полиомиелит

Отобрать 2 образца фекалий по 2 флакона с интервалом забора 24-48 ч, в каждом флаконе по 8г фекалий. После отбора пробу немедленно поместить в холодильник, не замораживая (от 0 до +8°С).

Доставить в вирусологическую лабораторию облСЭС немедленно, на холоде

На энтеровирусные инфекции

Отбирать в чистые пенициллиновые флаконы пробу фекалий в объеме 2-3 см³ ежедневно на протяжении 3-х дней в первые 7 дней заболеваний. После отбора пробы немедленно поместить в холодильник, не замораживая (от 0 до +8°С).

Доставить в лабораторию в спец. термоконтейнерах с охлаждающими элементами

На ротавирусы и аденовирусы

Отбирать в чистые пенициллиновые флаконы пробу фекалий в объеме 1 см³ в первые 3-4 дня болезни. Отобранный материал до отправки в лабораторию сохранять при +4°С до 24ч. При необходимости сохранения более 24ч температурный режим ‑6 …‑20°С (условия морозильной камеры). Повторное замораживание и размораживание недопустимо.