5.2. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга)

Реакция непрямой гемагглютинации основана на способности эритроцитов адсорбировать на своей поверхности антиген и при контакте со специфическими антителами склеиваться и образовывать осадок, видимый невооруженным глазом.

Она рекомендуется для диагностики описторхоза в острой фазе, трихинеллеза и эхинококкоза в острой и хронической фазах заболевания рекомендуется РНГА. Метод обладает высокой чувствительностью (до 90 - 98%) в острой фазе описторхоза, трихинеллеза и хронической - трихинеллеза и эхинококкоза. В хронической фазе описторхоза чувствительность РНГА не превышает 45%.

Реакцию непрямой гемагглютинации можно использовать в качестве теста, дополняющего результаты иммуноферментного анализа, для повышения достоверности серологической диагностики гельминтозов.

Диагностический набор содержит: формалинизированные эритроциты барана, сенсибилизированные специфическим антигеном (Д+), эритроциты барана без антигена (Д-), сыворотку диагностическую агглютинирующую, положительный контрольный тест (К+), сыворотку нормальную человека - отрицательный контрольный тест (К-), эритроциты барана сухие (Э), реагент для приготовления раствора для разведения сывороток.

5.2.1. Принцип постановки РНГА

Проведение реакции непрямой гемагглютинации с использованием промышленных препаратов включает следующие этапы, которые должны точно соответствовать инструкции по применению используемого препарата:

1) подготовка растворов, необходимых для проведения анализа;

2) подготовка испытуемых сывороток и контрольных сывороточных образцов;

3) нанесение на планшет испытуемых и контрольных образцов;

4) внесение диагностикума (Д+) и эритроцитов без антигена (Д-);

5) инкубация;

6) учет результатов.

Результаты анализа учитываются в титрах и по интенсивности реакции, выраженной в крестах. При оценке результата реакции по 4-крестной системе учитывается характер осадка эритроцитов на дне лунок:

- резко интенсивная реакция (++++) - все эритроциты агглютинированы и покрывают дно лунок, образуя "зонтик";

- интенсивная реакция (+++) - агглютинированы почти все эритроциты, образуя зонтик, в центре которого имеется заметное кольцо из осевших неагглютинированных эритроцитов;

- реакция средней интенсивности (++) - на дне лунки различается осадок из неагглютинированных эритроцитов в виде плотного широкого кольца;

- реакция слабой интенсивности (+) - мелкие агглютинаты на дне лунки, большинство эритроцитов не агглютинировало и осело в центре лунки в виде маленького кольца;

- реакция отрицательная (-) - эритроциты осели на дне лунки, образуя "пуговку" или маленькое колечко с ровными краями.

Учет проводится при соответствующих показателях контролей:

Д+ - не образует спонтанной агглютинации в отсутствии сывороток, с К- - не агглютинируют в разведении выше диагностического титра, с К+ - агглютинируют (см. инструкцию по применению);

Д- - не образуют спонтанной агглютинации в отсутствии сыворотки, а также с К+ и испытуемыми сыворотками.

Титром сыворотки считают последнее разведение, при котором наблюдается четкая агглютинация не менее чем на 3 креста (+++). Диагностические титры реакции с эритроцитарными диагностикумами указаны в инструкции по применению.